透明质酸测定方法及其临床意义南昌铁路中心医院陆迪生综述透明质酸,是一种线性分子的聚糖,这种胺基多糖是结缔组织基质的主要成份,由纤维母细胞合成,被特异的透明质酸酶降解,最近的研究证明,循环血液中的被肝脏迅速有效地移去,主要是由肝窦上皮细胞将其摄取并降解。虽早在六十年代前就已发现,由于缺乏足够敏感特异的测定方法而限制了它的临床应用研究,近十年左右随着各种测定方法的不断涌现,使含量测定达到精确的程度,并清楚地反映出类风湿性关节炎、肝病、某些肿瘤和硬皮病患者样品内均明显增高,尤其测定在肝硬化诊断上优于所有常规肝功试验,肝硬化患者血清较正常人升高一倍,曲。等认为侧定可作为肝病严重程度的指标。国内张世兰等
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在巨性肝病、肝硬化组增高幅度大于皿型前胶原肤和板层素在慢活肝组中增高大于皿型前胶原肤,在迁肝中则与对照组无差别。由此可见,测定是一项极有价值的肝病诊断指标,为此对其测定方法和临床意义作一简要综述。一、测定方法、生化方法最早测定的方法是等介绍的咔哇显色比色法,在硼离子和浓硫酸介质中经加热分子内的糖醛酸与咔哩反应,生成红色复合物,这一反应产生的颜色稳定,但测定的纷性范围为么一盯玩灵敏度低,不能用于测定血清内微量,同时样品中的单糖寡糖及其它糖胺多糖也可产生颜色反应,故特异性也不高,只能用于定量纯品和关节液内的含量。为提高特异性等人从链霉菌中分离出一种对特异的降解酶,使降解为不饱和的或一寡糖,叮等利用该酶特异地水解,所形成的寡糖经过碘酸氧化再与硫巴比妥酸反应显色,最后以正丁醇抽提,在测定其吸光值,建立了特异性高的化学测定法。但其灵敏度只达林‘水平。由于的低浓度存在和分子量差异的特点一般生化方法难以准确定量,而分子量大小的变化又被认为可能是某些肿瘤的标志。因此采用测定既可了解分子量的变化和分布又可进行定量,随着仪器的普及和提高,相信这一方法将会成为常规实验室的一个项目。、免疫分析方法沙等从牛鼻软骨中提取到一种能被集聚的蛋白多糖,此后又在此种蛋白多糖中分离出能特异识别的片段。至年。孟利用一亲和层析,从牛鼻软骨中分离出与高度特异结合的透明质酸结合蛋白一,证明其含结合部份和连接蛋白两部份,后者的二,的。具有加强与结合蛋白间结合的作用。年,等从人脑提取到一种结合糖蛋白命名为连接素。·也有人从鼠脑中提取了类似物质。尽管这些结合蛋白以不同方法从不同种属动物组织中提出,其结构差异尚未完全明了,但它们的被发现以及它们与免疫学方法的结合,建立了许多特异敏感的检测方法,其检测限达以至水平。国外资料中免疫学检测方法较多,具实用的有放免和酶免疫方法二类,尤以酶免疫方法为多。国内的年张鲁榕等在分子上偶联一特定基因,使’艺‘能标记,建立了竟争性放免分析法,目前按此方法由上海医学研究所生产商品药盒,使测定血清内成为可能,是国内目前唯一的一种测定药盒。其反应体系是先将样品和限量结合,再加入‘“一,竟争剩余,再加入第一抗休抗,最后加入相应第二抗体,以使复合物沉淀,测定沉淀的。药盒可用二个月,检测灵敏度达‘。测得的正常人血清含量为一,操作时间为小时可出结果。原药盒的不足之处是最大结合率在以内,各
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管间落差小,有时标准序列的斜率不够礴意,据陈金国等介绍药盒的非特异结合率偏高,近年经海军医学研究所改进,最大结合率可达,非特异结合率在左右,但受同位素半衰期和标记物脱碘的影响,使用期较短,且受检测仪器限制,不可能普遍开展这一侧定。因此,开发酶免疫药盒,是进一步推广这一项测定使之常规化的关键。、酶免疫试验中代
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性的方法有年介绍用牛鼻软骨中提取的蛋白多糖为结合剂,同时以单休免疫家兔获得主要对一单体、硫酸软骨素和结合片段起反应的抗体,建立了一种固相免疫方法,反应系统中先以鱼精蛋白处理微板,以增加的吸附,包被于微板后,加孵育,再加抗反应一小时,洗涤后加,抗兔酶结合物,孵育后,洗涤加底物显色。这一方法具较高特异性、操作简便、快速,作者还用,,单抗体代替多抗进行对比,发现特异性相同。等以包被固相载体,加入样品与之结合,洗涤后再加入生物素标记的,最后加亲和素酶结合物反应后与底物显色,这种夹心法,试剂制备简单,可在六小时内完成测定操作,批内为一易于推广,但不能结合小于个寡糖的,故其测得正常人的含量仅为一,用此法测得的类风湿关节炎患者血清中明显增高,一,等用包被酶标板样品然后加入生物素化的人软骨,再加入亲和素一复合物,最后加酶底物显色,进行定量分析,检测灵敏度可达水平,且省去了制备抗体的麻烦,由于其检测灵敏度高、样品用量仅,在高度稀释后,避免了样品中一些血清蛋白及天然抗体的可能干扰,尽管国外报告的许多酶免疫方法尚未商品化,但从简便易行的优点看,今后定会得到迅速开发和发展。二、临床应用血液中的主要靠肝窦上皮摄取后降解清除,而糖胺类聚糖又与肝纤维化有联系。测定反应了肝脏内皮细胞的功能,已被许多研究证实对慢性肝病的诊断是优于其它常规肝功的一个新项目。下接页上接页我科使用海军医学研究所药盒三年以来,发现少你寸惺肝和肝硬化病毒和吸血虫以及酒精性确是一项灵敏的指标,大部份肝癌患者也明显增高,但不及肝硬化患者增高的幅度大。张世兰等使用海军医学研究所药盒和西德公司的、二种药盒测定了那例慢性肝病患者血清,发现慢性肝三种指标一与正常人比较均无明显差别。慢活肝病人血清明显增高,其均值为正常人的倍,而和二与正常人无显著差异,肝硬化组虽三种指标均与正常人有显著差异,但仍以的增高幅度为最大,其均依为正常人均值的扭倍。等人使用酶联方法测定了例各种肝病患者血中人含量变化并同时与常规肝功项口对比,结果发现,不论何种原因引起的肝硬化,包括胆汁性肝硬化,酒精性肝硬化,病毒性肝炎后肝硬化,均显著增高,与常规肝功的血清自蛋白,一球蛋白,凝血酶元时间,因子五测定显著相关,与人、、一井、一、血清一球蛋白无显若相关,此外原发肝癌则也增高,但不及肝硬化明显,脂肪肝和急性病毒性肝炎与正常对照无明显差异。等报告了例肝病患者血清和其它肝功常规项目的变化关系,发现增高与半乳糖耐量试验,血清白蛋白,凝血酶元时间,血清胆红素以及的变化相关,与、无显著相关。血清对肝硬化诊断的敏感性为。,特异性为,优于以上任何指标。此外,不少报告提及测定对类风湿关节炎的诊断具有重耍意义。参考文献从略上接封抗鼠抗体片断,再通过紫外线灯显微镜检测被结合的抗体。结果参考病毒株的初步检查结果证明,单克降找体均针对特异的病毒型,与型柯萨奇病毒或埃可毒毒无交叉反应。‘份粪便标本培养中有份出现细胞病变,其中一法鉴定出份病毒型、型场、型,而病毒中和试验仅鉴定出份病毒型、型、型。此外一法在三个粪便标本中鉴定出多种脊髓灰白质炎病毒型,而病毒中和试验仅鉴定出型,一法还在某些标本中鉴定出病毒型株和型枝,而中和试验仅发现肠病毒。上述检测结果证明,一比传统的病毒中和试验鉴定沁病毒更敏感、快速、简便,适合流行病学调查,尤其在发展中国家地方性非一。肠病毒流行率很高,致使作病毒中和试验艰难,且耗时,有时还难以解释鉴定结果,所以本法更适用。黄志强摘译、俭测与的临床关系锦州市中心医院检验科田元周凤霞崔福兰阎跃甲状冻可分泌两种主要的生理激索即,、是维持机体丫衡‘户重要的内分化激素,如呆、发生变化,可引起一系姆的临床症状,但、与弥漫性
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