杞菊地黄丸定性检查及含量测定

杞菊地黄丸定性检查及含量测定前言：实验依据：有熟地之腻补肾水，即有泽泻之宣泄肾浊以济之;有英肉之温涩肝经，即有丹皮之清泻肝以佐之;有山药收摄脾经,即有获菩之淡渗脾湿以和之。药止六味,而大开大合，三阴并治，询补方之正鹊也”本方配伍具有“三补”“三泻”的特点,但中熟地黄用量是山萸肉、山药两药之和，且三辛佣明显重于三泻。枸杞和菊花增加了清肝明目的效果。现对杞菊地黄丸中各味药材进行定性鉴别和含量测定。关键词;杞菊地黄丸；定性鉴别；含量测定；地黄（鲜跃全）定性鉴别（TLC法）实验仪器：超声发生器、研钵、烧杯、微量移液管、、吹风机、研钵、烧杯、硅胶G薄层板、实验材料：杞菊地黄丸熟地黄泽泻茯苓枸杞子牡丹皮山茱萸山药细粉菊花实验试剂：乙酸乙酯、冰醋酸、10%硫酸、蒸馏水正丁醇、甲苯、冰醋酸、无水乙醇、10%硫酸、蒸馏水试验方法1・1供试品溶液的制备1.1.1取杞菊地黄丸（浓缩丸）6g，研碎，加乙醇超声处理分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇使溶解，作为供试品溶液。1.1.2供试品溶液的制备称取颗粒剂2.2g，研磨成细粉，加甲醇40ml，超声振荡30min。过滤。滤液浓缩至干，加乙酸乙酯2ml溶解，得供试液。1.2对照品的制备另取毛蕊花糖苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。1・3对照药材的制备称取熟地黄浸膏粉0.5g,按照供试品溶液制备方法，制得熟地黄药材的对照液。1.4阴性对照液的制备按处方比例，取除去熟地黄以外的其余药材，同供试品溶液制备方法分别制成阴性对照液。称取泽泻0.75g、茯苓0.75g,30ml水加热回流提取1个小时，过滤，提取液浓缩至一定浓度；取枸杞子0.5g、牡丹皮0.75g,山茱萸1g和菊花0.5g,70%乙醇加热回流提取1个小时，过滤，浓缩成适当浓度；合并以上两种浓缩液，加山药细粉lg;加70%乙醇20mL，加热回流提取1个小时，滤过，蒸干，加适量水溶解，分别用10ml乙酸乙酯萃取两次，合并萃取液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为阴性对照溶液。1.5薄层色谱法1.5.1照薄层色谱法《中国药典》（2010年版）附录YIB试验，吸取上述溶液各5uL,分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯一乙酸乙醋一冰醋酸（（24:8:1）为展开剂展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。1.5.2薄层色谱照薄层色谱法《中国药典》（2010年版）附录YIB试验，吸取上述溶液各5uL,分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水-甲醇（6:3：3：2）为展开剂展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105C加热至斑点显色清晰，显相同颜色的斑点且阴性对照液色谱在该位置上不显斑点。2.山药（周开放）【性味与归经】味甘，性平。归脾、肺、肾经。【功能与主治】补脾养胃，生津益肺，补肾涩精。实验材料：回流装置、冷凝装置、水浴锅、坩堀、烧杯、微量移液管、硅胶G薄层板、吹风机。实验试剂：乙酸乙酯、甲醇、浓氨试液、无水乙醇、10%磷钳酸。试验方法2.1供试品溶液的制备取本品（杞菊地黄丸）粉末5g,加二氯甲烷30ml，加热回流2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加二氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。2.2对照品的制备另取山药对照药材5g,同法制成对照药材溶液。对照药材加二氯甲烷同法制成对照药材溶液。2.3阴性对照液的制备按处方比例，取除去山药以外的其余药材，同供试品溶液制备方法分别制成阴性对照液。1•称取泽泻0.75g、茯苓0.75g和熟地黄2g,30ml水加热回流提取1个小时，过滤，提取液浓缩至一定浓度；2•取枸杞子0.5g、山茱萸1g、牡丹皮0.75g和菊花0.5g,70%乙醇加热回流提取1个小时，过滤，浓缩成适当浓度；3.合并以上两种浓缩液;加70%乙醇20mL,加热回流提取1个小时，滤过，蒸干，加适量水溶解，分别用10ml乙酸乙酯萃取两次，合并萃取液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为阴性对照溶液。2.5薄层色谱法试验照薄层色谱法《中国药典》（2010年版）附录YIB试验，吸取上述溶液各5uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液（9：1：0.5）为展开剂展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点且阴性对照液色谱在该位置上不显斑点。3•茯苓（刘保松）实验器材：50ml圆底烧瓶，冷凝管，蒸发皿，水浴锅，过滤装置，硅胶G薄层板，紫外 检测 工程第三方检测合同工程防雷检测合同植筋拉拔检测方案传感器技术课后答案检测机构通用要求培训 仪，吹风机实验材料：茯苓对照药材、杞菊地黄丸实验试剂：乙醚，甲醇，甲苯，乙酸乙酯，甲酸，2%香草醛硫酸溶液，乙醇。3.1供试品溶液制备取杞菊地黄丸浓缩丸6g,研碎，加乙醚50ml（量筒），超声处理10分钟，滤过（滤纸，漏斗），滤液蒸干（蒸发皿，水浴锅），残渣加甲醇1ml使溶解（移液管），作为供试品溶液。3.2对照品药材制备取茯苓对照药材1g，同法制成对照药材溶液。3.3阴性对照溶液制备按处方比例，取除去茯苓以外的其余药材，同供试品溶液制备方法制成缺茯苓阴性对照液。3.4薄层色谱法试验照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯一乙酸乙酯一甲酸（（20:5:0.5）为展开剂（移液管），展开，取出，晾干，喷以2%香草醛硫酸溶液一乙醇（4：1）混合溶液，在105C加热至斑点显色清晰（吹风机）。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。或者照薄层色谱法（中国药典20015年版中国药典）试验，吸取上述溶液各5uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯一乙酸乙酯一冰醋酸（（24:8:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。4.泽泻（王金龙）实验器材：氧化铝柱，水浴锅，蒸发皿，过滤装置，硅胶H薄层板，紫外检测仪，吹风机实验材料：泽泻对照药材、杞菊地黄丸实验试剂：乙酸乙酯，23-乙酰泽泻醇B对照品，环己烷，乙酸乙酯，5%硅钨酸乙醇。4.1供试品溶液制备取杞菊地黄丸浓缩丸6g,研碎，加乙酸乙酯20m1（量筒），超声处理30分钟，滤过（滤纸，漏斗），滤液加于氧化铝柱（200-300目,5g，内径为lcm，干法装柱）上，用乙酸乙酯10ml洗脱（移液管），收集洗脱液，蒸干，残渣加乙酸乙酯lml（移液管）使溶解，作为供试品溶液。4.2对照品药材制备取泽泻对照药材1g,同法制成对照药材溶液。4.3对照品溶液制备另取23-乙酰泽泻醇B对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。4.4阴性对照溶液制备按处方比例，取除去泽泻以外的其余药材，同供试品溶液制备方法制成缺泽泻阴性对照液。称取泽泻0.75g、熟地黄2g，30ml水加热回流提取1个小时，过滤，提取液浓缩至一定浓度；取枸杞子0.5g、山茱萸1g、牡丹皮0.75g和菊花0.5g,70%乙醇加热回流提取1个小时，过滤，浓缩成适当浓度；合并以上两种浓缩液，加山药细粉1g;加70%乙醇20mL，加热回流提取1个小时，滤过，蒸干，加适量水溶解，分别用10ml乙酸乙酯萃取两次，合并萃取液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为阴性对照溶液。4.5薄层色谱法试验照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶H薄层板上，以环己烷一乙酸乙酯（1:1）为展开剂（移液管），展开，取出，晾干，喷以5%硅钨酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰（吹风机）。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。或者照薄层色谱法（中国药典20015年版中国药典）试验，吸取上述溶液各5uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯一乙酸乙酯一冰醋酸（（24:8:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。5•丹皮（雷铭宇）仪器：加热回流装置、薄层板、紫外光灯材料：乙酸乙酯、蒸馏水、甲醇、牡丹皮对照药材、乙醚、丙酮、丹皮酚对照品、环己烷、盐酸、三氯化铁、乙醇定性鉴别（TLC法）5.1供试品溶液的制备取本品15g（天平），研碎，加水100ml，加热回流30分钟，放冷，离心，取上清液，用乙酸乙酯50ml（50ml量筒）振摇提取，分取乙酸乙酯液，蒸干（水浴锅），残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。5.2对照药材溶液提取取牡丹皮对照药材1g（天平），研碎，加乙醚40ml，加热回流1小时，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加丙酮lml（量筒）使溶解，作为供试品溶液。5.3对照品溶液的制备取丹皮酚对照品，加丙酮制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液。5.4阴性对照溶液的制备取处方中除丹皮外的其余药味，称取泽泻0.75g、茯苓0.75g、熟地黄2g和山茱萸1g，30ml水加热回流提取1个小时，过滤，提取液浓缩至一定浓度（水浴锅）；取枸杞子0.5g和菊花0.5g,70%乙醇加热回流提取1个小时，过滤，浓缩成适当浓度；合并以上两种浓缩液，加山药细粉1g;加70%乙醇20mL，加热回流提取1个小时，滤过，蒸干，加适量水溶解，分别用10ml乙酸乙酯萃取两次，合并萃取液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为阴性对照溶液。5.5.1薄层条件照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述三种溶液各10ul分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条状，以环己烷-乙酸乙酯（3：1）为展开剂（层析缸），展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性5%三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的条斑。5.5.2薄层板硅胶G薄层板20cmX20cmX0.4cm,105C，活化30min备用；展开剂:-环乙烷-乙酸已酯-冰醋酸（10：1：0.1）;斑点观察:置紫外灯下（久=254nm）检识定位5・6丹皮酚的含量测定5.6.1材料与方法紫外分光光度计、型电热恒温鼓风干燥箱、紫外 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 仪剂均为99.9%无水乙醇、水为二次蒸馏水5.6.1.2材料牡丹皮、丹皮酚对照品5.6.1.3对照品 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 溶液的制备精确称取丹皮酚对照品0.005g置于50ml烧杯中，以无水乙醇溶解'转至100ml容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，得到50ug/ml的丹皮酚对照品溶液5.6.1.4结果与分析5・6・1・4・1测定波长的选择以无水乙醇为对照品，在274nm出测的最大波长5.6.1.4.2线性关系考察分别吸取对照品溶液0.5ml，1ml，1.5ml，2ml，2.5ml，3.0ml，3.5ml，4ml，置于25ml容量瓶中！，用无水乙醇稀释至刻度摇匀。以无水乙醇为空白溶液在274nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标样品浓度为横坐标绘制标准曲线。5.6.1.4.3丹皮酚含量测定准确称取牡丹皮粉末3.000g（分析天平），置于50ml锥形瓶中，加入25ml无水乙醇，60度恒温水浴2h,趁热过滤，置于25ml容量瓶中用无水乙醇溶液定容，作为供试品溶液。量取5份0.1ml牡丹皮供试品溶液分别置于25ml容量瓶中。用无水乙醇定容至刻度，摇匀，以无水乙醇为空白对照，于274nm波长处测定吸光度，测量三次，取平均值。丹皮酚含量测定结果如下表。吸光度检出量ug/ml平均检出量ug/ml丹皮酚含量6•菊花（邬学良）定性鉴别（TLC法）实验器材：水浴锅，超声提取仪，过滤装置，硅胶H薄层板，聚酰胺薄膜，紫外检测仪、锥形瓶、分析天平、回流装置、蒸发皿、5ml量瓶、25ml棕色量瓶实验材料：菊花，绿原酸供试品、杞菊地黄丸实验试剂：稀盐酸，乙酸乙酯，甲醇，乙醇，正丁醇，甲酸，冰醋酸、氯仿实验方法6.1供试品溶液制备方法6.1.1取本品杞菊地黄丸（浓缩丸），研细（过一号筛）取约1g，精密称定（分析天平），置锥形瓶中，精密加人50%甲醇50ml,称定重量，加热回流2小时,冷却，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取（10ml移液管）续滤液10ml，蒸干残渣加氯仿5ml，浸渍3分钟，弃去氯仿液，残渣挥去氯仿（水浴，蒸发皿），加水适量使溶解,并转移5ml棕色量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。6.2对照品溶液的制备取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1ml含绿原酸35pg的溶液，即得（10°C以下保存）。6.3对照药材溶液制备另取菊花对照药材粉末1g,同供试品溶液制法制成对照药材溶液。6.4阴性对照溶液的制备取处方中除菊花外的其余药味，按上述供试品溶液制备阴性对照溶液。称取泽泻0.75g、茯苓0.75g和熟地黄2g，30ml水加热回流提取1个小时，过滤，提取液浓缩至一定浓度；取枸杞子0.5g、牡丹皮0.75g和山茱萸1g，70%乙醇加热回流提取1个小时，过滤，浓缩成适当浓度；合并以上两种浓缩液，加山药细粉1g；加70%乙醇20mL，加热回流提取1个小时，滤过，蒸干，加适量水溶解，分别用10ml乙酸乙酯萃取两次，合并萃取液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为阴性对照溶液。6.5照薄层色谱法6.5.1薄层板薄层板：硅胶板H乙酯-甲酸-冰醋酸-水（1：15：1：1：2）的上层溶液，乙酸乙酯-甲酸-水（7：2.5：2.5）的上层溶液，乙酸乙脂：甲酸:水：乙醇（1:1:1:0.2）上层液，乙酸乙酯-正丁醇-水（4:5:1）的上层溶液6.5.2薄层板聚酰胺薄膜板展开剂：36%乙酸吸取上述四种溶液各0.5〜1》l,分别点于同一硅胶板上，用展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。7.山茱萸（陈明璐）实验仪器：加热回流装置、高效液相色谱仪、渗漏装置、吹风机、十八烷基硅烷键合硅胶实验材料：杞菊地黄丸、蒸馏水、乙酸乙酯、甲醇、山茱萸药材、熊果酸对照品、甲苯、乙酸乙酯、冰醋酸、磷酸、莫诺苷、马钱苷7.1.供试品溶液的制备取本品15g，研碎，加水100ml，加热回流30分钟，放冷，离心，取上清液，用乙酸乙酯50ml振摇提取，分取乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。7.2对照药材溶液的制备取山茱萸对照药材1g,加乙醚40ml，加热回流1小时，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯lml使溶解，作为对照药材溶液。7.3样品溶液的制备另取熊果酸对照品，加乙酸乙酯制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液7.4阴性对照品溶液的制备按处方比例和制法制备不含山茱萸的阴性样品，制成阴性样品溶液。称取泽泻0.75g、茯苓0.75g和熟地黄2g，30ml水加热回流提取1个小时，过滤，提取液浓缩至一定浓度；取枸杞子0.5g、牡丹皮0.75g和菊花0.5g，70%乙醇加热回流提取1个小时，过滤，浓缩成适当浓度；合并以上两种浓缩液，加山药细粉1g；加70%乙醇20mL,加热回流提取1个小时，滤过，蒸干，加适量水溶解，分别用10ml乙酸乙酯萃取两次，合并萃取液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为阴性对照溶液。7.5定性检测照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取〔鉴别〕（5）项下的供试品溶液及上述对照药材溶液和对照品溶液各5M,分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸（24:8:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点。7.5山茱萸的含量测定照高效液相色谱法（通则0512）测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A,以0.3%磷酸溶液为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱；莫诺苷和马钱苷检测波长为240nm，柱温为40°C。理论板数按莫诺苷、马钱苷峰计算均应不低于4000。时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）0-55—895—925-2089220-358—2092—8035-4520—6080—4045-5560407・5・1•对照品溶液的制备取莫诺苷对照品、马钱苷对照品对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成每lml中含莫诺苷与马钱苷各20m的混合溶液，即得。7.5.2.供试品溶液的制备取重量差异项下的本品，研细，取约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25ml，密塞，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。7・5・3含量测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10M,注入液相色谱仪,测定，即得。8.枸杞（李帅）实验器材：水浴锅，离心机，回流装置（圆底烧瓶，冷凝管），抽滤装置（或漏斗），毛细管，层析缸，硅胶G薄层板，紫外检测仪，高相液相色谱仪实验试剂与材料：乙酸乙酯，冰醋酸，氯仿，甲苯，甲醇，甲酸，硫酸乙醇溶液，熊果酸对照品，杞菊地黄丸，枸杞子，山茱萸薄层层析8.1•供试品溶液的制备8・1・1取本品15g，研碎，加水100ml，加热回流30分钟，放冷，离心,取上清液，用乙酸乙酯50ml振摇提取，分取乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。8.1.2取本品粉末3.5g，加水煮沸，放冷，滤过，滤液用醋酸乙酯振摇提取，提取液浓缩至1ml，作为供试品溶液。8.2对照药材溶液的制备另取枸杞子对照药材0.5g，加水50ml，加热回流30分钟，放冷，离心，取上清液，用乙酸乙酯30ml振摇提取，分取乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为对照药材溶液。8.3阴性样品溶液的制备按处方比例和制法制备不含枸杞子的阴性样品，制成阴性样品溶液。称取泽泻0.75g、茯苓0.75g和熟地黄2g，30ml水加热回流提取1个小时，过滤，提取液浓缩至一定浓度；取山茱萸1g、牡丹皮0.75g和菊花0.5g，70%乙醇加热回流提取1个小时，过滤，浓缩成适当浓度；合并以上两种浓缩液，加山药细粉1g；加70%乙醇20mL,加热回流提取1个小时，滤过，蒸干，加适量水溶解，分别用10ml乙酸乙酯萃取两次，合并萃取液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为阴性对照溶液。8.4定性检测8.4.1照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述三种溶液各10M，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（15:2:1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的斑点。8.4.2吸取上述三种溶液各5M,分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-氯仿-甲酸（3：2：1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视。参考文献：1.2015年《中国药典》第一部中国民族民间医药2015年8月第24卷第16期ChineseJournalofEthnomedicineandEthnopharmacy,2015，Vol.24，No.16第41卷第12期2013年6月广州化工GuangzhouChemicalIndustryVol.41No.12June.2013[1]邓如伟，冉兰，李颖，张榕.杞菊地黄颗粒中六味药材的薄层色谱鉴别[J].华西药学杂志，2005,03:264-266.5•李永霞，靳湘，杜霞•高效液相色谱法测定杞菊地黄丸中绿原酸的含量[J].中国医院药学杂志.1549-1550.1•杞菊地黄丸中山药的测定杞菊地黄丸中茯苓的测定杞菊地黄丸中泽泻的测定杞菊地黄丸中菊花的测定杞菊地黄丸中枸杞的测定杞菊地黄丸中丹皮的测定杞菊地黄丸中山茱萸的测定读书的好处2、书山有路勤为径，学海无涯苦作舟。3、读书破万卷，下笔如有神。4、我所学到的任何有价值的知识都是由自学中得来的。——达尔文5、少壮不努力，老大徒悲伤。6、黑发不知勤学早，白首方悔读书迟。——颜真卿7、宝剑锋从磨砺岀，梅花香自苦寒来。8、读书要三到：心到、眼到、口到9、玉不琢、不成器，人不学、不知义。10、一日无书，百事荒废。一一陈寿11、书是人类进步的阶梯。12、一日不读口生，一日不写手生。13、我扑在书上，就像饥饿的人扑在面包上。——高尔基14、书到用时方恨少、事非经过不知难。——陆游15、读一本好书，就如同和一个高尚的人在交谈——歌德16、读一切好书，就是和许多高尚的人谈话。——笛卡儿17、学习永远不晚。——高尔基刘向18、少而好学，如日岀之阳；壮而好学，如日中之光；志而好学，如炳烛之光。19、学而不思则惘，思而不学则殆。——孔子