肾综合征出血热监测方案(2013版)

鲁卫疾控字〔2013〕7号关于下发《山东省肾综合征出血热监测方案（2013版）》的 通知 关于发布提成方案的通知关于xx通知关于成立公司筹建组的通知关于红头文件的使用公开通知关于计发全勤奖的通知 各市卫生局，省疾病预防控制中心：肾综合征出血热（俗称流行性出血热,以下简称出血热）是我省重点防控的传染病之一，2012年以来我省疫情明显上升，局部地区发病率、病死率上升幅度较大。为 规范 编程规范下载gsp规范下载钢格栅规范下载警徽规范下载建设厅规范下载 出血热监测工作，进一步掌握流行规律，为开展科学防控提供依据，我厅制定了《山东省肾综合征出血热监测方案（2013版）》,现印发给你们，并提出以下要求，望认真贯彻落实。据专家预测，按照本病的流行规律，我省出血热将进入新一轮高发期，疫情可能继续上升。各地要高度重视出血热监测和防控工作，切实加强领导，积极协调财政部门落实防控经费，确保出血热监测和防控工作正常开展。各级卫生行政部门要组织制订本地区的监测实施方案，将病例监测、病例诊断报告、暴发调查处置、宿主动物监测、实验室检测等各项指标层层分解，落实责任。医疗机构要做好病例报告、诊治和实验室诊断等工作，疾控机构要做好病例流调、实验室核实诊断和宿主动物调查等工作。各地要加强对各级各类医疗卫生技术人员的知识培训，提高疫情监测报告与处置水平。山东省卫生厅2013年2月7日山东省肾综合征出血热监测方案（2013版）肾综合征出血热（HFRS）是由汉坦病毒引起的一种自然疫源性疾病，是《中华人民共和国传染病防治法》规定的乙类传染病。世界上已有30多个国家发现肾综合征出血热，主要分布在欧亚大陆，我国发病人数占世界报道病例的90%以上。我省是我国出血热报告发病的高发省份之一。该病在我省分布范围广、疫区类型复杂，患者主要以青壮年人群为主，病死率较高，严重危害人民群众健康。鼠类等啮齿动物为出血热的自然宿主和主要传染源。根据出血热的传染源不同，我省疫区主要为姬鼠型、家鼠型以及二者的混合型3种疫区类型，其中黑线姬鼠为姬鼠型出血热的主要宿主动物和传染源,褐家鼠为家鼠型出血热的主要宿主动物和传染源。由于出血热流行受宿主鼠类和环境等因素影响较大，疫区类型有发生变化的可能，疫情呈高度散发，防控形势不容乐观。为进一步加强和规范全省肾综合征出血热监测工作，为制订科学有效的防控策略和措施提供科学依据，特制订本方案。一、目的（一）及时发现报告出血热病例，了解其疫情动态和流行病学特点。（二）了解宿主动物种群构成及其带毒状况动态变化。（三）了解发病危险因素，为制订防治措施提供依据。二、病例定义与诊断（一）诊断原则。根据患者的流行病学史、临床表现及实验室检查结果进行综合判断。（二）诊断 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 。1.流行病学史在出血热疫区及流行季节，或发病前两个月内有疫区旅居史，或发病前两个月内有与鼠类或其排泄物（尿、粪）/分泌物（唾液）直接或间接接触史。2.典型临床表现（1）早期症状和体征：起病急，发冷，发热。（2）全身酸痛，乏力，呈衰竭状。（3）头痛，眼眶痛，腰痛（三痛）。（4）面、颈、上胸部充血潮红（三红），呈酒醉貌。（5）眼睑浮肿、结膜充血，水肿，有点状或片状出血。（6）上腭粘膜呈网状充血，点状出血。（7）腋下皮肤有线状或簇状排列的出血点。（8）束臂试验阳性。3.病程经过典型病例有发热期、低血压休克期、少尿期、多尿期和恢复期五期经过。前三期可有重叠，并存在有大量五期不全的异型或轻型非典型病例。家鼠型或以家鼠型为主的出血热疫区，部分病例临床表现较轻，症状或/和体征可较轻或不典型。4.实验室检查（1）血检查早期白细胞数低或正常，3～4日后明显增多，杆状核细胞增多，出现较多的异型淋巴细胞，血小板明显减少。（2）尿检查尿蛋白阳性，并迅速加重，伴显微血尿、管型尿。（3）血清特异性IgM抗体阳性。（4）恢复期血清特异性IgG抗体比急性期有4倍以上增高。（5）从病人血清中分离到汉坦病毒和/或检出汉坦病毒RNA。5.病例分类（1）疑似病例：具备1、2.（1）、2.（2）和2.（3）～2.（8）之一以上者；或虽无明确流行病学史但临床症状典型者。（2）临床诊断病例：疑似病例加3、4.（1）、4.（2）。（3）确诊病例：临床诊断病例加4.（3）、4.（4）、4.（5）中的任一项。三、监测内容和方法（一）病例发现与报告。按照《中华人民共和国传染病防治法》和《突发公共卫生事件与传染病疫情监测信息报告管理办法》，各级各类医疗机构、疾病预防控制机构、卫生检疫机构执行职务的医务人员发现疑似、临床诊断或实验室确诊病例，应在诊断后24小时内填写报告卡进行网络直报。不具备网络直报条件的应在诊断后24小时内向相应单位送（寄）出传染病报告卡，县级疾病预防控制机构和具备条件的乡镇卫生院收到传染病报告卡后立即进行网络直报。（二）病例的流行病学调查。县级疾病预防控制中心接到出血热疑似、临床诊断和实验室确诊病例后，应在72小时内完成流行病学调查。调查由专业人员具体负责，填写肾综合征出血热流行病学个案调查表（见附表1），调查表格填写要详细，避免缺项漏项。县级疾病预防控制中心负责将个案调查表录入数据库，于每月10日前将截至上月底的数据库上报市疾病预防控制中心，市疾病预防控制中心核对汇总后于每月15日前上报省疾病预防控制中心，省疾病预防控制中心每月汇总、审核数据库，评估个案调查质量，报告省卫生厅并向各市反馈。发生死亡病例的，由市疾病预防控制中心负责调查，独立病例调查应包括流行病学、临床学和实验室检测等内容，并进行发病死亡原因分析。除开展流行病学个案调查外，每例死亡病例均应详细撰写死亡调查报告，并于病例死亡1周内上报当地卫生行政部门和省疾病预防控制中心。（三）病例的血清学诊断及复核。各级各类医疗机构要对所有接诊的疑似病例、临床诊断病例，采集急性期血标本，并采用国药准字号的血清学诊断试剂进行检测，实验室诊断结果要录入疫情报告网络，在报告卡备注栏目填写检测结果，并及时进行网络订正疫情报告。医疗机构对所有实验室检测的出血热病例急性期血标本要留存，对于住院超过2周的病例要及时采集恢复期标本进行备检。县级疾病预防控制中心要及时收集医疗机构留存的急性期和恢复期血清标本，-20℃以下冷冻保存，每月送市级疾病预防控制中心进行复核，市疾病预防控制中心每月上报实验室检测结果。有条件的县级疾病预防控制中心要开展实验室检测和血清学复核。（四）暴发疫情调查处置。1.暴发疫情的定义。1周内，在同一个自然村、社区、建筑工地、学校等集体单位发生2例病例及以上，或者发送死亡病例1例及以上。2.暴发疫情的报告。如果暴发疫情达到《全国突发公共卫生事件应急预案》规定的级别，则按相应要求通过突发公共卫生事件报告管理信息系统报告。县级疾病预防控制中心接到暴发疫情后，应立即向同级卫生行政部门进行报告，并逐级报告上级疾病预防控制中心。3.暴发疫情的调查。暴发疫情的调查由县级卫生行政部门组织，县级疾病预防控制中心负责具体实施。县级疾病预防控制中心接到疫情报告后，应在24小时内到达现场开展调查。（1）核实诊断①病例核实：对报告的病例逐个进行详细的个案调查，确定感染来源。②疫情核实：了解暴发点近期有无类似病例发生，对发现的可疑病例进行个案调查，了解三间分布情况，并对所有病人进行血清学或病原学检测进行核实。（2）基本情况调查①详细调查暴发点的人口资料、患者及居民居住环境、自然地理景观、气象资料等流行因素。②了解暴发点所在地的既往疫情情况和流行强度。③了解暴发点所在地出血热宿主动物的种类、分布、密度及感染的既往情况。（3）宿主动物调查在暴发点的居民区（患者居住地及周围）和野外进行宿主动物种类、密度调查，捕获数量各不少于50只，对捕获的宿主动物进行感染状况调查。（4）控制措施。在暴发疫情核实后，立即对暴发点采取灭鼠防鼠、预防接种等综合性防制措施。①灭鼠：按照卫生部出血热防治工作的有关要求进行灭鼠。灭鼠3周后的鼠密度应达到室内1％以下、室外3％以下。②应急预防接种：对暴发点内的高危人群实施应急预防接种，接种率应达到75％以上，防止疫情蔓延。③环境治理：大力开展爱国卫生运动，整治和改善环境卫生条件。④健康教育：利用各种媒体及有效方式，在发生暴发疫情的地区，开展出血热防病知识宣传，增强群众防病意识。（5）总结。暴发疫情处理后，应及时收集、整理、统计、分析调查资料，并在疫情处理结束后7日内，写出详细的暴发疫情调查报告，上报本级卫生行政部门和上级疾病预防控制中心。同时，将个案调查表录入数据库，一并上报。（五）宿主动物的监测。各地要加强宿主动物的感染调查和监测工作。按照《全国肾综合征出血热监测方案（试行）》的要求，国家级和省级出血热监测点要全面规范开展宿主动物的感染情况监测、环境监测等各项工作;暴发点要开展宿主动物的感染调查;疫情高发市要建立宿主动物监测点，每市选择1～2个高发县，每年至少开展2次宿主动物感染调查。对捕获的宿主应及时采集合格的肺脏标本，送市疾病预防控制中心进行核酸检测。1.监测地区的选择。监测点以县为单位，每个监测点要选择近2～3年疫情高发的2～3个乡镇开展监测工作，每个监测乡镇应选择在有疫情的2～4个村开展监测工作。室内宿主动物监测，应选择在病例住所及其周围住户和居住、卫生、生活条件较差的居民区进行。野外宿主动物监测，应选择在病例发病前活动区域和监测村的河渠、道路两旁、田埂、坟地和场院等鼠类易于栖息的地方进行。2.监测时间。在家鼠型和姬鼠型出血热发病高峰出现前1个月，即每年的3月和10月。3.监测对象和数量。鼠类调查每次布夹不得少于800夹次，其中室内和室外均不少于400夹次。对捕获的鼠，应采集整个鼠肺标本并制备干血滤纸片，进行检测。每个监测点在居民区和野外各检测优势鼠种50只以上。4.监测方法。居民区室内每15平方米放鼠夹1个。野外放鼠夹时，行距50米，夹距5米，天黑前放完，天亮后收回。捕鼠诱饵统一采用生花生米。捕鼠时应详细 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捕鼠的日期、地点、环境、放夹数、捕获鼠数等内容，并计算鼠种构成、鼠密度、鼠携带病毒率及鼠血抗体阳性率等内容。（六）病原学监测。市级疾病预防控制中心对辖区内送检的出血热病例急性期血标本和宿主动物标本，要在1月内采用PCR方法进行病毒核酸检测和鼠肺抗原检测，检测呈阳性的标本要及时送省疾病预防控制中心，进行核酸序列分析和病毒分离。市疾病预防控制中心应在收到标本1月内将病原学检测结果反馈给县级疾病预防控制中心。四、监测指标及要求（一）流行病学监测指标。1.疫情报告。医疗机构疫情报告和疫情订正率达到100%。2.个案调查。在接到疫情报告72小时内完成个案调查，及时率应达到95%以上，个案调查率和存档率应达到100%，个案调查表填写完整、字迹清晰，无漏项；数据录入和上报及时率达95%以上。3.暴发调查处置。暴发疫情调查处置率、个案调查率及病例实验室确诊率均应达到100%，宿主动物调查数量和标本复核应满足调查要求，处置措施落实过程中的各种记录表格和调查报告资料保存齐全。（二）实验室检测指标。1.病例血清诊断。医疗机构疑似病例血清学诊断检测率达到100%，疾病预防控制中心血清学符合率达到30%以上。2.病例急性期标本采集送检。以市为单位，发病1周内病例标本采集率不低于全年病例的10%，恢复期标本采集率不低于全年病例的30%；县级疾病预防控制中心应在收到病例血标本3天内进行血清学复核，及时率达到95%以上；急性期和恢复期血标本应在1月内送至市疾病预防控制中心，送检及时率和送检率均应达到100%。3.宿主动物调查。每年至少开展2次宿主动物调查，捕鼠数量要达到监测指标要求，鼠密度计算方法准确，捕鼠和采样登记表填写无漏项。鼠肺标本采集完整率达到95%以上，鼠肺新鲜合格率达到95%以上，采集后1周内送市疾病预防控制中心的及时率达100%，市疾控机构在标本采集1月内的检测完成率达100%；鼠肺阳性标本在收采集标本1月内送达省疾病预防控制中心的及时率达到95%以上。各市疾病预防控制中心每月对上送的病例标本进行血清学复核和鼠类标本核酸检测，并于每月10日前将检测结果上报至省疾病预防控制中心。对国家和省级监测点两次监测的鼠肺标本应在5月10日前、11月15日前检测完成并上报结果及阳性标本，检测和报送及时率应达到100%。（三）资料管理与利用。监测资料如个案调查表、暴发点调查处置资料、宿主动物监测资料、疫点处理资料、标本采送检登记表及检测结果记录和报告均为技术档案资料，应长期存档，基础资料应保存在县级疾病预防控制中心档案室。各地要及时分析监测资料，研判疫情趋势，指导防控工作，实行高发季节周（旬）分析研判、低发季月分析研判 制度 关于办公室下班关闭电源制度矿山事故隐患举报和奖励制度制度下载人事管理制度doc盘点制度下载 。各市于每年6月底和12月底前将半年或全年监测总结报告上报至省疾病预防控制中心。五、职责和分工（一）卫生行政部门。省卫生厅负责全省出血热监测工作的管理，制定下发全省监测方案。各级卫生行政部门负责组织开展本辖区内出血热监测工作，落实监测和防控经费，对本辖区的出血热监测工作进行督导考核，保证监测工作的顺利开展。（二）省疾病预防控制中心。1.协助省卫生厅开展监测工作的督导、考核与评估；负责全省监测工作的组织实施、技术培训和指导；指导市级疾病预防控制中心开展死亡病例和暴发疫情的调查工作。2.负责复核各市实验室检测核酸阳性的标本，进行序列测定或分离毒株。对各市实验室进行质量考核和评估。3.定期对各市的监测数据和结果进行分析，并报送省卫生厅和国家疾病预防控制中心，向各市反馈。（三）市级疾病预防控制中心。1.负责组织实施本辖区的出血热监测工作，协助开展本辖区的出血热监测督导、考核、评估工作和技术培训与指导；负责本辖区死亡病例调查与暴发疫情处置工作。2.负责出血热实验室监测工作，开展出血热病毒核酸检测和病例的血清学复核工作，并按要求及时报送结果和标本。3.定期进行疫情研判，对本辖区的监测数据进行分析、反馈，并报同级卫生行政部门和省疾病预防控制中心。（四）县级疾病预防控制中心。1.负责病例的个案调查，标本收（采）集、分离暂存，并按规定时间送至市级疾病预防控制中心。2.承担宿主动物种群、密度的监测工作和宿主动物标本的采集、保存和上送工作。3.在市疾病预防控制中心的指导下，开展死亡病例和暴发疫情的调查处理。4.定期开展疫情研判，研判结果报当地卫生行政部门和上级疾病预防控制中心。（五）医疗机构。1.各级各类医疗机构负责出血热病例的发现和报告。县级以下医疗机构发现出血热疑似病例应及时转诊。2.县级以上医疗机构承担出血热诊治，负责采集门诊和住院出血热病例的急性期、恢复期血清标本，并进行标本检测和暂存。采用血清学方法检测出血热IgM、IgG诊断病例时，应使用有国家批准文号的诊断试剂。3.协助疾病预防控制中心开展病例个案调查等监测工作。附件：1.出血热个案调查表2.市级流行性出血热病例血标本采集/送样/检测登记表3.鼠类调查标本采集/送样/检测登记表4.RT-PCR检测汉坦病毒基因及分型5.鼠脏器标本采集技术指南附件1出血热个案调查表县（市）名称：国标码：□□□□□□病例编号：□□□□□一、基本情况1.患者姓名：_________（如患者年龄<14岁，则家长姓名：_____________）2.性别：1男，2女□3.年龄：_____岁□□□4.民族：1汉族，2壮族，3维吾尔族，4其他少数民族□5.职业（1）幼托儿童（2）散居儿童（3）学生（4）教师（5）保育保姆（6）饮食从业人员（7）商业服务（8）医务人员（9）工人（10）民工（11）农民（12）牧民（13）渔（船）民（14）干部职员（15）离退人员（16）家务待业（17）其他6．现职业：□（1）小学生及儿童（2）大中学生（3）教师（4）务农（5）家政及装修业（6）驾驶及司乘人员（7）商业服务（8）医务人员（9）大中企业工人（10）个体经营（11）服务业从业人员（12）牧民（13）渔（船）民（14）干部职员（15）离退人员（16）家务待业（17）养殖业（18）外来务工（19）其他□□7．所在单位：___________________________________；联系电话：_________________8．家庭住址：____省（自治区/直辖市）____县（市区）_____乡（镇/居委会）____村（街道）9．现住址：____省（自治区/直辖市）____县（市区）_____乡（镇/居委会）____村（街道）10．现居住环境：1、市区；2、城乡结合部3、农村（街道）□11．现居住条件：1、楼房新房（＜2年）2、楼房旧房3、平房新房（＜2年）4、平房旧房□12.房屋条件1、楼房2、平房水泥地面3、平房土地面□13.现居住位置：1、村边；2、村中□二、发病情况1.发病日期：_______年______月_______日□□□□/□□/□□2.就诊日期：_______年______月_______日□□□□/□□/□□3.发病地点：_________________________________________4.住院医院：____________________5.住院号：_____________________□□□□□□6.住院日期：_______年______月_______日□□□□/□□/□□7.出院日期：_______年______月_______日□□□□/□□/□□8.入院诊断：□1出血热疑似病例，2临床诊断病例，3实验室确诊病例，4其他9、临床诊断日期：_______年______月_______日□□□□/□□/□□10.出院诊断：□1出血热疑似病例，2临床诊断病例，3实验室确诊病例，4其他11．临床分型：1轻型，2中型，3重型，4危重型□12.转归：1痊愈，2好转，3死亡（日期：_______年____月____日）□13如遇转院：1救护车并医生陪伴，2救护车无医生陪伴，3自行前往，4其他□三、症状和体征及一般实验室检查1.起病急：1有，0无□2.乏力：1有，0无□3.发热：1有，0无□4.头痛：1有，0无□5.腰痛：1有，0无□6.眼眶痛：1有，0无□7.脸红：1有，0无□8.颈红：1有，0无□9.胸红：1有，0无□10.关节痛：1有，0无□11.全身痛：1有，0无□12.腹痛：1有，0无□13.腹泻：1有，0无□14.便秘：1有，0无□15.恶心：1有，0无□16.呕吐：1有，0无□17.结膜充血：:1有，0无□18.眼睑浮肿：1有，0无□19.黄疸：1有，0无□20.腋下/上臂/胸部或其它部位有无皮肤出血点：1有，0无□如有，则出血点为：1散在，2条/线状，3簇状，4其它_________□21.口腔、鼻腔等处粘膜有无出血点：1有，0无□22.少尿或无尿：1有，0无□23.低血压：1有，0无□24.休克：1有，0无□25.白细胞计数：1正常，2增多，3减少，4未做此项检查□26.血小板减少：1有，0无，3未做此项检查□27.尿蛋白：1阳性，2阴性，3未做此项检查，9不详□28.有无尿膜状物/管型尿/血尿：1有，0无□29.束臂试验：1阳性，2阴性，3未做此项检查，9不详□30.出血时间：1正常，2延长，3缩短，4未做此项检查，9不详□31.凝血时间：1正常，2延长，3缩短，4未做此项检查，9不详□四、血清学及病原学检测结果（未做者请注明为“未做”）项目标本采集时间/检测时间检测方法检测结果出血热抗体IgGIgM汉坦病毒检测五、主要用药情况（抗生素、激素、透析、成分输血）用药名称剂量起始日期终止日期六、既往史及家庭情况1.既往是否患过此病：1是，0否，9不详□如是，诊断单位：______，时间：______年____月____日□□□□/□□/□□2．食物、粮食有无防鼠设备：1有，0无，9不详□3.流行性出血热疫苗预防接种史：1有，0无，9不详□如有，最近一次接种时间：______年____月____日□□□□/□□/□□4.有无家庭其他成员出现过类似症状：1有，0无，9不详□如有，最近一例发病时间（患者除外）：____年____月____日□□□□/□□/□□5.房内有无鼠：1有，0无□6.院内有无杂物、草堆等：1有，0无□七、接触史及有关因素调查1.发病前2个月内是否有外出（或旅游）史：1是，0否□如是，到何地：___________；外出时间：天□□返回时间：____年____月____日□□□□/□□/□□2.发病前1月内是否接触鼠类：1是，0否，9不详□如为1，接触方式：1挖鼠洞，2拿鼠，3鼠咬，4鼠尿，5鼠粪，□6鼠血污染手7手被鼠夹打伤8其他3.发病前1月内是否有昆虫叮咬史：1是，0否，9不详□4.发病前1月内是否吃过被鼠排泄物污染的食物：1是，0否，9不详□5.发病前1月内是否在野外喝过沟（塘）水：1是，0否，9不详□6.发病前1月内是否在鼠洞附近坐卧：1是，0否，9不详□7.发病前1月内是否在场院禾草上坐卧：1是，0否，9不详□8.发病前1月内是否在野外住宿：1是，0否，9不详□如是，具体地点：；其附近有无鼠、鼠洞或鼠排泄物：1是，0否，9不详□铺的类型：1床，2土炕，3地铺，4其他□9．工作场所有无鼠或鼠排泄物：1有，0无，9不详□10．发病前1月内是否接触过出血热病人血/尿：1有，0无，9不详□八、负担1、直接花费：元（主要病人药费用、治疗费用和检查费用）2、间接费用：元（主要病人和陪人误工费用、生活费用、交通住宿费用、营养费用和其他费用）调查者：调查地点：调查日期：______年___月___日附件2市流行性出血热病例血标本采集/送样/检测登记表编号姓名性别年龄职业住址（县或区、镇或乡、村或社区）发病日期采血日期检验结果IFAIgG结果/检测日期MacELISA结果/检测日期核酸（PCR）结果/检测日期填报单位：填报人：填报日期：附件3鼠类标本采集/送样/检测登记表市县（区）乡（镇）村编号鼠种性别体重（克）标本类型（肺脏、血滤纸片等）采样日期采样地点检测结果本次捕鼠率（捕鼠数/布夹笼数）居民区野外（生境）肺抗原血清抗体备注：本报表调查和上报均应每次调查每村一份，1只鼠因标本种类不同可占用多行。填报单位：填报人：填报日期：附件4RT-PCR检测汉坦病毒基因及分型材料：（1）急性期病人血清、鼠肺、鼠血或分离的汉坦病毒（2）引物：引物序列（5’～3’）位置片段（bp）逆转录引物TAGTAGTAGACTCC1~14LMS通用外引物AAAGTAGGTGITAYATCYTIACAATGTGG1910~1939M(+)GTACAICCTGTRCCIACCCC2373~2354M(-)型特异性引物汉滩病毒GAATCGATACTGTGGGCTGCAAGTGC1958~1984M(+)GGATTAGAACCCCAGCTCGTCTC2318~2340M(－)汉城病毒GTGGACTCTTCTTCTCATTATT1936~1957M(+)TGGGCAATCTGGGGGGTTGCATG2331~2353M(－)S片段引物ATGTTGCCTGGGGIAAAGAGG1200~1220S(+)GCGCACTAGTAGTAGTAGACTCCCTAAAGA1670~1696S(-)方法：（1）病毒RNA的提取：采用TRIzol按说明提取，制备模板RNA；（2）逆转录、合成cDNA：采用SuperScripTMII或AMV逆转录酶，按说明书进行；（3）PCR扩增：反应条件为95℃预变性10分钟，94℃60秒、55℃60秒、72℃45秒、扩增30～35个循环，72℃延伸12分钟。（4）扩增产物用1～2％琼脂糖凝胶电泳鉴定。若条带的分子量与预期片段大小相同，则表明为特异性扩增产物。必要时，可进行：（5）PCR片段的回收和核苷酸序列测定：切下特异分子量条带，用QIAquick凝胶回收试剂盒回收（按其说明书进行），自动测序仪测序。意义：扩增到特异性条带可确诊汉坦病毒并明确其型别，序列测定还可以对汉坦病毒的变异情况进行研究。附件5鼠脏器标本采集技术指南1、 采集标本者个人安全防护（1）从事标本采集和运送的工作人员均要经过专门培训方可进行此项工作。（2）从事标本采集和运送的工作人员均要进行免疫接种。（3）采集标本前要穿戴好防护服装、眼镜、手套，作好技术上的准备。2、采集标本的包装：要求使用符合生物安全标准的包装盒盛放标本。3、鼠标本处理（1）参考《医学动物鉴定手册》等相关专业资料，对捕获鼠鉴定鼠种、性别，称量体重等。（2）采用心脏穿刺取血法或乙醚麻醉后快速解剖直视下心脏采血法采集鼠血标本待检。如果是死鼠，在取鼠脏器的同时，用干血斑滤纸片或滤纸条（5cm×1cm）沾取鼠血，每次每只沾取2～3片,阴干后用塑料袋包好放入液氮罐中保存。（3）解剖前，将所捕宿主动物（如鼠等）置于密闭容器内，用乙醚深度麻醉。将动物（鼠）置于白瓷盘中，先用镊子夹取盘中和动物（鼠）体表的寄生物，如蜱、螨、蚤等，寄生物按鼠只分别置入1.8ml冻存管中，并标记相应鼠只的编号；然后，采用无菌方法解剖动物（鼠），取其心、肝、脾、肺、肾、脑组织等标本，置入相应编号的无菌冻存管内，于液氮罐内保存。无液氮罐保存条件的，应置－70℃环境保存。上述标本送回实验室后，鼠肺应尽快用于出血热检测。否则，应置－70℃超低温冰箱内保存。其他脏器标本用于其他病原体检测备用。4、标本的存放（1）用于病毒检测和分离的标本在－20℃或－20℃以下低温（－70℃）、液氮、或放在含50％甘油的PBS中以保持标本的感染性，应将标本盛于无菌容器内，放在密封的盒内并注明其危险性以防病毒的扩散。（2）标本要求无菌采集，－20℃保存待检。5、采集标本的运送用于病毒检测和分离的标本，应带冰、干冰或液氮条件下尽快运送至实验室。6、采集标本的保存负责标本接收和检测的实验室，接到标本以后若暂时不检测，应立即冷冻保存。用于病毒检测和分离的标本可以在－70℃长期保存，没有条件的也可以在－20℃条件下短期保存。山东省卫生厅办公室2013年2月18日印发