夜香树愈伤组织诱导初探

宜宾职业技术学院 毕业 论文 政研论文下载论文大学下载论文大学下载关于长拳的论文浙大论文封面下载 夜香树愈伤组织诱导初探 2011年6月4日 夜香树愈伤组织诱导初探 摘要 本次试验选择夜香树的茎段、叶片、叶脉作为外植体；以MS+30g/L蔗糖+7g/L琼脂为基础培养基；分别以6-BA（取3个水平：0.5、1、1.5mg/L）和NAA（取三个水平：1、2、3mg/L）三种不同激素浓度水平正交组合，来诱导愈伤组织的形成。结果表明：外植体的影响次序是茎段＞叶脉＞叶片，茎段的诱导率可达70.38%；随着6-BA的浓度降低，诱导率增加；随着NAA的浓度增高，诱导率增加；以茎段为外植体，在培养基MS+6-BA0.5mg/L+NAA3mg/L上愈伤组织诱导效果最好，诱导率达到92.31%。 关键词：夜香树；外植体；激素浓度；愈伤组织诱导 2 CallusinductionofCestrum Abstract ThetestselectionofCestrumstems,leaves,leafusedasexplant;MS+30g/Lsucroseand7g/Lagarbasemedium;respectivelywith6-BA(3levels:0.5,1,1.5mg/L)andNAA(threelevels:1,2,3mg/L)ofthreedifferentconcentrationofhormonelevelsorthogonalcombination,toinducecallusformation.Theresultsshowthat:theinfluenceofexplantsstem>leaf>orderofleaf,stemsectioninducingrateof70.38%;with6-BAconcentrationdecreased,inductionrateincreased;astheNAAconcentrationincreased,theinductionrateofincrease;tostemsasexplants,mediumMS+6-BA0.5mg/L+NAA3mg/LonCallusinductioneffectbest,inducingrateof92.31%. Keywords:Cestrumnocturnurm;Explants;Hormoneconcentration;Inductionofcallus 3 目录 工贸企业有限空间作业目录特种设备作业人员作业种类与目录特种设备作业人员目录1类医疗器械目录高值医用耗材参考目录 摘要................................................................................................................................2 关键词............................................................................................................................2 Abstract.........................................................................................................................3 Keywords.....................................................................................................................3 目录................................................................................................................................4 前言................................................................................................................................5 1.材料与方法................................................................................................................6 1.1试验材料.............................................................................................................6 1.2试验方法.............................................................................................................6 1.3培养方法和条件.................................................................................................6 1.3.1外植体消毒....................................................................................................61.3.2诱导培养基....................................................................................................61.3.3外植体的接种................................................................................................71.3.4培养条件........................................................................................................7 1.4数据统计.............................................................................................................7 2.结果与 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 ................................................................................................................7 2.1外植体选择..........................................................................................................72.1.1试验现象........................................................................................................72.1.2试验结果........................................................................................................72.1.3试验结果分析................................................................................................92.1.4讨论................................................................................................................9 2.2NAA与6-BA激素添加量试验.........................................................................102.2.1试验现象......................................................................................................102.2.2试验结果......................................................................................................102.2.3试验结果分析..............................................................................................11 2.2.4讨论..............................................................................................................12 结果..............................................................................................................................13 致谢..............................................................................................................................14 参考文献......................................................................................................................15 4 前言 夜香树（Cestrumnoctrnuml）又名洋素馨、夜来香、夜丁香，属于茄科夜香树属。常绿灌木，高1～3m，枝条细长而稍弯垂叶互生，长圆状披针形或狭长圆形，长6～15cm，纸质，全缘，顶端渐尖，基部近圆形。花多数，排成疏散分枝的聚伞花序腋生或顶生；花冠高脚碟状，长约2cm，绿色或黄绿色，檐部5浅裂，夜间极香，故名夜香树。浆果椭圆形，直径5～7mm，熟时白色；具种子1～6粒(多为2～3粒)，长卵形或一侧压扁，直径1～2mm，黑褐色，干粒重6.45g。夜香树原产于南美洲。我国华南、福建和云南有栽培。性喜温暖气候，畏寒；喜光，在半阴处亦能适应；较粗生，在沙土上也能生长，但以疏松湿润的沙壤土或壤土生长良好。萌芽力强。花期7～11月，入夜散发浓郁香气；果期冬春季，种子2～3月成熟。 夜香树的枝条疏细，花晚间开放，气味浓郁，有驱蚊作用。在公园、庭院、亭畔、水边等处配置。文献报道：夜香树具有性温、味辛，具行气止痛、镇定之功效[1]；夜香树提取物有抗心率失常、局部麻醉和中枢抑制作用[2-3]；夜香树叶提取物具有抗肿瘤作用，其有效成分主要集中在正丁醇部位[4]。民间用来治疗胃脘痛。 夜香树较少结实，且种子发芽率低，约30％，育苗一般少用种子繁殖。主要用扦插繁殖，且易成活。扦插宜在春夏季进行，选用1～2年生的健壮枝条，剪取长约l0cm，插于沙壤土苗床，插后盖以疏松枯草保湿，约1个月便可生根发芽，长高20cm后出圃移植。扦插苗可在园地栽植，也可以盆栽。在园林绿地中，可在空旷处单株或2株栽植，也可与其他灌木混交配置。栽植后除了日常的水肥管理外，还要加以修剪整形，以免生长过盛或株形散乱。 目前夜香树的扦插繁殖耗费大量的原始材料和时间。不适于大规模化生产。组织培养技术的发展为植物的生长繁殖开辟了一条新的途径。王福喜以夜香树的带芽茎段为外植体诱导丛生芽，并筛选出夜香树的组织培养最佳分化增殖培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖3.0%+琼脂0.6%[5]。愈伤组织培养技术是植物组织培养中一项很重要的技术，主要应用于研究植物生长发育及分化机制、遗传变异规律、大规模工厂化生产有用化合物或作为原生质体培养材料的来源。 5 绝大多数植物在培养时都要先经过愈伤组织培养阶段，再进行形态发生过程。但愈伤组织培养技术在夜香树培养中暂无相关报道。因此，探讨夜香树的愈伤组织诱导具有重要的意义。 1.材料与方法 1.1试验材料 于2011年5月在晴朗的中午取夜香树当年抽生三片叶的嫩枝，材料源于宜宾职业技术学院校园内。 1.2试验方法 根据生产需求，结合前人试验结果，本次试验选择夜香树的茎段、叶片、叶脉作为外植体；以MS+30g/L蔗糖+7g/L琼脂为基础培养基；分别以6-BA（取3个水平：0.5、1、1.5mg/L）和NAA（取三个水平：1、2、3mg/L）三种不同激素浓度水平正交组合，来诱导夜香树的茎段、叶片、叶脉生成愈伤组织，并选择出最佳外植体和激素浓度配比。以期为夜香树愈伤组织培养产业的发展提供参考资料。本试验共进行27个处理，每个处理接种13瓶，每瓶接种2个外植体，共计351瓶。 1.3培养方法和条件 1.3.1外植体消毒 取夜香树嫩枝的茎段、叶片、叶脉，在流水中冲洗15～30min，再用0.5%新洁尔灭摇洗后，用自来水反复冲洗。在超净工作台上，先用无菌水摇洗，再用75%的酒精表面消毒10s，无菌水摇洗；最后用0.1%升汞灭菌10min，无菌水摇洗。 1.3.2诱导培养基 基础培养基为MS+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，激素种类、激素浓度和培养基编号如表1： 6 表1：激素种类、激素添加量和培养基编号表 激培养基素编浓号 度 类型123456789激素 6-BA （mg/L） NAA （mg/L）0.50.50.51111.51.51.5123123123 1.3.3外植体的接种 将灭菌好的外植体材料进行切割整理，接种于培养基上。 1.3.4培养条件 将灭菌接种好的外植体材料进行光照培养,在整个过程中pH为5.8～6.0,温度为20℃,光照强度为1000～1500Lx,每日光照12h的条件下培养。 1.4数据统计 1周后统计污染率，并观察对比外植体材料的生长情况。一个月后统计诱导结果。（诱导率=出现诱导现象的瓶数/处理瓶数×100%） 2.结果与分析 2.1外植体选择 2.1.1试验现象 接种一个星期，茎段、叶脉的切割处有愈伤组织生长迹象；叶片卷曲，暂无愈伤组织生长迹象。两个星期后，茎段愈伤组织生长明显，组织块开始膨大；叶脉愈伤组织生长较茎段缓慢，组织块开始膨大，组织块无茎段大；叶片卷曲、变厚，边缘切割处，有愈伤组织生长迹象。一个月后，茎段愈伤组织膨大疏松，翠绿色，生长良好；叶脉愈伤组织长势较差，愈伤组织块小；叶片变厚，边缘有蓬松的愈伤组织。 2.1.2试验结果 试验1个月后，统计愈伤组织诱导数和长势见表2： 表2：试验结果统计表 7 外植体 茎段 编号 诱导瓶数 123456789 86597712109 处理 长势 瓶数111112101013131212 疏松、翠绿、鲜亮 瓶数221321542 瓶数9131311129121110 紧实、黄绿、色暗 诱导 处理 长势 瓶数432442553 瓶数11101310111291313 较疏松、黄绿、较 暗 诱导 处理 长势 叶片 叶脉 根据表2计算出的外植体愈伤组织诱导率如表3： 表3：外植体诱导率试验结果统计表 外植体诱导率(%) 编号 茎段 123456789T平均诱导率 72.7354.5541.6790.0070.0053.8592.3183.3375.00633.4370.38 叶片22.2215.387.6927.2716.6711.1141.6736.3620.00198.3822.04 叶脉36.3630.0015.3840.0036.3616.6755.5638.4623.08291.8732.43 （注：“T”不同外植体愈伤组织的诱导率总和） 8 2.1.3试验结果分析 试验结果采用组合内无重复观测值的单向分组资料的方差法进行统计。对表3中的诱导率数据进行方差分析，试验结果统计方差分析表见表4： 表4：外植体诱导率试验结果统计的方差分析表 变异来源外植体间误差总变异 SS1.653510.4721911.637542 df22426 MS0.5826750.019675 F29.6156** F0.053.40 F0.015.61 由表4可知，本试验各处理间的差异是极显著的，需作各个处理之间的比较。据V=24时，查SSR表可算得LSRa值于表5： 表5：外植体诱导率试验结果统计各处理平均数的LSRa值 K23 （注：SE=0.08097327） SSR0.053.923.07 SSR0.013.964.14 LSR0.050.317415220.2485794 LSR0.010.320654150.33522934 再根据表5的LSRa值和各个T值按Xt/n式计算各处理的平均数，列表6进行比较。 表6：外植体诱导率试验结果统计各处理平均数的比较（SSR法） 差异显著性 各处理茎段叶脉叶片 平均诱导率(%) 70.3832.4322.04 a=0.05abb a=0.01ABB 表6的结果表明，在本试验的三个外植体间：茎段与叶脉、叶片之间差异为极显著；叶脉与叶片之间差异不显著。2.1.4讨论 不同外植体的诱导效果是不一样的，在银杏愈伤组织诱导与生长的优化试验中，外植体是影响诱导率的主要因素之一[6]。 9 本试验在夜香树三种不同外植体中，诱导茎段的效果最好，诱导率达到了70.38%，与叶脉和叶片的诱导率相比都是极显著的。茎段诱导的愈伤组织的长势、色泽、亮度，也比叶脉、叶柄诱导的愈伤组织好。而王福喜也是用地夜香树的茎段进行的试验。 2.2NAA与6-BA激素添加量试验2.2.1试验现象 以夜香树茎段为外植体的NAA与6-BA激素添加量试验现象统计如表7： 表7：以夜香树茎段为外植体的NAA与6-BA激素添加量试验现象统计表培养基编号 123456789 生长状况较疏松、翠绿、鲜亮较疏松、翠绿、较暗紧实、翠绿、较暗疏松、翠绿、鲜亮较疏松、翠绿、鲜亮较疏松、翠绿、较暗疏松、翠绿、鲜亮疏松、翠绿、鲜亮较疏松、翠绿、鲜亮 2.2.2试验结果 夜香树茎段培养NAA与6-BA激素添加量试验结果统计见表8。 表8：以夜香树茎段为外植体的NAA与6-BA激素添加量试验结果统计表NAA(A)A1A2A3TBXB 6-BA（B） B172.73%90.00%92.31%255.04%85.01% B254.55%70.00%83.33%207.88%69.29% B341.67%53.85%75.00%170.52%56.84% TA168.95%213.85%250.64%T=633.44% XA56.32%71.28%83.55%X=70.38% 如表8，将A1、A2、A3设为NAA三个水平（1、2、3mg/L）的激素浓度， 10 B1、B2、B3设为6-BA三个水平（0.5、1、1.5mg/L）的激素浓度。TA、XA分别为NAA在6-BA浓度为B1、B2、B3时的诱导率总和与平均诱导率，TB、XB分别为6-BA在NAA浓度为A1、A2、A3时的诱导率总和与平均诱导率，T、X分别为诱导率总和与平均诱导率。2.2.3试验结果分析 试验结果采用组合内无重复观测值的两向分组资料的方差法进行统计。对表8中的诱导率数据进行方差分析，试验结果统计方差分析表见表9： 表9：以夜香树茎段为外植体的NAA与6-BA激素添加量试验结果统计的方差分析表变异来源NAA间6-BA间误差总误差 SS0.111586340.119594040.009687310.24086769 df2248 S20.055793170.05979700.00242183 F23.0376079**24.6908412** F0.056.946.94 F0.0118.0018.00 由表9可知，本试验各处理间的差异是极显著的，需作各个处理之间的比较。据V=8时，查SSR表可算得LSRa值于表10： 表10：NAA与6-BA激素添加量试验结果统计各处理平均数的LSRa值K23 （SE=0.02841267） SSR0.053.934.01 SSR0.016.516.8 LSR0.050.111661790.11393481 LSR0.010.184966480.19320616 再根据表10的LSRa值和各个T值按Xt/n式计算各处理的平均数，列表11进行比较。 表11：NAA激素添加量试验结果统计各处理平均数的比较（SSR法） 差异显著性 各处理A3A2A1 平均诱导率(%) 83.5571.2856.32 a=0.05abc a=0.01AAAB 表11的结果表明，在本试验的NAA三个浓度间： 11 A3与A1之间、A3与A2之间、A2与A1之间的诱导率差异为显著； 表12：6-BA激素添加量试验结果统计各处理平均数的比较（SSR法） 差异显著性 各处理 B1 B2 B3平均诱导率(%)85.0169.2956.84a=0.05abca=0.01AAAB 表12的结果表明，在本试验的6-BA三个浓度间： B1与B2之间、B1与B3之间、B2与B3之间的诱导率差异为显著； 2.2.4讨论 生长素NAA可以诱导愈伤组织的产生，促进细胞脱分化，促进细胞的伸长；细胞分裂素6-BA可以促进植物细胞的分裂和扩大，使茎增粗，而抑制茎伸长[7]。NAA和6-BA配合使用时，在最适的浓度下，愈伤组织诱导率高，长势良好；浓度过高或过低时诱导率低，抑制其生长。当两种激素按照一定比例相互配合时，诱导率最为理想[8]。 本试验的愈伤组织诱导率，随着6-BA的浓度降低，诱导率增加，随着NAA的浓度增高，诱导率增加。在6-BA为0.5mg/L，NAA为3mg/L时，愈伤组织的诱导效果最好，诱导率达到92.31%；在6-BA为0.5mg/L，NAA为2mg/L时，愈伤组织诱导率达到90%；在6-BA为1mg/L，NAA为3mg/L时，愈伤组织诱导率达到83.33%。而王雯雯在晚香玉组培时[9]，诱导单瓣叶片愈伤组织形成的较适培养基为MS+6-BA2.0mg/L+NAA1.0mg/L，诱导率为97.77%；诱导重瓣叶片愈伤组织形成的较适培养基为MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.5mg/L，诱导率为100%。胡燕梅等在银杏愈伤组织诱导时NAA3mg/L+6-BA1.5mg/L诱导率为100%。袁成志在激素对菊花愈伤组织诱导和丛生芽分化的影响[10]中，愈伤组织诱导的最适培养基为MS+6-BA2.0mg/L+NAA1.0mg/L。本试验以前人试验的激素浓度有所差异，这与植物种类有关。本试验还做过6-BA与2,4-D的正交试验，但愈伤组织的诱导效果不明显。 12 结果 在本次对夜香树进行愈伤组织诱导试验中，三种外植体，茎段的诱导效果最好，诱导率达到了70.685%，从颜色和疏松程度等方面，都比其他外植体生长状况良好；细胞分裂素6-BA为0.5mg/L，生长素NAA为3mg/L时，愈伤组织的诱导效果最好，诱导率达到92.31%，从疏松程度和生长状态等方面，都比其他处理效果好。 愈伤组织的诱导，在茶叶、银杏、菊花、水稻等很多植物中都有应用，很多资料都能证实。但在夜香树愈伤组织培养中是一个空白，本试验用茎段、叶脉、叶片作为外植体，同时改变NAA和6-BA的浓度来观察夜香树的诱导率，进行一个空白摸索，为研究夜香树补充了新的资料。 今后可以增加生长素和细胞分裂素的浓度水平和范围，使试验更加精确，可作为我们进一步研究夜香树的方向。 13 致谢 回首往事兮景幻多，感念吾师兮梦婆娑。感谢我的导师——**老师对我学习的支持、勉励。在写作毕业论文阶段，*老师便会放下繁忙的工作不厌其烦地指点我，在我撰写论文的过程中，*老师倾注了大量的心血和汗水，使我得到了*老师悉心细致的教诲和无私的帮助。在此，谨向导师表示崇高的敬意和衷心的感谢！在论文完成之际，我要特别感谢李***老师的热情关怀和悉心指导，特别是他广博的学识、深厚的学术素养、严谨的治学精神和一丝不苟的工作作风使我终生受益，在此表示真诚地感谢和深深的谢意。 在论文的写作过程中，也得到了许多同学的宝贵建议，在此一并致以诚挚的谢意。感谢所有关心、支持、帮助过我的良师益友。 最后，向在百忙中抽出时间对本文进行评审并提出宝贵意见的各位专家表示衷心地感谢！ 14