非小细胞肺癌EGFR基因突变检测

非小细胞肺癌EGFR基因突变检测主要 内容 财务内部控制制度的内容财务内部控制制度的内容人员招聘与配置的内容项目成本控制的内容消防安全演练内容 EGFR检测的背景及意义 EGFR检测的标本类型 EGFR检测的临床开展及成功关键肺癌精准医学是精确诊断与靶向治疗的结合精确诊断靶向治疗LiTH,etal.JClinOncol2013;31:1039-1049.VariS,etal.ExpertOpinDrugDiscov2013;8(11):1381-1397. 分子靶点 药物 EGFR 吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼、阿法替尼、CO-1686,AZD9291 ALK 克唑替尼、Alectinib Met Tivantinib(ARQ197),Onartuzumab(MetMab)Cabozantinib(XL184) FGFR1 Nintedanib,XL999 HER-2 阿法替尼 RET/ROS融合基因 克唑替尼,AP26113,ASP3026 RAS/MAPK通路 Trametinib(GSK1120212)，Pimastertib，Refametinib,TAK733…… PI3K/PTEN/AKT BEZ235,XL-765…… PD-1/PDL-1 Nivolumab,MPDL3280A HSP90….. Ganetespib多部权威指南强调治疗前的EGFR突变检测ASCO2015指南：考虑用EGFRTKI进行一线治疗的非小细胞肺癌患者应该进行肿瘤EGFR突变检测来确定适合一线使用EGFRTKI还是一线使用化疗药物治疗。EGFR基因突变和EGFR靶向治疗中国肺腺癌驱动基因突变图谱NSCLC中药物疗效相关的EGFR突变八项随机研究奠定了TKI在EGFR基因突变阳性患者中一线治疗的地位NCCNGuidelinesVersion3.2016Non-SmallCellLungCancerMoketal.,2008;Kimetal.,2008;Hirschetal.,2006 研究 RR 中位PFS IPASS 71.2%vs47.3% 9.8vs6.4月 First-SIGNAL 84.6%vs37.5% 8.4vs6.7月 WJTOG3405 62.1%vs32.2% 9.6vs6.6月 NEJGSG002 73.7%vs30.7% 10.8vs5.4月 OPTIMAL 83%vs36% 13.1vs4.6月 EURTAC 58%vs15% 9.7vs5.2月 LUX-LUNG3 61% vs22% 11.1vs6.9月 LUX-LUNG6 67%vs23% 11.0vs5.6月 突变类型 所占比例 对EGFR-TKI敏感性 19del;L858R ~90% 敏感 G719X;L861Q;S768I ~7% 亚敏感 T790Malone;20ins ~3% 不敏感*EGFR检测样本来源组织活检（肿瘤蜡片）目前检测金标准细胞学标本（恶性胸水）样本品质和肿瘤细胞含量可能比组织样本较低血液标本（ctDNA）-当无法获取组织或细胞学样本的晚期转移患者，作为有效补充DNA片段化/假阴性较多，需要高敏感度技术+++--+--侵入性每个病人都适用动态检测对于组织和胸水都取不到的患者，血液样本是一个很好的补充PirkerRetal.JThoracOncol2010;5:1706–1713;SavicSetal.BrJCancer2008;98:154–160;RekhtmanNetal.JThoracOncol2011;6:451–458;TanakaTetal.CancerSci2007;98:246–252;-++质量控制组织/细胞学检测是目前的金标准FromAZ2015internaldata组织检测基本流程组织及细胞学标本的处理-需要临床科室的协助与配合 组织学标本 固定要及时，离体后即时处理（15-30分钟内) 固定液：10%中性缓冲福尔马林（终浓度4%）；固定液的量一般为组织体积的10-15倍. 固定时间：活检标本直接放入固定液，支气管镜活检标本的固定时间为6～24h，手术切除标本的固定时间为12h-48h. 细胞学标本 采用95%乙醇固定液，时间不宜少于15min，或采用非妇科液基细胞学固定液，固定时间和方法可按说明书进行操作 所有细胞学标本应尽量制作福尔马林固定石蜡包埋（formalin-fixedandparrffin-enbedded,FFPE）细胞学蜡块。将细胞学标本离心沉淀置于包埋盒中，后续操作同组织学标本制作蜡块流程中国原发性肺癌诊疗规范2016版病理评估和质控对于基因检测至关重要-蜡块未染色切片H&E染色切片标记肿瘤细胞比例高的区域刮取标记以内的区域为什么EGFR检测要在病理科开展？* Followingselectionoftheblock,whereblockswereavailable,pathologyreviewwasthencarriedout. Forsamplesprovidedasslides,oneslidewasselectedforpathology. PathologyreviewwasperformedviaaH&Estainedslide.Thiswasusedtodeterminetumourcontentandtumourtype.Incorporationofapathologyreviewstepisimportantsoasnottoincludepoorqualitysamplesasthesemayincreasethelikelihoodof“falsenegative”results.肿瘤细胞含量评估对于EGFR结果判读影响病理肿瘤细胞含量评估对于EGFR突变结果影响较大，检测流程如果没有该步骤，会造成较多的假阴性。血液检测的价值与优势*已可以指导EGFR敏感性突变治疗用药1.Molina-VilaMetal.JThoracOncol2008;3:1224–1235;2.SmouseJetal.CancerCytopathol2009;117:67–72;3.VanEjikRetal.PLoSOne2011;6:e177791;4.RekhtmanNetal.JThoracOncol2011;6:451–458吉非替尼获得血液ctDNA伴随诊断适应症 循环血肿瘤细胞(circulatingtumourcell，CTC)即释放到外周血中的肿瘤细胞，目前CTC的捕获比较困难循环肿瘤DNA(circulatingtumorDNA，ctDNA)即循环肿瘤DNA，指由肿瘤细胞释放到血液循环系统中的DNA血液标本的检测对象总量少–<500DNA拷贝数/200uL血浆ctDNA丰度低血浆ctDNA的特点片段小–集中在170bp左右，检测方法需要能够耐受In-housedataNewmanetal.,NatMed(2014)Taniguchietal.,ClinCancerRes(2011) 信息丢失-能代 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 全基因组信息？TranslationalOncology.2013NatureVolume.2013IPASS日本亚组血液/组织对比EGFR突变状态研究 灵敏性:43% 特异性:100% 一致性:66%86对血清和组织样本参与比较GotoK.etal.JThoracOncol2012;7(1):115-121 突变状态 组织 合计 EGFR(+) EGFR(-) 血液 EGFR（+） 22 0 22 EGFR（-） 29 35 64 合计 51 35 86亚太和俄罗斯晚期NSCLC组织/细胞学和配对的血浆样本(IGNITE)ChunleiShi,etal.2015ESMOAsia,abstract422PD 一致性 敏感性 特异性 n/N(%) 95%CI n/N(%) 95%CI n/N(%) 95%CI AsiaPac(n=1687) 1310/1687(77.7) 75.6,79.6 343/692(49.6) 45.8,53.4 967/995(97.2) 96.0,98.1 Russia(n=894) 767/894(85.8) 83.3,88.0 33/109(30.3) 21.8,39.8 734/785(93.5) 91.5,95.1 中国(N=1355) 一致性 敏感性 特异性 PPV NPV n/N(%) 95%CI n/N(%) 95%CI n/N(%) 95%CI n/N(%) 95%CI n/N(%) 95%CI 1051/1355(77.6) 75.2,79.8 267/548(48.7) 44.5,53.0 784/807(97.1) 95.8,98.2 267/290(92.1) 88.3,94.9 784/1065(73.6) 70.9,76.2IFUM吉非替尼治疗EGFR突变的高加索NSCLC652对血液和组织样本参与比较JThoracOncol.2014Sep;9(9):1345-53. 一致性:94.3%; 敏感性:65.7%; 特异性:99.8%MedianPFSctDNA作为EGFR检测的有效补充 突变状态 组织 合计 EGFR(+) EGFR(-) 血液 EGFR(+) 69 1 70 EGFR(-) 36 546 582 合计 105 547 652 Allmutations MedianPFSmo Tumor(n=106) 9.7 Plasma(n=65) 10.2IFUM研究：血液检测阳性可以指导TKI用药IFUM(易瑞沙后续评估)研究中，血液与配对组织不同EGFR突变状态患者ORR的一致，19外显子缺失患者PFS也一致(10.3月vs9.6月)ctDNA检测EGFR突变阳性可用于指导EGFR-TKI治疗Douillard,J.-Y.,etal.(2014)."JournalofThoracicOncology9(9):1345.RocheARMS:敏感性:75%,特异性:96%ADxARMS:敏感性67.5%特异性100%Liuetal2013.JclinpATHMoketal.2015,CCRQiagenARMS敏感性65.7%，特异性:99%123ARMS法特异性较好，灵敏度有限，但ADxARMS是目前唯一获得CFDA批准的血液检测方法一代ARMS：EGFR敏感突变，组织vs血液血液检测的获益人群Bettegowdaet.al.,SciTranslMed(2014)非小细胞肺癌血液EGFR基因突变检测中国专家共识(2015年12月)中国国家食品药品监督管理总局（CFDA）在2015年2月已批准吉非替尼说明书更新，在推荐所有NSCLC患者的肿瘤组织都应进行EGFR基因突变检测基础上，如果肿瘤标本不可评估，则可使用从血液（血浆）标本中获得的ctDNA进行评估。EGFR基因突变检测流程血液检测实验流程（肿瘤标本不可评估）（2h内） 采用EDTA抗凝管，采集10mL全血 2小时内将全血充分低温离心两次，分离出不含细胞成分的血浆，放置于-70℃冻存慎重对待ARMS法的血液检测结果EMQNExternalQualityAssessmentSchemeforLungCancer(2014).非小细胞肺癌EGFR检测——各标本处理方式总结——重要讯息回顾EGFR突变样本检测方法 在中国NSCLC患者中，约50%存在EGFR突变 准确的驱动基因检测是实现精准治疗的基础与关键 严格的质量控制是保障 报告 软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载 准确的关键 组织活检是目前金标准，胸水是另一选择。血液检测适用于晚期、转移且取不到组织标本的NSCLC患者，可作为补充 血液检测的优势在于便捷，无创，并可实现动态、定量监测 对EGFR敏感突变，ARMs有较高灵敏度和特异性 ARMS检测血液EGFR突变的阴性结果需慎重解读谢谢！** Followingselectionoftheblock,whereblockswereavailable,pathologyreviewwasthencarriedout. Forsamplesprovidedasslides,oneslidewasselectedforpathology. PathologyreviewwasperformedviaaH&Estainedslide.Thiswasusedtodeterminetumourcontentandtumourtype.Incorporationofapathologyreviewstepisimportantsoasnottoincludepoorqualitysamplesasthesemayincreasethelikelihoodof“falsenegative”results.