实验一多克隆抗体的制备(颗粒性抗原)

实验一多克隆抗体的制备(颗粒性抗原)上海师范大学实验报告专业、年级生物科学班级姓名学号课程名称免疫学实验名称多克隆抗体的制备(颗粒性抗原)实验日期2011年9月至10月基本原理免疫动物是通过给待免疫的动物注射抗原,使其获得相应的抗体的过程。抗原给予的方法不仅对免疫应答的起始有较大影响,而且决定着对新注射抗原的免疫吞噬和吞噬后加工处理的细胞类型,并影响对其发生免疫应答的外周淋巴器官。材料 (一)动物:健康雄性家兔2只 (二)器材:剪刀、镊子、注射器(2ml、50ml)附针头(9号、6号)、称量瓶(10ml)、量筒、动物固定...

上海师范大学实验报告专业、年级生物科学班级姓名学号课程名称免疫学实验名称多克隆抗体的制备(颗粒性抗原)实验日期2011年9月至10月基本原理免疫动物是通过给待免疫的动物注射抗原,使其获得相应的抗体的过程。抗原给予的方法不仅对免疫应答的起始有较大影响,而且决定着对新注射抗原的免疫吞噬和吞噬后加工处理的细胞类型,并影响对其发生免疫应答的外周淋巴器官。材料 (一)动物:健康雄性家兔2只 (二)器材:剪刀、镊子、注射器(2ml、50ml)附针头(9号、6号)、称量瓶(10ml)、量筒、动物固定架、灭菌三角烧瓶(200ml)、手术器械一套、血管夹、黑丝线、塑料放血管等。 (三)试剂 1.灭菌生理盐水; 2.单克隆过夜培养的坂崎肠杆菌,用灭菌生理盐水洗涤后,反复冻融3~5次,-20℃保存; 3.消毒酒精及碘酒。免疫方法 1.第一次免疫: 用1ml注射器吸取1ml已升温至室温的1×107/mL坂崎肠杆菌混悬液,每侧臀部皮下各注射0.5ml。 2.第二次免疫: 间隔14天后再用1ml注射器吸取1ml已升温至室温的1×107/mL坂崎肠杆菌混悬液,每侧臀部皮下各注射0.5ml。 3.间隔14天后,从耳静脉采血0.5~1.0ml,分离血清,以凝集反应试验测定免疫血清的抗体效价(即试血)。效价至少应达到1∶16以上时才能放血。 4若效价未达到要求,可再次进行加强注射,隔14天后再试血。放血颈动脉放血将兔仰卧,固定于兔台,剪去颈部的毛,切开皮肤,暴露颈动脉,插管,放血。放血过程中要严格按无菌要求进行。分离血清将三角烧瓶的血置37℃温箱1小时,再置4℃冰箱内3~4小时。待血液凝固血块收缩后,用毛细滴管吸取血清。于3000rpm离心15分钟,取上清加入防腐剂(0.01%硫柳汞或0.02%叠氮钠,最终浓度),分装后置4℃冰箱中保存备用。

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