叶绿素含量的测定
叶绿素的含量与植物光合作用及氮素营养有密切的关系,在科学施肥、育种及植物病理研究上常有测定的需要。
一、目的
掌握叶绿素a、b含量测定的基本原理和方法。
二、原理
叶绿素a、b分别在663nm和645nm波长处有最大的吸收峰,同时在该波长处叶绿素a.、b的比吸收系数K为已知,我们即可以根据Lambert-Beer定律,列出浓度C与吸光度A之间的关系式:
A663 = 82.04 C a + 9.27C b (1)
A645 = 16.75 C a + 45.6C b (2)
(1)、(2)式中的A663、A645为叶绿素溶液在波长663nm和645nm时测得的吸光度。
C a、、C b为叶绿素a 、b的浓度,单位为mg·L-1。
82.04 、9.27为叶绿素a 、b在波长663nm下的比吸收系数。
16.75 、45.6为叶绿素a 、b在波长645nm下的比吸收系数。
解(1)、(2 )式联立方程,得:
C a=12.70 A663– 2.69 A645 (3)
C b=22.9 A645– 4.68 A663 (4)
C T =C a + C b= 20.21 A645 + 8.02A663 (5)
C a、C b为叶绿素a 、b的浓度, C T为总叶绿素浓度,单位:(mg · L-1),.
利用上面( 3 )、(4)、(5)式可以分别计算出叶绿素a 、b及总叶绿素浓度。
三、材料、仪器设备及试剂
1. 材料:菠菜叶、芥菜叶或其他植物叶片
2. 仪器设备:电子
分析
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天平;分光光度计;恒温水浴锅;25ml刻度试管;剪刀;试管;试管架;玻棒等。
3. 试剂:80﹪乙醇。
四、实验步骤
1. 叶绿素的提取
从植株上选取有代
表
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性的叶片数张(除去粗大叶脉)剪碎后混匀,快速称取0.2g (可视样品叶绿素含量高低而增减用量),置于25ml刻度试管中,加80﹪乙醇10ml左右,加塞放入60~80℃水浴中保温提取叶绿素(或常温下放在暗处浸提12~24h),至叶片全部褪绿为止,冷却后,用80﹪乙醇定容至刻度,此液即
1
为叶绿素提取液。
2. 测定
取光径为1cm的比色杯,加入叶绿素提取液距比色杯口1cm处,以80﹪乙醇作为对照,分别于663nm及645nm波长下测定吸光度(A)值。
五、结果计算
将测定得到的吸光度A663、A645值分别代入上面(3)、(4)、(5)式计算出C a 、C b及C T (即叶绿素a 、b 及叶绿素总量浓度)。再按下式计算出叶绿素a 、b及叶绿素总含量。
C a ×提取液总量(ml)
叶绿素a 含量(mg ·g-1Fw)= ————————————
样品鲜重(g)× 1000
C b ×提取液总量(ml)
叶绿素b 含量(mg ·g-1Fw)= ————————————
样品鲜重(g)× 1000
C T ×提取液总量(ml)
叶绿素总含量(mg ·g-1 Fw)= ————————————
样品鲜重(g)× 1000
最后计算出叶绿素a / 叶绿素b的比值,并加以分析。
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