lipo2000转染操作步骤newStealth™RNAiorsiRNATransfection以6孔板为例，其余规格的转染见
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11中板，细胞密度为30-50%适宜。（含血清，不含抗生素）注意：根据转染后细胞检测时间长短决定细胞中板密度，如果转染后需要长时间后检测，则细胞中板密度适当降低，已避免细胞过度生长导致存活降低。2第二天（12小时后）每个孔转染方式如下：A将100pmolsiRNA溶于250ulOpti-mem无血清培养基中。B将5ullipo2000溶于250ulOpti-mem无血清培养基中，混匀室温放置5min。C将AB两管混合，放置20min。3转染期间，用PBS洗2次，将6孔板培养基换成Opti-mem，每孔1.5ml。将C管mix加入6孔板对应孔中，6小时后换成有血清培养基。PlasmidDNATransfection转染时细胞密度越高，转染效率，表达效率也越高，并且可以降低细胞毒性。1中板。（含血清，不含抗生素）贴壁细胞：第二天待细胞密度达到90%以上时转染悬浮细胞：中板后随即转染。2转染。A将4ugDNA溶于250ulOpti-mem无血清培养基中。B将10ullipo2000溶于250ulOpti-mem无血清培养基中，混匀室温放置5min。C将AB两管混合，放置20min。转染期间，用PBS洗2次，将6孔板培养基换成Opti-mem，每孔1.5ml。将C管mix加入6孔板对应孔中，6小时换成有血清培养基。Table1.CultureSharedreagentsDNAtransfectionRNAitransfection中板密度*CulturevesselSurf.areaperwellVol.ofplatingmediumVol.ofdilutionmediumDNALipofectamine™2000RNALipofectamine™20001000-10000cell/well96-well0.3cm2100ul2X25ul0.2ug0.5ul5pmol0.25ul0.5-2X105cell/well24-well2cm2500ul2X50ul0.8ug2.0ul20pmol1.0ul1-3X105cell/well12-well4cm21ml2X100ul1.6ug4ul40pmol2ul2-3X105cell/well6-well(35mm)10cm22ml2X250ul4.0ug**10ul100pmol5ul8-10X105cell/dish60mm20cm24ml2X0.5ml8.0ug***20ul200pmol10ul2-3X106cell/dish10cm60cm215ml2X1.5ml24ug60ul600pmol30ul*：中板密度根据不同细胞不同实验有所不同，这里仅提的数据仅供参考**：6孔板细胞质粒转染量1-2ug足以。***：6cmdish细胞质粒转染量4-6ug足以。
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