植物组织中可溶性糖含量的测定实验
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10科四谭晓东20102501024一、 实验目的掌握蒽酮比色法测定可溶性糖含量的提取和方法原理； 掌握分光光度计中标准曲线制作的使用程序。二、 实验原理植物组织中的糖（包括还原糖和非还原糖） 可以与浓硫酸反应生成糠醛， 糠醛和蒽酮反应可以生成蓝绿色络合物，在 625nm处有最大光吸收值。三、 实验材料大白菜叶片与叶柄四、 实验步骤1.可溶性糖的提取大白菜叶柄和叶片各0.5g鲜重，研磨 10ml80%乙醇80度水浴30min过滤后定容至25ml2.标准葡萄糖液的配制（200ug/ml）葡萄糖浓度（ug/ml）020406080100标准匍萄糖液吸取量（ml）00.10.20.30.40.5蒸馏水（ml）10.90.80.70.60.5蒽酮（ml）5混匀，沸水浴10min，冷却后在625nm下比色3.样品液显色和比色0.1ml提取液0.9ml蒸馏水冷却后对照标准曲线比色五、实验结果1.葡萄糖标准曲线葡萄糖液浓度（ug/ml）20406080100吸光度0.1310.2360.3070.4450.536标准方程：y=184.6x-1.973 R=0.99402.根据标准曲线测到，叶片的吸光度是 0.249，葡萄糖浓度为43.96ug/ml，含糖量为13.82%;叶柄的吸光度为0.276，葡萄糖浓度为49.01ug/ml，含糖量为15.41%六、分析与讨论植物体内的可溶性糖和淀粉均是光合作用产物。 可溶性糖以蔗糖为主， 是植物糖类运输的主要形式，其次是葡萄糖、果糖、麦芽糖、戊糖和糖苷等。可溶性糖在硫酸作用下生成糖醛或羟甲基糠醛化合物，糖醛或羟甲基糠醛可与蒽酮作用形成蓝绿色络合物（糖醛衍生物），在一定波长范围内，其颜色的深浅与糖含量有定量关系，在625nm波长下的吸光值与可溶性糖含量成正比。由于蒽酮与可溶性糖反应的呈色强度随时间变化，故必须在反应后立即在同一时间内比色。该实验方法简便， 灵敏度高，可溶性糖含量在30卩g左右就能进行测定，所以可作为测定微量可溶性糖之用。该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物 ，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量 ，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量.在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下 ，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值•但在测定水溶性碳水化合物时 ，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差.此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同 ，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。从实验结果得出叶柄也叶片含糖量没有明显差别，而含糖量比较少。
浙公网安备 33021202002483