方法一、 2.6－二氯酚靛酚滴定法
二、原理
Vc又称抗坏血酸，还原型抗坏血酸能还原染料 2.6－二氯酚靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。在酸性溶液中， 2.6－二氯酚靛酚钠离子呈红色，被还原后变为无色。
三、实验器材
锥形瓶、
微量滴定管、
研钵、
容量瓶、
吸量管等。
四、实验试剂
2% 草酸溶液 ：取2g草酸溶于100ml蒸馏水中。
1% 草酸溶液 ：取1g草酸溶于100ml蒸馏水中。
标准
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抗坏血酸溶液（ 0.1mg/ml ）：精确称取10mg抗坏血酸，以1%草酸溶解并定容到100ml。储存到棕色玻璃瓶中，最好临用前配制。
0.001N 2.6－二氯酚靛酚钠溶液：将50mg2.6－二氯酚靛酚钠溶解于约200ml含有52mg NaHCO3的热蒸馏水中，冷却后定容到250ml，储存在棕色瓶中，保存在低温下。2.6－二氯酚靛酚钠不稳定，必须在一周内用完。用前必须标定到1ml2.6－二氯酚靛酚钠相当于0.088mg抗坏血酸。
五、操作
1、植物样品Vc提取液的制备：
用电子天平准确地称取辣椒 0.5 g ，样品必须预先用温水洗去泥土，并在空气中风干，加25ml 2%草酸溶液匀浆，并将匀浆液转入50ml离心管中；用少量2%草酸溶液冲洗匀浆杯，一起转入离心管中进行离心（ 5min,4500rp ），将上清液移入 50ml 容量瓶，用少量2%草酸冲洗沉淀并离心保留上清，如此反复抽提 3 次，最后用 2% 草酸定容到50ml。
2、测定：
每次量取 5ml提取液放入小锥形瓶内进行滴定。 用微量滴定管以 2.6－二氯酚靛酚钠溶液 滴定到提取液呈现淡粉红色，并在 15～30 秒内不褪色，滴定过程必须迅速，不要超过 2 分钟。
另取 5ml 2%草酸作空白对照进行滴定。
平行进行 2-3 次，计算样品中Vc含量。
M=[(V A -V B ) × C × 0.088 × 100]/ （ D × W ）
M ： 100g 样品中含抗坏血酸的质量 mg
V A ：滴定样品管时所用去染料体积数 ml
VB ：滴定空白管时所用去染料体积数ml
C ：提取液总体积ml
D ：滴定时所取的样品的提取液毫升数
W ：被检样品的重量
0.088 ： 0.001N2.6－二氯酚靛酚钠溶液 1ml 相当于 0.088mgVc
方法二、紫外快速测定法
（张波老师说用这个方法做实验）
一、原理：
Vc的2.6—二氯酚靛酚容量法，操作步骤较繁琐，而且受其它还原性物质、样品色素颜色和测定时间的影响。紫外快速测定法，是根据Vc具有对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性，于243nm处测定样品液与碱处理样品液两者消光值之差，通过查标准曲线，即可计算样品中Vc的含量。
二、实验器材：
紫外分光光度计、
离心机、
分析
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天平、
容量瓶（10ml, 25ml）、
移液管（0.5ml，1.0ml）、
吸管、
研钵。
三、实验试剂：
10%HCl：取浓盐酸133ml，加水稀释至500ml。
1%HCl：取浓盐酸22ml，加水稀释至100ml。
1M NaOH溶液：称取40gNaOH，加蒸馏水，不断搅拌至溶解，然后定容至1000ml。
四、操作步骤：
（一）标准曲线的制作
1．抗坏血酸标准溶液的配制：用分析天平准确称取抗坏血酸10mg，加2ml 10%盐酸，加蒸馏水定容至100ml，混匀。此抗坏血酸溶液的浓度为100μg/ml。
2．取带塞刻度试管8支并编号，分别按
表
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内所规定的量加入抗坏血酸标准溶液和蒸馏水。
1
2
3
4
5
6
7
8
标准抗坏血酸溶液加入体积（ml）
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.8
1.0
蒸馏水加入体积（ml）
9.9
9.8
9.7
9.6
9.5
9.4
9.2
9.0
总体积（ml）
10.0
10.0
10.0
10.0
10.0
10.0
10.0
10.0
抗坏血酸溶液浓度（μg/ml）
1.0
2.0
3.0
4.0
5.0
6.0
8.0
10.0
3．消光值的测定：以蒸馏水为空的，在243nm处测定标准系列抗坏血酸溶液的消光值，以抗坏血酸的含量（μg）为横坐标，以相应的消光值为纵坐标作标准曲线。
（二）样品的测定
1．样品的提取：将果蔬样品洗净、擦干、切碎、混匀。称取5.00g于研体中，加入2-5ml 1% HCl，匀浆，转移到25ml容量瓶中，稀释至刻度。若提取液澄清透明，则可直接取样测定，若有浑浊现象，可通过离心（1 0000g, 10min）来消除。
2．样品的测定：取0.2ml提取液，放入盛有0.4ml 10% HCl的10ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度后摇匀。以蒸馏水为空白，在243nm处测定其消光值。
3．待测碱处理液的制备：分别吸取0.2ml提取液，2ml蒸馏水和0.8ml 1M NaOH溶液依次放入10ml容量瓶中，混匀，15min后加入0.8ml 10% HCl，混匀，并定容至刻度。以蒸馏水为空白。在243nm处测定其OD值。
4．由待测样品与待测碱处理样品的消光值之差和标准曲线，即可计算出样品中Vc的含量。
5．也可直接以待测碱处理液为空白，测出待测液的消光值，通过查标准曲线，计算出样品的Vc的含量。
四、计算
μ×V总
Vc的含量（μg /g）= ——————
V1×W总
式中： μ——从标准曲线上查得的抗坏血酸的含量（μg）
V1——测消光值时吸取样品溶液的体积（ml）
V总——样品定容体积（ml）
W总——称样重量（g）
浙公网安备 33021202002483