【doc】微型月季离体培养繁殖技术的探讨

【doc】微型月季离体培养繁殖技术的探讨 微型月季离体培养繁殖技术的探讨 ? 10?杭州农业科技2004年第1期 微型月季离体培养繁殖技术的探讨 孙坚红钱丽华 (杭州市农业科学研究院生物技术研究所310024) 摘要以6个微型月季品种为试材进行离体培养,以MS为基本培养基附加不同浓度的 6-BA,NAA,以诱导腋芽增殖为繁殖途径.研究结果表明:不同品种适宜的培养基有所不同,诱导 培养基为MS+6一BA0.5—1.0mg/1;继代培养为MS+6一BA1,0—1.5mg/l+NAA0,05—0,1 mgA,用茎段进行继代培养芽的增殖率高于顶芽;壮芽培养基为MS+6-BA0.5mgA+NAA0.2 mgA;生根培养基为1/2MS+NAA0.03—0.1mg/l. 关键词微型月季离体培养诱导继代壮芽生根 微型月季(RosaChinensisMini)又名袖珍月季, 其株型矮小紧凑,叶片及花朵均小巧可爱,且花色丰 富.用途广泛深受人们喜爱,近年来发展很快.我国 微型月季起步较晚,优良品种基本由国外进口,价格 昂贵.利用组织培养技术可加速微型月季优良品种 的迅速繁殖,使微型月季应用生产. 1试验材料 微型月季品种CharmingPaty,AntibesForever, NewYorkForever,MandyKordana,PinkMonte RoseForever,DijonForever,采用当年生开花后的未 萌的茎段. 2试验 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 2.1离体芽的诱导培养将茎段用自来水冲洗干 净后剪成5em左右的节段,在无菌条件下用70%的 酒精浸2O秒后再放人0.1%HgCI2溶液中浸15 min,然后用无菌水冲洗5—6次,在超净工作台上剪 成0,5em左右带有1个腋芽的茎段,接种于不同诱 导培养基上.诱导培养基以MS为基本培养基附加 不同浓度的6一BA和NAA. 2.2从生芽的继代培养将诱导出的丛芽切割为 单芽,并将其分为顶芽和含有4片完全叶的茎段分 别转接到以MS为基本培养基,附加不同激素浓度 的继代培养基上(见表1),试验设两个重复,每个重 复8瓶,每瓶5株,一个月后分别统计增殖率. 表1继代培养基配方mg/1 NAA 1.O1.52.O 浓度(A)\ O.O1AlBIAlB2Al O.O5A2BIA2132A2B3 O.1A3BIA3132A3B3 2.3不定芽的壮芽培养在生根培养中我们发现 通过继代培养的不定芽组织非常幼嫩,直接进行生 根培养不易长根,拟通过壮芽培养提高不定芽的木 质化程度来达到提高微型月季组培苗的生根率.以 MS+6-BA0,2toga+NAA0,2mg/l,MS+6-BA 0.5mg/l+NAA0,2mg/l为壮芽培养基,以继代培 养基MS+6-BAlmgA+NAA0,01toga作为对照, 将不定芽转接到上述三种培养基上. 2.4诱导生根培养1/2MS+NAA0.01,0.03, 0.05,0.1,分为加活性炭和不加活性炭两组,将经过 继代培养或壮芽培养的高度为1,5em左右的不定 芽接于生根培养基内,20天后记载生根情况.将生 根苗洗净琼脂后移栽于泥炭,珍珠岩,砻糠灰的基质 上. 实验室培养条件:温度25?,光强3000Lx,光 照12小时. 3试验结果 3.1离体芽的诱导培养试验结果表明微型月季的 腋芽在单独使用6-BA的培养基上均能诱导芽的萌 发,低浓度(0.25-0.5mg/1)有利于提高芽的萌发率,较 杭州农业科技2004年第1期?11? 高浓度有利于诱导丛芽,以1.0.1.5rag4为好,在附 加6-BA和NAA的培养基上,低浓度0.01—0.1ing4有 利于丛芽的诱导和生长,高于0.2rag4易产生玻璃苗. 将在单独使用6-BA和附加6-BA+NAA两种培养基 上诱导的不定芽对照发现附加6-BA+NAA两种培养 基上诱导的不定芽生长势优于单独使用6-BA的,且 在转接时易分割.故适合的培养基是MS+6-BA 0.5一ling4+NAA0.0ling4. 将供试的6个品种接于同一种培养基(MS+6. BAling4+NAA0.0ling4),试验结果表明芽的诱 导分化各品种间存在显着差异,田间栽培生长势较 强的品种诱导分化的芽就多,生长势弱的则反之. 黄色系列品种诱导分化率普遍低. 3.2丛生芽的继代培养 以品种CharmingParty诱导的丛芽为材料进行 继代培养,试验结果经统计 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 显示,顶芽和茎段的 芽增殖量存在显着差异,所需激素浓度也有所不同. 激素6一BA间与NAA间及6一BAXNAA互作都存在 显着差异.经多重比较结果表明: (1)继代材料对微型月季不定芽增殖的影响:用 继代材料为茎段的其不定芽增殖系数明显高于顶 芽,在不同激素组合中均表现一致,增辐范围在0.8 — 1.6之间. (2)顶芽继代培养中不同激素组合对微型月季 幼芽增殖的影响:在9个继代培养基处理中,顶芽的 幼芽增殖数在NAA的3个水平中以A1为最好,其 次是A2和A3,A1和A2之间无显着差异,与A3之 间则存在极显着差异;6一BA的3个水平中以B1为 最好,其次是B2和B3,Bl的效应与B2,B3之问呈极 显着差异,B2与B3之间均存在显着差异;在NAA~ 6-BA互作中A1Bl为最佳,其次为A2B3,A2B2最差 为A3B3,故顶芽继代培养基的最佳配方为A1Bl,即 MS+6-BAling4+NAA0.0ling4o (3)茎段继代培养中不同激素组合对微型月季 幼芽增殖的影响:与顶芽培养所不同的是,茎段培养 在NAA的3个水平中以A2为最佳,依次是A3,A1; 在6-BA的3个水平中以B2为最佳,依次为Bl,Bs; 最佳组合为A2B2,即6一BA1.5mg4+NAA0. 05rag4. 3.3不定芽的壮芽培养 试验结果表明经过壮芽培养,两种培养基上的 不定芽木质化程度都有明显提高,叶色变深,但增殖 率也明显下降,在6-BA0.2rag4+NAA0.2rag4培 养基上的不定芽还呈现封顶和叶片脱落的现象,因 此6一BA0.5rag4+NAA0.2rag4是较好的壮芽培 养基. 3.4诱导生根培养 试验的结果表明,生根培养的NAA浓度以0. 3rag4为好;加活性炭的比不加活性炭的生根率提高 9%,根白而旺;经过壮芽培养不定芽的生根率比继代 培养后直接进行生根培养的提高15%.从移栽的结果 看,经过壮芽培养后生根的组培苗成活率也高.我们 将生根培养后的无根苗移栽发现,壮芽培养后再进行 生根的无根苗由于木质化程度较高,一星期后均长出 了新根,而未经壮芽培养的则很少长根. 4分析与讨论 4.1从诱导培养的结果看微型月季的初培养无生 长素也能诱导出从芽,这可能是由于供试材料是腋 芽,芽的生长点内含有一定量的生长素,故在无生长 素的培养基上都能萌芽分化,而外加一定量的生长 素能促进芽的生长. 4.2不同品种间离体芽诱导分化率的差异证明了 不同品种由于酶的活性及含量不同,遗传基础及代 谢不同,对植物生长调节剂的反应也不同,如何提高 黄色系列芽的诱导分化率有待进一步研究. 4.3在继代培养中,试验的结果表明微型月季组培 继代培养激素浓度不高,不定芽的增殖不是简单地 随生长素或细胞分裂素的变化而变化,其间存在明 显的交互作用,并与所接材料密切相关,用顶芽进行 继代培养其幼芽的增殖率明显低于茎段,这可能是 由于其顶端优势抑制了芽的分化,茎段的培养无顶 端优势,芽分化的潜能高于顶芽,略高的激素水平就 能发挥较大的潜能. 4.4微型月季组培苗的生根不同于其它组培苗的生 根,幼嫩的不定芽不易生根,这和我们在田间扦插的插 穗相似,组织太嫩不易生根,半木质化的插穗更易生 根,因此壮芽培养是必须的,经过壮芽培养提高不定芽 的木质化程度后生根培养才能达到较高的生根率. 综上所述,将不定芽的顶芽进行壮芽培养,下部 茎段进行继代培养有利于大量分期分批生产微型月 季组培苗.