H2S延缓采后草莓衰老及调控植物切花保鲜的信号机制（可编辑）

H2S延缓采后草莓衰老及调控植物切花保鲜的信号机制（可编辑） H2S延缓采后草莓衰老及调控植物切花保鲜的信号机制 延缓采后草莓衰老及调控植物切花保鲜的信号 机制 作 者 姓 名 翅挝童 教援 导师及职称 瑟坐 年月合肥工业大学 本论文经答辩委员会全体委员审查,确认符合合肥工业大 学硕士学位论文质量要求。 答辩委员会签名:工作单位、职称 教授 合肥工业大学 主 席: 阱 教授 安徽大学 员: 委 同志滓 教授 安徽中医学院 训宝每 教授 合肥工业大学 、?躇 教授 合肥工业大学 到食 【 之 教授 合肥工业大学 师: 导 \『歹厶 \ /独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成 果。据我所知,除了文中特别加以标志和致谢的地方外,论文中不包含其他人 已经发表 或其他教育机构的学位或证书 或撰写过的研究成果,也不包含为获得 盒目墨王些态堂 而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文 中作了明确 的说明并表示谢意。 签字日期:矽峰朋力日 学位论文作者签字:硎栅壶 学位论文版权使用授权书 有关保留、使用学位论文的规定,有权 本学位论文作者完全了解 金蟹工些太堂 保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅或 借阅。本人 可以将学位论文的全部或部分论文 内容 财务内部控制制度的内容财务内部控制制度的内容人员招聘与配置的内容项目成本控制的内容消防安全演练内容 编入有关数据库进行检 授权 金垦王些态堂 索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 保密的学位论文在解密后适用本授权书 学位论文者签名:侧 赘 签日期:加/少年月砂日 勿抄 学位论文作者毕业后去向: 电话: 工作单位: 邮编: 通讯地址:延缓采后草莓衰老及调控植物切花保鲜的信号机制 摘 要 硫化氢 ,在动物体中作为一种重要的信号分子,可 以调节很多生理反应。近年来,越来越多的证据显示,信号也参与了植物 体中的多种生理作用,如种子萌发,根形态形成,抗逆反应等。然而,信 号是否介导了植物的衰老进程目前尚不明确。本论文以采后草莓果实为研究 材 料,考察了对采后草莓果实的货架期及其体内抗氧化代谢的影响。研究结 果表明,经供体硫氢化钠水溶液释放出的气体熏蒸处理草 莓果实,可显著延长其货架期,并呈一定的浓度效应。与对照组相比,经不同 浓度供体.、.、.、.、.、.、.和. 一熏 蒸处理,均能明显延缓草莓果实腐烂指数的上升,其中. ~供体 处理的延缓效应最为显著。进一步研究表明,供体能延缓采后草莓果实硬 度的下降和果实颜色的改变,同时还可以提高还原糖,可溶性蛋白质和游离 氨 基酸的含量,有利于草莓果实抗衰老性能的提高。 活性氧的迸发并导致机体内的氧化损伤,是植物衰老进程中的显著事件。 本文对信号调节采后草莓果实的抗氧化代谢机理进行了相关研究,结果表 明,信号可显著上调采后草莓果实中的过氧化氢酶,愈创木酚过氧 化物酶,抗坏血酸过氧化物酶和谷胱甘肽还原酶等活 性氧清除酶系的活性,同时下调脂氧合酶的活性,降低过氧化氢 和超氧阴离子‘一等活性氧的水平及膜脂过氧化产物丙二醛的含 量。上述数据表明,分子可能作为一种抗氧化信号,参与了草莓果实成熟 衰老进程,行使其延长草莓果实贮藏寿命的功能。 本文对草莓果实灰霉病的主要致病菌进行了分离及鉴定,得到酿酒酵母、 黄绿青霉和梨形毛霉三株菌种;体外抑菌实验结果显示,对酿酒酵母、 黄绿青霉和梨形毛霉的生长均有显著的抑制效应,表明具有抑制草莓灰霉 病主要致病菌的功能,对延长采后草莓果实货架期有重要贡献。 此外,本论文以多种植物的切花为研究材料,考察了能否作为一种普 遍的衰老调节因子,参与调控植物切花衰老进程。实验结果表明,信号能 明显延长月季、一年蓬、土麦冬、看石榴、粉紫重瓣木槿、红花继木切花和白 杜卫茅、龙爪柳插枝的瓶插期,且呈一定的浓度效应。考查切花植物中膜脂过 氧化产物及内源的消长规律时发现,二者在衰老进程中呈显著的负 相关,新鲜切花中表现出高水平的和低水平的内源,外源信号 处理能显著提高内源的水平、下调的含量。本研究还发现,信 号能诱导一年蓬切花的花朵和龙爪柳插枝的叶片中、、及活性的上升,抑制和。一的过量产生。综上所述,通过上调植物体中 抗氧化酶的活性,降低活性氧引起的氧化损伤,可达到延缓切花植物衰老进程 的目的。 关键词:硫化氢;草莓;切花;’贮藏寿命:衰老;抗氧化;活性氧;保鲜 . , , ., ,., . , . . ? ., .., ,, ? . , ,,, . 。一 . . , , . ., , ? . , . ., ., .., ., ., ., ., ., . . . . , . ,, .门 ‘一.. . ; ;; ; : ; ; ;.致谢 三年的研究生学习生涯即将结束。在硕士毕业论文完成之际,我要向所有 支持、关心、帮助过我的人们表示最诚挚的谢意 首先,我要向我的导师张华教授致以衷心的感谢张老师为人谦和,平易 近人,他渊博的学识、严谨的科研思路、实事求是的治学态度、兢兢业业的 工 作精神是我毕生学习的楷模。本论文设计是在张老师的精心指导和悉心关怀 下 完成的。从研究课 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 的设计、实施到论文的撰写,张老师都给予了悉心指导 和 无私帮助。借此机会,我谨向张老师三年来对我学术上的精心指导与帮助表 示 最崇高的敬意和最衷心的感谢。 其次,我还要感谢李延红老师、韩卓老师、陈晓燕老师在实验过程中给予 我的无私帮助。感谢三年来与我互助互勉的各位同学,是你们在我迷茫时给 予 了极大的关心和鼓励。 同时,我要感谢我的父母、我的家人对我学习的理解、支持和关心,感谢 他们对我生活无微不至的关怀和照顾 最后,我要感谢百忙之中来参与我论文评审和答辩的各位老师,感谢你们 给我一个审视三年来学习成果的机会,这对我以后走上工作岗位将有莫大的 帮 助。再次感谢他们 胡树立 年月目录 第一章前言?. .采后果品保鲜机制..果品保鲜研究现状 ..果品保鲜机制.. ..草莓及其保鲜.植物切花保鲜机制 ..鲜切花保鲜研究现状.. ..鲜切花衰老机理? ..鲜切花保鲜技术? .硫化氢研究进展 .. 的理化特性 .. 的合成与代谢途径? .. 信号分子的作用机制.. 信号传导的研究进展.课题研究的目的、意义及内容 ..研究目的..研究意义? ..研究内容?一 第二章对采后草莓果实贮藏期及硬度、色差的影响 .材料与方法 ..供试材料及主要试剂. ..主要仪器设备? ..材料处理. ..草莓腐烂指数的统计 ..草莓果实硬度的测定?. ..草莓果皮颜色的测定? .结果与 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 .. .. 对草莓果实贮藏期的影响??一 .. 对草莓果实腐烂指数的影响?. .. 对草莓贮藏过程中硬度的影响.. .. 对草莓贮藏过程中果皮颜色的影响?.. .本章小结??.. 第三章调节采后草莓果实抗氧化防护的信号机制?.材料与方法..供试材料 及主要试剂 ..主要仪器设备 ..材料处理..实验方法.结果与分析.. 对草莓贮藏过程中活性的影响? .. 对草莓贮藏过程中活性的影响? .. 对草莓贮藏过程中活性的影响? .. 对草莓贮藏过程中活性的影响?.. .. 对草莓贮藏过程中含量的影响? .. 对草莓贮藏过程中’一含量的影响.. 对草莓贮藏过程中含量的影响? .. 对草莓贮藏过程中活性的影响? .. 对草莓贮藏过程中还原糖含量的影响. .. 对草莓贮藏过程中可溶性蛋白质含量的影响 .. 对草莓贮藏过程中游离氨基酸含量的影响? .本章小结?. 第四章草莓灰霉病主要致病菌的分离鉴定及体外抑菌实验??。 .材料与方法 ..供试材料及主要试剂 ..主要仪器设备??....??.. ..草莓果实灰霉病主要致病菌的分离纯化?. ..酵母菌的鉴定?一 ..霉菌的鉴定?. .. 体外抑菌实验.结果与分析?. ..草莓果实灰霉病主要致病菌的分离鉴定结果??. .. 对酿酒酵母的抑制作用??. .. 对黄绿青霉和梨形毛霉的抑制作用?. .本章小结第五章延缓植物切花衰老进程的抗氧化机制? .材料与方法一 ..主要试剂及设备 ..供试材料..材料处理..内源及含量的测定. .. 含量及。一产生速率的测定? .. 、、及活性的测定..】 ..统计分析.结果与分析.. .. 延缓一年蓬切花和柳条插枝衰老的抗氧化机制??一 .. 对土麦冬和红花继木切花瓶插期及衰老的影响??.. .. 对粉紫重瓣木槿切花瓶插期及衰老的影响?一 .. 对白杜卫茅插枝和看石榴切花衰老的影响.. 对月季切花衰老的影响.. .本章小结?.. 第六章结论与展望。 .结念?. .展望参考文献? 硕士期间发表论文.插图清单 图?内源的合成及代谢途径图? 信号分子的路径??. 图.两种处理方法不同浓度对草莓贮藏期的影响.. 图.两种处理方法不同浓度对草莓腐烂指数的影响?. 图. 对草莓硬度的影响?. 图? 对草莓果皮颜色的影响图. 含量 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 曲线?.. 图. 一含量标准曲线?.. 图?葡萄糖含量标准曲线?.. 图?蛋白质含量标准曲线?..: 图. 对草莓贮藏过程中活性的影响 图 对草莓贮藏过程中活性的影响 图? 对草莓贮藏过程中活性的影响. 图. 对草莓贮藏过程中活性的影响. 图 对草莓贮藏过程中含量的影响??.. 图? 对草莓贮藏过程中‘一含量的影响 图? 对草莓贮藏过程中含量的影响图. 对草莓贮藏过程中活性的影响??. 图? 对草莓贮藏过程中还原糖含量的影响图? 对草莓贮藏过程中可溶性蛋白含量的影响??. 图? 对酿酒酵母的抑制作用. 图. 对黄绿青霉的抑制作用. 图. 对梨形毛霉的抑制作用 图. 对一年蓬切花和柳条插枝瓶插期及衰老的影响?.. 图? 对土麦冬和红花继木切花瓶插期及衰老的影响?.. 图? 对粉紫重瓣木槿切花的瓶插期及衰老的影响??.. 图? 对白杜卫茅插枝和看石榴切花衰老的影响. 图. 对月季切花衰老的影响?..插表清单 表一 标准曲线取样表表. 标准曲线取样表?. 表.葡萄糖标准曲线取样表.. 表?蛋白质标准曲线取样表.. 表. 对草莓贮藏过程中游离氨基酸含量的影响. 表一酵母菌的鉴定结果. 表.霉菌的鉴定结果表.霉菌的温度试验?.. 表? 对一年蓬切花、、和活性,含量及?一产 生速率的影响表? 对龙爪柳插枝、,、和活性,含量及?一产 生速率的影响?.第一章前言 .采后果品保鲜机制 ..果品保鲜研究现状 近年来,很多果品因具有丰富的营养价值而成为人们生活中不可或缺的食 品之一。但由于受到季节性、地域性及产品易腐性等因素的限制,果品的采后 贮藏保鲜极其不易。同时,由于采摘方式不当、贮藏方法不善,或由于生理性 病害、微生物侵染的影响,导致大量果品在贮藏过程中出现果皮褐变、疲软皱 缩、低温冻害、腐烂变味等现象而损失,严重影响果品的营养价值和商品价值。 由此可见,采后损失是果品贮藏保鲜过程中一个普遍性问题,目前已受到果农 及消费者的广泛关注。 采后果品贮藏保鲜已成为全球性问题之一。很多国家水果采后贮藏保鲜早 已实现产业化,且采后增值潜力可观。而中国虽然是果品生产、销售大国, 种 植面积和产量均位于世界之首,但由于我国关于采后果品成熟衰老机制的研究 起步较晚,果品采后贮、运、销技术手段相对落后,因而,采后果品在包装、 贮运和上市的每个环节都有大量损失。因此,我们当前急需解决的问题是加强 果品采后生理研究、探究果品成熟衰老机制、采用适宜的贮藏保鲜技术降低采 后损失率以提高果品的商品价值。 现如今,高效、安全、环保、低耗的果品贮藏保鲜技术越来越受到人们的 关注。国内外已有研究表明,壳聚糖处理可以延缓果蔬成熟衰老,进而达到保 鲜的目的,这在苹果【?、梨【、辣椒【】等果蔬上均有报道。大量研究表明,. .甲基环丙烯处理对苹果【、香蕉【、鳄梨【、油桃【、草莓【】等园艺产品 的贮藏保鲜也均有效果。因为.能竞争性地与乙烯结合位点结合,这不 仅能显著抑制乙烯的释放和降低呼吸速率,还能延迟呼吸峰的出现,从而抑制 果实的成熟衰老。另外,朱向秋等?的研究表明,经.处理的果实,其 抗氧化酶如过氧化物酶、超氧化物岐化酶和过氧化氢 酶的活力均可保持在较高的水平,使细胞膜免受氧化损伤,从而延缓果实细 胞的衰老进程。水杨酸处理能抑制黄花梨果实中、、等 抗氧化酶活性的下降,降低膜脂过氧化产物丙二醛的积累量和果肉 组织相对电导率,从而达到延缓果实的成熟衰老进程?。而且,陈双建等的研 究表明,适宜浓度的处理可增强桃果实的抗冷性,这与诱导提高抗坏血酸 一谷胱甘肽循环这一抗氧化系统的活性有关 。此外,施加一定剂量的植物生 长调节剂如、、、.,也能提高果品的耐藏性,其中, 赤霉素处理能保持果实中、、等保护酶的活性,降低 及的含量,抑制膜脂过氧化作用,从而提高果品的耐贮性【】。..果品保鲜机制 果实采收后就失去了母体及土壤对其水分和营养的供应,但这并不预示着 生命的结束,因为它仍然是一个各项生命代谢活动有序进行的有机体,它们无 时无刻不在进行着呼吸作用,即植物体从外界环境中吸取氧,然后在各种酶的 作用下,将其自身含有的碳水化合物、有机酸、蛋白质等有机物氧化分解,在 此过程中会伴随着能量的释放,其中一部分能量能供给果实进行新陈代谢活动。 当果实中所有的营养物质消耗殆尽,生命代谢活动得不到能量的及时供应时, 也就意味着果实生命的终结。 果实成熟衰老是一个极其复杂的过程。该过程中会呈现出很多生理生化变 化,如呼吸加强、乙烯合成、组织软化褐变、风味物质形成等,造成果实采后 不耐贮藏。因此,了解果品衰老机制,通过调节其过程,对控制果品病害的发 生及贮藏保鲜技术的改良将有重要意义。 各类水果在贮藏期间,其呼吸强度的大小将直接影响贮藏寿命的长短。呼 吸强度越大,消耗的糖、蛋白、氨基酸等贮藏物会越多,果实的衰老过程也会 加速,从而导致果实的贮藏寿命缩短:而过低的呼吸强度会使正常的新陈代谢 发生紊乱,从而缩短贮藏寿命。因此,水果贮藏保鲜第一个关键是要在维持果 实能进行正常呼吸的前提下,将其呼吸强度控制在最低的水平。另外,乙烯是 一种能启动和促进果实成熟衰老的植物激素,果实中乙烯含量越高,果实成熟 衰老的速度越快。钱敏等研究表明,适宜浓度的二氧化碳不仅可以抑制水果的 呼吸作用,降低营养物质的损耗,抑制果胶酶和叶绿素水解酶的活性,还能抑 制乙烯的催熟作用,从而起到了延缓水果成熟衰老的作用【】。 硬度是衡量果实采后软化的重要指标之一,它与果实贮藏时间的长短有着 直接的联系。果实贮藏过程中的硬度下降是不溶性原果胶降解成可溶性果胶酸 和果胶的结果。果实采后初期,其中的原果胶物质与细胞壁紧密结合,且其水 含量高,细胞膨压较高,因而果实组织较坚硬,粘聚性较高,弹性较低。随着贮 藏时间的延长,原果胶会在果胶酶的催化下水解成为水溶性果胶,然后在渗透 压的作用下溶入细胞液中,使果实变软而富有弹性。最后,水溶性果胶经果胶 酶的进一步催化,而引发去甲酯化作用并生成果胶酸,果胶酸的粘聚性很差, 因而不能形成凝胶,同时果实中的水分会因蒸腾作用而不断损失,造成细胞膨 压不断下降,直至果实出现软溏状态,严重影响果实的口感而使果实失去食用 品质?。果实贮藏过程中的硬度大小与果胶、纤维素及半纤维素含量间的关系 在苹果、芒果和杨桃等热带水果中均有广泛报道【引。 色泽不仅影响果实的商品价值,而且还代表着果实的品质好坏。采后果实 受到机械损伤,或处于胁迫环境中,其组织内的多酚类物质极易氧化为醌类物 质而褐变,这不仅大大影响果品的外观,更导致了营养物质的流失,因此如何 抑制果实发生褐变也是贮藏保鲜的关键。多酚氧化酶是与酶促褐变紧密相关的一种酶类,低氧高二氧化碳环境可以钝化的活性并减缓单宁的氧 化反应,从而达到抑制褐变发生的效果【】。 丙二醛作为膜脂过氧化的主要产物之一,其含量的上升是膜受氧 化损伤而衰老加速的表现,它间接反映了植物在胁迫条件下受损伤的程度。已 有研究发现采后果实如苹果【】和枣【】在衰老过程中,伴随着膜脂过氧化作用的 加强。可能的原因是:自由基易作用于多价不饱和脂肪酸,启动膜脂过氧化反 应,产生对蛋白质起交联作用的丙二醛,而丙二醛使膜中的酶蛋白发生交联、 失活,以致使膜产生空隙,透性增加,细胞的各种功能受损而导致果实衰老 【 。 采后果实成熟衰老、腐烂霉变与其体内各种酶的催化活性有关,其中抗氧 化酶类如、、和活性的下降和脂氧合酶活性的上 升是导致果实衰老过程中活性氧代谢失调,膜脂过氧化加剧和氧化损 伤加重的主要原因。因为在果实衰老过程中,通过各抗氧化酶间的协同作用, 可直接或间接清除掉细胞内过量产生的具有强氧化性的如过氧化 氢和。一超氧阴离子等,防止了的级联放大作用,抑制和延缓了 细胞膜的脂质过氧化及生物大分子如核酸和蛋白质的氧化损伤,保障了细胞 内 各项生命活动的正常进行,从而起到延缓果实衰老的作用【 。果实衰老时、 、和活性的下降及和。一含量的上升,意味着生命体清除 活性氧的能力下降。由此可见,。有效提高果实中清除酶系、、 和等抗氧化酶的活性并抑制的活性,使代谢维持在较低的 水平,可以降低膜脂过氧化产物的含量,维持果实细胞膜结构的完整性, 从而达到延长果实贮藏保鲜期的效果。 ..草莓及其保鲜 .多年生 草莓× .属蔷薇科草莓属 常绿草本植物,又名地莓、红莓、洋莓等,原产于欧洲,世纪初才传入我国 而风靡华夏。草莓的果实是由花萼发育而成,不同于大多数果实由子房发育 而 成,也可以说其食用部分是假果,即我们吃的其实不是草莓的果实,而是花萼 。 在传播花粉后膨大的部分,真正的草莓果实是分布在草莓表面的很多小点【 草莓色泽鲜艳,风味独特,营养丰富,是众多果品中难得的色、香、味俱佳者, 素有“水果皇后”之美誉。草莓果实中含有葡萄糖、蔗糖、果糖、苹果酸、柠 檬酸、果胶、蛋白质、氨基酸、纤维素、胡萝素、核黄素、多种维生素、无 机盐及钾、钙、磷、铁矿物质等多种成分,其中抗坏血酸含量为~ / ~倍,比西红柿高~倍口’ 。其抗氧化能力是柑橘、苹果、 ,比柑桔高 梨、桃、猕猴桃和番茄等果蔬的~倍【 ’】。草莓不仅具有很高的食用价值, 还具有很多医疗保健功能,如清热解毒、生津止渴、利尿止泻等药理作用,抗 氧化、防衰老等保健功效和防治疾病、抗菌防癌等食疗功能。近年来,草莓的生产量呈逐年上升之势,但由于草莓为非呼吸跃变型果品 中的浆果类,其果实柔软多汁,组织娇嫩,果皮极薄,对真菌侵染具有高敏感 性,在常温?下贮藏一两天就会出现变色、变味、腐烂甚至霉变现象, 即使在冬季或低温条件下贮藏,草莓也难以长期保存‘】。另外,草莓成熟期 短,产量高,收获时间集中,使得草莓果实在采收、贮运及销售过程中易受机 械损伤和微生物侵染而导致腐烂变质,使草莓果实的采后品质迅速下降,货 架 期大大缩短,造成严重的资源浪费和经济损失,从而导致草莓种植户的积极性 大减圳。因此,如何延长草莓果实的采后贮藏寿命,是草莓产品生产中亟需解 决的问题。 目前,草莓采后保鲜已成为研究的热点,有关草莓保鲜技术的研究报道已 不少见,技术可谓多种多样,常用的保鲜技术有低温贮藏法【引、气调贮藏法 】、辐照处理法【 、高分子涂膜法【】和化学药剂处理法【】等等。虽然这些 保鲜方法对草莓的贮藏保鲜都起到了一定的效果,但由于它们或能耗大、投资 大、操作复杂,或有化学物质残留、实现条件苛刻等,贮藏保鲜效果不能达到 实际生产的需求,因而难以普及。因此,寻找安全、高效、简便、低廉的保鲜 技术显得尤为重要。 .植物切花保鲜机制 . ..鲜切花保鲜研究现状 在观赏花卉中,凡花、叶、枝、果色彩鲜艳,或具有芳香且花梗顺直、枝 叶坚挺,剪下后可水养的花类都可用做切花【 。近年来,全球经济的快速发展 和文化的不断进步带动了人们生活水平及文化修养的提高。目前,在观赏植物 及世界花卉生产中,鲜切花所占比重越来越大,它已经走进平常百姓之家,成 为美化、装饰室内不可缺少的时尚消费品,而且越来越多的人把鲜花作为一种 温馨高雅、表情达意的礼物,从而促进了鲜切花消费呈逐年上升之势,进而促 进国民经济的发展。但鲜切花瓶插期很短,因为切花离体后虽然失去了其母体 根部水分、矿质元素等营养物质的供应,但仍进行着以呼吸作用为主的各种生 命代谢活动,并伴随着很多生理性变化,如若处理不当,便会加速其萎蔫,从 而降低观赏品质。近年来,虽然我国在切花保鲜方面的研究取得了不少成果, 但与国际水平相比,仍有很大的差距。因此,研究切花的衰老机理,开发切实 可行的切花保鲜技术具有广阔的发展前景。 ..鲜切花衰老机理 ...水分代谢 水分代谢对瓶插过程中的鲜切花衰老有重要影响。花瓣衰老后期的鲜重下 降、干枯和皱缩是由于水分丧失所导致的。吸水与失水间的平衡决定了鲜切花含水量的变化,当微生物侵入导致茎维管束受阻并分泌一些有毒物质,或 受伤细胞壁发生分解而产生的一些物质和气泡造成堵塞时,鲜切花的吸水量便 会减少,最终导致水分失衡【 。金波【】等研究发现,鲜切花的衰老也受水的 影响,一般而言,低有利于改善植物体内水分的平衡,尤其当水中 等于或小于时,可以抑制细菌的繁殖,降低酶的活性,减轻对导管的堵塞, 从而延长切花的瓶插寿命。何生根【】等研究发现,月季在自来水中可维持., 而在蒸馏水中则可维持.,可能是水中存在的离子如钠离子和氟离子对切花 的毒害作用,表明瓶插水质也能影响切花寿命。 . ...蛋白质和糖代谢 瓶插过程中,鲜切花可溶性蛋白和游离氨基酸含量都发生了明显的变化。 有研究报道,瓶插的切花衰老过程中伴随着可溶性蛋白含量的逐渐下降和总 游 离氨基酸含量的不断上升,可能是蛋白质分解加强或合成减弱造成的】。用 保鲜剂处理可抑制蛋白质降解从而延缓花的衰老,说明蛋白质参与调控切花 衰 老过程。乙烯使香石竹花瓣卷曲,并发生不可逆衰老,但可溶性蛋白及游离氨 。 基酸含量无显著变化,表明蛋白质降解不能启动乙烯诱导切花衰老 鲜切花的总糖含量在贮藏和瓶插过程中呈逐渐下降趋势【 。研究发现,月 季切花采后~ 内其花瓣中可溶性糖含量迅速下降【引。鲜切花中糖含量的高 低可决定其品质好坏及瓶插期长短,如月季采收时,花瓣中淀粉含量的高低 能 影响瓶插时糖含量的高低,从而影响观赏品质的好坏和瓶插寿命的长短【引。 ...活性氧代谢 植物细胞在其生命活动过程中,会通过多种途径产生、。一、?等 活性氧,会诱导生物大分子和膜系统的过氧化作用而损伤细胞, 但植物细胞内同时存在、、、等多种清除的抗氧化酶, 从而将控制在细胞可耐受水平,即的产生与清除维持平衡状态,此 时细胞能进行正常的生命代谢【 ’。当植物处于胁迫环境时,这种平衡就会被 打破,导致过量产生,从而加剧膜脂过氧化,并产生大量的。因而, 、、、等清除酶的活性及含量等可作为植物衰老 的重要指标?。研究表明,月季、小苍兰等衰老时,其可溶性蛋白含量下降, 及的活性下降,膜透性和含量增加,。一产生速率上升【。 ...内源性植物生长调节剂 鲜切花衰老过程中,其呼吸速率的变化分为跃变型和非跃变型两种,花瓣 中的乙烯生成也可划分为跃变型和非跃变型,前者的显著特征是:乙烯含量在 花蕾期较低,在盛开期达高峰值之后降低;后者的显著特征是:乙烯含量在整 个开花过程中,均保持在较低的水平甚至有不断上升的趋势【 。而乙烯的存在 与切花衰老有着密切的联系,如香石竹花瓣的衰老及非洲菊的弯颈过程均伴随 着内源乙烯释放量的增加【 ;同时外源乙烯也能促进大部分植物切花的衰老?,可见,乙烯是植物成熟衰老的调节剂。 一般情况下,切花中赤霉素的含量随瓶插时间的延长而下降【】。 如康乃馨切花中内源的合成发生在花的早期发育阶段,在花完全开放之前 含量就开始下降,如果在下降的这段时间施加一定的外源,,就可 以延缓花的衰老【。内源的下降可能与衰老的启动有关【 。 脱落酸是天然的衰老激素,其含量一般随切花的衰老而上升。 研究显示,百合切花中的含量与其花朵的发育及衰老时间吻合,且 含量达到高峰后,花朵很快会表现出衰老症状】。外源也可显著促进蝴 碟兰等切花的成熟衰老【】。 瓶插过程中,切花的生长素含量下降【。 具有延缓和促进 衰老的双重作用,如可延缓一品红的衰老,却促进了香石竹的衰老,且低 浓度促进香石竹衰老,高浓度延缓其衰老。 郭维民等【副指出,切花瓶插过程中,一可促进可溶性蛋白质及叶绿素 的合成并降低其瓶插后期的降解,从而提高叶片及花冠品质并延缓衰老。 其实,切花的衰老与以上各种植物生长调节剂的平衡密切相关。如贮藏期 间,百合切花/及/值的大小与其花朵发育及衰老的时间吻合 【. ..鲜切花保鲜技术 切花保鲜有狭义与广义之分。狭义的切花保鲜是指消费者购回鲜花后,用 保鲜液来延长其瓶插寿命的过程。广义的切花保鲜是指切花从采收后,经修 整 处理、贮藏、运输,到上架出售的整个过程中,不仅要保持花卉的新鲜程度, 还要防止或减轻其受机械损伤、病虫害侵染、环境因子改变等引起的生理异 常, 提高花的贮藏寿命和观赏品质等。保鲜的原理是在切花保鲜剂中加入一定量的 有机和无机物质作为生命合成代谢的能源来源,同时加入乙烯抑制剂和杀菌剂, 防止微生物及其代谢产物阻碍花茎对水分的吸收,保持输导组织畅通,改善切 花的水分平衡,以达到延缓切花衰老的目的。 为克服花的凋萎和变色,确保花的品质,延长贮藏寿命和观赏期,以提高 花的商品价值和增加经济效益等,切花离体后的保鲜技术就显得极为重要。目 前,鲜切花保鲜技术包括物理、化学及生物三大类保鲜技术。常用的物理保鲜 技术有气调法、冷藏法和辐射处理法等【。,但这类方法操作复杂、成本高、能 耗大,不易于普遍推广。目前化学保鲜法是国内外鲜切花保鲜技术的主流,其 原理是在不造成环境污染的前提下,于切花的茎基部施用化学保鲜剂来调节其 生理代谢机能,如抑制微生物的繁殖和植物体内乙烯的合成等,从而延缓切花 的衰老,达到延长切花瓶插寿命的目的。常用的化学保鲜剂有水、蔗糖、乙 烯 抑制剂和拮抗剂如硝酸银和硫代硫酸银等、无机盐如钾、钙、锌等、有机酸如柠檬酸、抗坏血酸、苯甲酸等、杀菌剂如一羟基喹啉等、植物生 长调节剂如、、等及一些天然提取产物等【 。由于通常施 用的保鲜剂是通过以上某几种化合物按照特定的质量体积比调配而成,且这些 混合物的配方大多只对一种或少数几种花卉有明显功效,因而限制了其广泛应 用。现代基因工程技术是一种新兴的生物保鲜技术,它为切花保鲜提供了新思 路,实现了从基因水平上调控花的成熟衰老。目前延缓切花衰老的基因工程研 究主要集中于调控乙烯的生成与释放。业已证实,促进植物衰老的乙烯合成增 加,与合成酶、氧化酶的表达提高有关, 如果利用反义技术,抑制编码这两种酶的基因表达,就能减少乙烯合成, 从而延缓植物衰老 。如利用反义技术将合成酶基因导入香石竹, 抑制乙烯的合成,可使其观赏寿命延长倍 。可见,基因工程技术是一种具 有较广发展前景的切花保鲜技术。 .硫化氢研究进展 .. 的理化特性 是一种无色、易燃并带有强烈臭鸡蛋气味的气体。具有还原性, 被氧化能够产生单质硫、二氧化硫和硫酸盐如。水 解能产生。和卜,反应式如下:‘ ‘,即使在.的 饱和溶液中,仍有/的未解离。在体液中以气体和: 动态平衡的形式存在,从而保证了体内浓度和内环境值的稳定。 因脂溶性较强而具有原生质膜透过性,它在油脂中的溶解度比在水中的高 倍。 .. 的合成与代谢途径 如图.所示,内源性主要是由胱硫醚.合成酶和胱硫醚一 裂解酶催化.半胱氨酸.代谢产生的【】。内源性也 可以通过半胱氨酸转移酶途径,以含硫的氨基酸如半胱氨酸、蛋氨酸和同型 半 , 胱氨酸等为底物催化而生成【 。另外,内源性还可由非酶促反应还原葡 萄糖得到等量的硫化氢【 。的清除主要是通过线粒体氧化或者在细胞质中 被甲基化,也可以被血红蛋白、金属离子或含有二硫键的分子如谷胱甘 肽等所清除。主要由肾以原形或硫酸盐的形式被排泄【】。 印州嘞 ., ?斜搴;艚拍神,鑫瓣谭 。毒、, 。一‘。靠 ?嘶 弩 ;十一曲 积: ???????。??????’?????????,????一??’’?? 图内源的合成及代谓途径【 .? .. 信号分子的作用机制 /囝?匦 固亘三一一圆 图一 信号分子的路径【】 . 图.显示了在动物体中信号传导的三种途径【’】:第一,作用 于敏感的通道途径;第二,通过途径作用于神经 系统;第三,作用于细胞的电压门控和.敏感性钠离子通道。虽然信号 分子在动物体中的作用机制研究已取得了很大进展,但在植物体中的作用 机制几乎还处于空白状态。较强的还原性和在体内含量的相对稳定等性质 决定了可能作为信号物质激活植物体内的酶、分子开关甚至的表达, 从而参与植物体的许多生理功能。例如,可能与相似,作为第二信使 激活下游信号物质如激酶,引起一系列级连反应从而表现出各种生理功能; 可能直接打开蛋白质的二硫键,使原酶的反应中心暴露,从而激活原酶;也可 能激活转录因子,使某些酶或蛋白质得到表达而参与植物体各种 生理功能。总之,的一些物化特性及关于内源信号物质生理功能的研 究进展,表明很可能也参与了植物体的生理调节功能,是植物体中的信号 分子。 .. 信号传导的研究进展 在动物体中,是近年来发现的继和之后的另一种内源性气体 信号分子,它与和极其相似,能参与一系列生理和病理性调节功能, 如对动物尤其是海马的神经系统具有调节作用,调节心脏和血管系统,影响 肠 道收缩、神经传递和胰岛素分泌等【。 。同时,还能清除活性氮, 过氧亚硝酸盐和氧自由基,抑制脂质过氧化作用,从而起到保护心脏血管和 神 经元的作用。另外,等发现单独使用导致的血管舒张作用很微 弱,而同时存在和的条件下舒张效应大大增强,同时使用其他内源性 硫化物和协同作用均不能引起血管舒张作用【】,表明与信号分子 之间存在着重要的协同作用。 在植物体中,和已被证实可作为重要的信号分子参与调节植物的 生理过程。如介导了植物的生长和发育拶,参与了胁迫条件下小麦种子的 萌发和对氧化胁迫的应答【 ,能缓解盐胁迫下小麦种子萌发的抑制效应和 氧化损伤一等。而到目前为止,在植物体内作为信号分子的相关报道还比 较少,虽然近年来,越来越多的证据显示,也参与了植物体的很多生理功 能,如能诱导不定根的形成 ,促进种子萌发并缓解非生物胁迫条件下植 物体所遭受的氧化损伤【。】,通过促进叶绿体的生物合成功能来增强植物体 的 光合作用】,参与保卫细胞的信号传导从而调节气孔的运动【等。但是 是否能参与调节果品及植物切花等园艺产品的成熟衰老目前尚不明确。而 曾一直被认为是毒性气体的,已作为信号调节物质,广泛应用于果蔬的贮 藏与保鲜【。】。由于作为信号物质的提供者,外源供体的施用浓度很低,因 此,采用水溶液释放出微量的气体处理果蔬等园艺产品是安全的。 本文以草莓和植物切花为材料,探究在植物成熟衰老过程中所起的可能的 生理调节作用,具有广阔的发展前景和重要的现实意义。 .课题研究的目的、意义及内容 ..研究目的 通过外源信号处理,研究采后草莓及植物切花的贮藏保鲜机制。考察 外源熏蒸处理对采后草莓果实贮藏期、硬度及色差的影响;分析外源 熏蒸处理过程中草莓果实抗氧化酶包括、、和活性及活 性氧如和’一、丙二醛及贮藏物如还原糖和蛋白质含量 的变化规律;考察外源对草莓灰霉病主要致病菌的抑制效应;研究外源 处理对植物切花的瓶插期及抗氧化代谢的影响,从而解析延缓采后果 蔬及植物切花成熟衰老的信号调控机制。 ..研究惹义 目前,在动物体中,作为继、之后的第三种气体信号分子,其 信号调节功能已经有目共睹。但在植物体中,是否也可作为一种全新的气 体信号分子参与代谢调控目前少有报道。本课题以草莓果实及月季、一年蓬、 石榴等植物的切花和柳条插枝为实验材料,采用外源供体进行处理, 考察对采后草莓果实和植物切花贮藏保鲜的调控规律,为延长采后果品及 植物切花的贮藏保鲜期寻求更好的途径,也为研究植物体中的信号转导机 制及植物的抗衰老机理提供部分实验依据。 ..研究内容 供体溶液对草莓果实货架期及植物切花瓶插期的影响; 供体熏蒸处理过程中草莓果实硬度和果皮颜色的变化; 供体熏蒸处理过程中草莓果实还原糖、可溶性蛋白质及游离 氨基酸含量的变化; 供体溶液对植物切花中内源含量的影响; 供体溶液对草莓果实及切花中各种抗氧化酶包括过氧化物酶 、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、抗坏血酸过氧化物酶 和谷胱甘肽还原酶活性的影响; 供体溶液对草莓果实及植物切花中丙二醛、活性氧 如过氧化氢和超氧阴离子。一含量及脂氧合酶活性的影 响: 草莓灰霉病主要致病菌的分离鉴定及体外抑菌效果检测。第二章对采后草莓 果实贮藏期及硬度、色差的影响 草莓果实色泽鲜艳、柔软多汁、风味独特、营养丰富,但由于其组织娇嫩, 在草莓果实成熟与衰老过程中常伴随有软化、变色及腐烂霉变等现象的出 现, 因而采后品质下降快,极不耐贮藏。目前,已证实、、作为信号分 子对植物具有广泛的生物学效应,且大量研究表明,作为一种重要的信号 分子,对果蔬等园艺产品的成熟衰老起着重要的调节作用。】。是继 和之后的另一种内源气体信号分子,与和极其相似。近年来,越 来越多的研究表明,参与了种子萌发,根形态形成,抗逆反应等生理功能, 但是否能参与调节果蔬的成熟衰老仍然不明。本章主要探究熏蒸处理 对草莓果实的贮藏寿命、硬度及果皮颜色是否具有积极的调控作用。 .材料与方法 ..供试材料及主要试剂 供试草莓品种为宝交早生,由安徽省合肥市大圩农业生态园提供。硫氢化 钠由公司生产。 ..主要仪器设备 密闭容器, 型测色色差计。 型物性测试仪,. ..材料处理 ,表 从新鲜采摘的草莓中,选取大小和颜色均匀一致直径为.. 面红色约占%且无机械损伤、病虫害及微生物侵染的果实,备用。 ..草莓腐烂指数的统计 将挑选好的草莓果实随机分成九等份,分别放置于由.、.、.、 ‘ .、.、.、.、.及. 溶液释放的气体环 境中进行熏蒸处理。每隔 观察一次并拍照,果实腐烂指数统计参照郑永华 等?】的方法,并略作改动,即按照草莓果实表面腐烂面积大小划分为级: 级,果实表面无腐烂:级,腐烂面积不到果实面积的%;级,腐烂面积 % 介于果实面积的 %和%之间;级,腐烂面积介于果实面积的%平 之间:级,腐烂面积超过果实面积的%。腐烂指数按下述 公式 小学单位换算公式大全免费下载公式下载行测公式大全下载excel公式下载逻辑回归公式下载 计算:腐烂 指数?腐烂级别×该级果实数/最高腐烂级别×总果实数×%。..草莓果实硬 度的测定 取颗草莓果实,采用 型物性仪在草莓果实赤道部位取对位对 称的两点进行硬度的测定。结果取 个数据的平均值。 ..草莓果皮颜色的测定 取颗草莓果实,采用.型测色色差计于草莓果实缝合线左右两侧 测定表皮颜色的宰、矛 木值,其中木值代表果皮的亮度;术值代表绿红色 度,其正负值分别代表红色和绿色;书值代表蓝黄色度,其正负值分别代表黄 色和蓝色。结果取 个数据的平均值。 .结果与分析 .. 对草莓果实贮藏期的影响 本实验采用供体水溶液释放出的气体对草莓果实进行熏蒸 处理,发现能延缓草莓果实的成熟衰老进程,并呈一定的剂量效应。由图 .和均可直观看出,经水蒸气处理的对照组草莓贮藏后迅速转红,且 %的果实达到完全成熟,而经不同浓度的供体熏蒸处理组草莓的转红成 ‘ 熟进程均得到不同程度的延迟,尤其是. 处理组草莓,贮藏 后只有%的果实达到完全成熟,且在时才完全转红成熟。贮藏后, 所有组草莓果实均出现腐烂霉变现象,但各处理组草莓果实的腐烂霉变程度 均 低于对照组,且从后的照片可以看出,各处理组草莓果实的腐烂霉变速率均 小于对照组,表明供体处理能抑制草莓果实的腐烂霉变,从而延长草莓果 实的贮藏期。相比较而言,. 处理组草莓果实的贮藏期最长,且与对 叫的 照组相比延长了。另外,从~的照片可看出,浓度高于. 处理组草莓果实的霉变程度小于低浓度处理组果实,推测可能在一定浓度 范围内能抑制菌的生长。 图两种处理方法不同浓度对草莓贮藏期的影响:贮藏过程中不换处理液;:贮 藏过程中每隔换一次处理液; 代表新鲜采摘的 草莓:每张图片各组草莓的处理浓度均与图右下角正方形显示的浓度一一对 应。.. 对草莓果实腐烂指数的影响 矗. .. . . 蓉 兰 . 腐烂等级 霉变等级 图两种处理方法不同浓度对草莓腐烂指数的影响 .? :贮藏过程中不换处理液;:贮藏过程中每隔换一次处理液;:草莓的分级标 准, 、、、、分别代表了腐烂霉变程度的不同。 由图和均可看出,在整个贮藏过程中,无论是对照组还是处理组 草莓果实的腐烂指数均呈上升趋势,但不同浓度供体处理组草莓果实的腐 烂指数均低于对照组,且在贮藏前期~,各处理组腐烂指数的增幅均低 于对照组,表明供体处理抑制了草莓果实腐烂指数的上升。由图.和 还可看出,两种处理方法中,与对照组相比,均属. 。处理组延 缓腐烂指数上升的效果最为显著,这与图.显示的结果相吻合,进一步表明 . 。为最适处理浓度,该浓度将用于后续所有实验的处理组。另外,比 较图.中的与不难看出,中处理组草莓腐烂指数的上升较的要平缓, 表明贮藏过程中定时换处理液对延缓腐烂指数的上升有更明显的效果,该处 理 方法将用于后续所有实验。 .. 对草莓贮藏过程中硬度的影响 由图.可以看出,在整个实验过程中,无论是对照组,还是. ~ 供体处理组的草莓果实,其硬度总体上均呈下降趋势。与对照组相比,处理组 草莓果实硬度的下降速度较慢,且处理组硬度始终高于对照组,表明熏蒸 处理可延缓草莓果实硬度的下降,延缓其成熟软化过程,使其贮藏一段时间 后 仍保持新鲜饱满的状态。 拍 投 百 珞 .垂 加体 山 图. 对草莓硬度的影响 .? :. 。 ‘ 熏蒸处理组;:. 熏蒸处理组。 .. 对草莓贮藏过程中果皮颜色的影响 由图?可看出,在整个实验过程中,对照组和. 供体熏 蒸组草莓果实的亮度车均呈下降趋势。与对照组相比,处理组草莓果实亮 度下降的速度较慢,且处理组的亮度始终高于对照组,表明熏蒸处理可延 缓草莓亮度的下降,抑制褐变现象的出现。图和显示草莓果皮的色度 木、木值均为正,表明新鲜采摘的草莓果实已经开始出现转红现象。在整个 实验过程中,对照组和处理组草莓的色度总体均呈上升趋势,但处理组草莓 果实色度值的上升速率小于对照组,且其大小始终低于对照组,表明熏蒸 处理可降低草莓的转红速率。综上所述,熏蒸处理可延缓草莓果实颜色的 改变,使草莓在贮藏一段时间后仍保持较好的光泽度和鲜艳的颜色,即延缓 草 莓的成熟衰老进程,延长草莓的贮藏寿命和货架期。 , ” ? ? 名 帖 . 日 》., 们 , ?.?一??????????一 图. 对草莓果皮颜色的影响。 .? 、、:分别为恒温条件下,草莓果皮颜色中亮度、绿红色度’和蓝黄 。 色度‘的变化趋势。:. 。熏蒸处理组;:. 熏蒸处理组。 .本章小结 草莓是一种极易成熟腐烂的水果,采后品质迅速下降,室温条件下仅能贮 藏.,严重影响了草莓的食用价值和商品价值。 不同浓度供体处理均可降低草莓果实的腐烂指数,延长草 ~。 莓果实的贮藏期,且最适处理浓度为. 供体处理可以抑制草莓果实硬度的下降和果皮颜色的转红褐变,使 草莓果实在贮藏一段时间后仍能保持新鲜饱满和色彩鲜艳的感官品质,从而 保 持其原有的商品价值。第三章调节采后草莓果实抗氧化防护的信号机制 果蔬成熟衰老过程中会产生大量的活性氧,如过氧化氢、 超氧阴离子‘一等,使细胞遭受氧化损伤,导致细胞结构与功能的破坏, 影响果实正常的生命代谢活动,此时果蔬自身会激发体内清除酶系中 、、、等抗氧化酶活性的上升,有效抑制的过量产生, 使代谢维持在较低水平;同时抑制的活性,以减少膜脂过氧化作用, 减少的积累;另外还会通过一些代谢途径来加速还原糖、蛋白质及氨基 酸等贮藏物质的动员,以抵御果蔬采后贮藏过程中的氧化损伤,延缓果蔬的 成 熟衰老,从而提高果蔬的贮藏寿命。研究表明,能诱导胁迫条件下植物体 抗氧化酶如、、等活性的上升,抑制的过量产生和的 积累,从而促进种子萌发和不定根形成等。说明可能作为信号分子参 与了植物体抗氧化代谢的调控。本章以草莓为供试材料,对是否介导了草 莓果实贮藏过程中抗氧化代谢的调控做了研究。 。材料与方法 ..供试材料及主要试剂 供试草莓品种为宝交早生, 由安徽省合肥市大圩农业生态园提供。主要试 剂如下表所示。 名称 生产家 硫氢化钠 公司 磷酸氢二钠 汕头市西陇化工有限公司 磷酸二氢纳 汕头市西陇化工有限公司 .巯基乙醇 上海生科生物科技有限公司 聚乙烯吡咯烷酮 上海申美医药科技有限公司 四甲基乙二胺 国药集团化学试剂有限公司 国药集团化学试剂有限公司 抗坏血酸 愈创木酚 扬州万州化工有限公司 过氧化氢% 汕头市西陇化工有限公司 二硫苏糖醇 公司 上海源聚生物科技有限公司 还原型谷胱甘肽 氧化型谷胱甘肽 上海源聚生物科技有限公司 氯化镁 国药集团化学试剂有限公司 还原型辅酶 公司 扬州沪宝化学试剂有限公司 丙酮 四氯化钛 上海源聚生物科技有限公司 氨水 国药集团化学试剂有限公司 盐酸 宿州化学试剂有限公司 盐酸羟胺 汕头市西陇化工有限公司 对氨基苯磺酸 汕头市西陇化工有限公司 一萘胺 汕头市西陇化工有限公司 醋酸 无锡市展望化工试剂有限公司亚硝酸钠 宿州化学试剂有限公司 三氯乙酸 国药集团化学试剂有限公司 硫代巴比妥酸 国药集团化学试剂有限公司 葡萄糖 国药集团化学试剂有限公司 ,一二硝基水杨酸 国药集团化学试剂有限公司 氢氧化钠 上海振企化学试剂有限公司 酒石酸钾钠 国药集团化学试剂有限公司 苯酚 国药集团化学试剂有限公司 亚硫酸钠 天津市博迪化工有限公司 牛血清白蛋白 国药集团化学试剂有限公司 考马斯亮蓝一 国药集团化学试剂有限公司 ..主要仪器设备 仪器名称 生产家 电热恒温鼓风干燥箱 上海三发科学仪器有限公司 电子天平精确度. 上海精科天美科学仪器有限公司 一型生化培养箱 上海三发科学仪器有限公司 一型紫外分光光度计 上海精密科学仪器有限公司 ?数显恒温水浴锅 江苏国胜实验仪器厂 贝克曼离心机 美国贝克曼库尔特有限公司 氨基酸分析仪 美国贝克曼库尔特有限公司 ..材料处理 从新鲜采摘的草莓中,选取大小和颜色均匀一致直径为.. ,表 面红色约占%且无机械损伤、病虫害及微生物侵染的果实。取十颗草莓在 低温条件下按四分法取样,并迅速置于.?环境中冷冻保存。将剩下的草莓果 实随机分成两等份,分别放置于由.和. ?溶液释放的 气体环境中进行熏蒸处理。然后每隔在低温条件下按上述方法取样,并迅 速置于.?环境中冷冻贮藏,备用。 ..实验方法 ...草莓贮藏过程中活性的测定【】 在过氧化氢的催化下,过氧化物酶能使愈创木酚氧化生 成茶褐色物质,该物质在 处有最大吸收峰,采用分光光度计测定 处的吸光值变化,即可计算出的活性。 ‘ 酶液制各:取.和. 熏蒸处理后的冷冻草莓样品各 ., ..,放入预冷的研钵中,加入 磷酸缓冲液, ,上清液 。和少量的石英砂,冰浴研磨至匀浆,?下,离一 即为粗酶液。 ’ . 吸光值的测定: 的反应体系中含. 缓冲 液含.%愈创木酚, %和 . 粗酶液。以不加的空 白管作为参比溶液,最后向反应体系中加入启动反应,且秒表计时开始, 立即于分光光度计上测量反应体系在 处的吸光度值,每 读数一次, 记录 内的吸光度值。 结果计算:以每内变化.为个过氧化物酶活性单位表 小。 ?× ;寸霸』物醢汪吐,,?:小一 过氧化物酶活性【/. 入 尺 天 意瓦‰ 一一反应时间内吸光度值的变化; ~一草莓果实鲜重; 一一提取粗酶液总体积; 一一测定时所用的粗酶液体积; 一一反应时间。 ...草莓贮藏过程中活性的测定【?】 在 波长下有最大吸收峰,过氧化氢酶能分解, 使反应体系在 处的吸光值随反应时间的延长而降低,因而可通过测定 处的吸光值变化计算出的活性。 粗酶液制备方法同活性测定。。 . 活力测定: 反应体系中含有. 缓 冲液和 %,最后加入?粗酶液启动反应,反应开始后每隔 记录一次 处的吸光度值。以内减少.的酶量为个 活力单位/?。 ...草莓