VC标准曲线

VC 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 曲线 药用的维生素c是人工合成的。合成的方法有多种。一般是由葡萄糖制成D-山梨醇，再用黑乙酸菌(Acetobacter Suboxydans)氧化发酵，生成L-山梨糖，经缩合生成二丙酮-L-山梨糖，再氧化生成二丙酮-2-酮-L-葡萄糖酸，然后酯化成2-酮-L-葡萄糖酸甲酯，与甲醇钠作用生成抗坏血酸钠，与盐酸加热制成抗坏血酸。 所以它指的就是你的Vc含量，严格意义上来讲是L-抗坏血酸。 通常抗坏血酸总量被认为是维生素C( V itam in C, VC )和其氧化形式二十二碳六烯酸( docosahexaeno ic _ac id, DHA ) 的总和 2,4-二硝基苯肼比色法 8 原理 总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸,样品中还原型抗坏血酸经活性炭 氧化为脱氢抗坏血酸,再与2,4-二硝基苯肼作用生成红色脎,根据脎在硫酸溶液中的含量 与总抗坏血酸含量成正比,进行比色定量。 9 试剂 本实验用水均为蒸馏水。试剂纯度均为分析纯。 9.1 4.5mol/L硫酸: 谨慎地加硫酸(比重1.84)250mL于700mL水中,冷却后用水稀释至 1000mL。 9.2 85%硫酸:谨慎地加900mL硫酸(比重1.84)于100mL水中。 9.3 2%2,4-二硝基苯肼溶液:溶解2g2,4-二硝基苯肼于100mL4.5mol/L硫酸内,过滤。 不用时存于冰箱内,每次用前必须过滤。 9.4 2%草酸溶液:溶解20g草酸(H2C2O2)于700mL水中,稀释至1000mL。 9.5 1%草酸溶液:稀释500mL2%草酸溶液到1000mL。 9.6 1%硫脲溶液:溶解5g硫脲于500mL1%草酸溶液中。 9.7 2%硫脲溶液:溶解10g硫脲于500mL1%草酸溶液中。 9.8 1mol/L盐酸:取100ml盐酸,加入水中,并稀释至1200mL。 9.9 抗坏血酸标准溶液:溶解100mg纯抗坏血酸于100 mL1%草酸中,配成每毫升相当于1mg 抗坏血酸。 9.10 活性炭:将100g活性炭加到750mL 1mol/L盐酸中,回流1,2h,过滤,用水洗数次, 至滤液中无铁离子(Fe3+)为止,然后置于110?烘箱中烘干。 检验铁离子方法:利用普鲁士蓝反应。将2%亚铁氰化钾与1%盐酸等量混合,将上述 洗出滤液滴入,如有铁离子则产生蓝色沉淀。 10 仪器和设备 10.1 恒温箱:37 ?0.5? 。 10.2 可见-紫外分光光度计。 10.3 捣碎机。 11 操作步骤 11.1 样品的制备 全部实验过程应避光。 11.1.1 鲜样的制备:称100g鲜样和100g2%草酸溶液,倒入捣碎机中打成匀浆,取10,40g 匀浆(含1,2mg抗坏血酸)倒入100mL容量瓶中,用1%草酸溶液稀释至刻度,混匀。 11.1.2 干样制备:称1,4g干样(含1,2mg抗坏血酸)放入乳钵内,加入1%草酸溶液磨成匀 浆,倒入100mL容量瓶内,用1%草酸溶液稀释至刻度,混匀。 11.1.3 将(11.1.1)和(11.1.2)液过滤,滤液备用。不易过滤的样品可用离心机沉淀后, 倾出上清液,过滤,备用。 11.2 氧化处理:取25mL上述滤液,加入2g活性炭,振摇1min,过滤,弃去最初数毫升 滤液。取10mL此氧化提取液,加入10mL2%硫脲溶液,混匀。 11.3 呈色反应 11.3.1 于三个试管中各加入4mL稀释液(11.2)。一个试管作为空白,在其余试管中加入 恒温箱或水浴中,保温3h。 1.0mL2%2,4-二硝基苯肼溶液,将所有试管放入37?0.5? 11.3.2 3h后取出,除空白管外,将所有试管放入冰水中。空白管取出后使其冷到室温, 然后加入1.0mL2%2,4-二硝基苯肼溶液,在室温中放置10,15min后放入冰水内。其余步骤 同样品。 11.4 85%硫酸处理:当试管放入冰水后,向每一试管中加入5mL 85 %硫酸,滴加时间至 少需要1min,需边加边摇动试管。将试管自冰水中取出,在室温放置30min后比色。 11.5 比色:用1cm比色杯,以空白液调零点,于490nm波长测吸光值。 11.6 标准曲线绘制 11.6.1 加2g活性炭于50mL标准溶液中,摇动1min，过滤。 11.6.2 取10mL滤液放入500mL容量瓶中,加5.0g硫脲,用1%草酸溶液稀释至刻度,抗坏血 酸浓度20μg/mL。 11.6.3 取10、20、30、40、50mL稀释液,分别放入5个50mL容量瓶中,用1%硫脲溶液 稀释至刻度,使最后稀释液中抗坏血酸的浓度分别为4、8、12、16、20μg/mL。 11.6.4 按样品测定步骤形成脎并比色。 11.8.5 以吸光值为纵坐标,以抗坏血酸浓度(μg/mL)为横坐标绘制标准曲线。 12 计算 c•V 100 X=?????×F×???? ............................(2) m 1000 式中:X?—样品中总抗坏血酸含量,mg/100g; c?一由标准曲线查得或由回归方程算得“样品氧化液”中总抗坏血酸的浓度,μg/ mL; V?—试样用1%草酸溶液定容的体积,mL; F??样品氧化处理过程中的稀释倍数; m??试样质量,g。 13 结果的允许差:同一实验室平行或重复测定相对偏差绝对值?10%。 空白:0.062?0.0055 4μg/mL 0.162 8μg/mL 0.243 12μg/mL 0.360 16μg/mL 0.446 20μg/mL 0.532 线性方程:Y=0.0233X+0.0039 2R=0.9978 一、原理 还原型抗坏血酸(AsA)可以把铁离子还原成亚铁离子，亚铁离子与红菲咯啉(4,7-二苯基-1,10-菲咯啉，BP)反应形成红色螯合物。在534nm波长的吸收值与AsA含量正相关，故可用比色法测定。 二、仪器与用具 离心机;分光光度计;研钵;试管。 三、试剂 5%三氯乙酸(TCA);无水乙醇溶液;0.4%磷酸,乙醇溶液;0.5%BP,乙醇溶液;0.03%FeCl3,乙醇溶液(请注意结晶水合物需要扣除结晶水含量，试剂浓度不在99%以上的需要换算成实际质量) 四、步骤 1. 制作标准曲线配制浓度为，1mg/L ，2mg/L，4mg/L，8mg/L，10mg/L，15mg/L，25mg/L的AsA系列标准液。 25mg/L抗坏血酸:准确称取2.5mg抗坏血酸溶于水定容至100mL容量瓶。 15 mg/L抗坏血酸:从25mg/L抗坏血酸溶剂中吸取15mL定容至25mL 10mg/L抗坏血酸:从25mg/L抗坏血酸溶剂中吸取10mL定容至25mL 8mg/L抗坏血酸:从25mg/L抗坏血酸溶剂中吸取8mL定容至25mL 4mg/L抗坏血酸:从25mg/L抗坏血酸溶剂中吸取4mL定容至25mL 2 mg/L抗坏血酸:从25mg/L抗坏血酸溶剂中吸取2mL定容至25mL 1 mg/L抗坏血酸:从25mg/L抗坏血酸溶剂中吸取1mL定容至25mL 取各浓度标准液1.0ml于试管中，加入1.0ml 5%TCA、1.0ml乙醇摇匀，再依次加入0.5ml ,乙醇，总体积5.0ml。将溶液0.4%HPO,乙醇、1.0ml 0.5%BP,乙醇、0.5ml 0.03%FeCl334 置于30?下反应90min，然后测定A534。以AsA浓度为横坐标，以A534为纵坐标绘制标准曲线，求出线性方程。整个实验需要避光，如果当天做不完，试剂需要在冰箱冷藏室保存。 2. 提取取植物叶片1.0g，按1?5(W/V)加入5%TCA研磨，4000r/min离心10min，上清液供测定。在氮气保护中研磨且避光做不到，也可直接超声10min后取上清液测定，最好能过滤或离心。 3. 测定 (1)AsA测定取1.0ml样品提取液于试管中，按上述相同的方法进行测定，并根据标准曲线计算AsA含量。 AsA标准曲线: -0.0895 1μg/mL -0.058 2μg/mL -0.0317 4μg/mL 0.0321 8μg/mL 0.0648 10μg/mL 0.1662 15μg/mL 0.3143 25μg/mL Y=59.535X+5.899 2R=0.9971 第二个方法仅仅是试剂毒性较小，两者测定VC含量理论上应该没有什么差异