三种中草药抗诱变遗传能力分析

三种中草药抗诱变能力的遗传 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 作    者：张欢欢 指导老师：庞振凌 摘要：采用不同浓度的甘草、绞股蓝、葛花的水提液及叠氮化钠联合处理蚕豆根尖，利用蚕豆根尖微核技术检测蚕豆根尖细胞染毒时在不同浓度三种中草药作用下的微核率，探讨这三种中草药的抗诱变能力。微核实验结果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明，绞股蓝、葛花的中高剂量组，甘草的低中高剂量组均能降低三氧化铬诱发的微核率，绞股蓝、葛花的最低剂量组对蚕豆根尖微核率产生的影响较小，当升高到一定浓度后，蚕豆根尖微核率明显降低，表现出一定的剂量效应关系。综合分析，推测甘草、绞股蓝、葛花都具有一定的抗诱变作用，甘草的效果最好。 关键词：中草药；抗诱变；微核    引言 突变是生物机体的遗传物质（染色体或基因），所发生的可遗传的变异。研究表明，很多严重危害人类健康的疾病比如肿瘤、遗传性疾病、某些代谢障碍、以及衰老的发生都与突变作用有关[1-2]。突变可以分为自发突变和诱发突变两种情况，而诱变是引起突变的主要类型[3]。但是部分诱变物由于其重要的使用价值如肿瘤的放疗和化疗、食品添加剂或职业性接触等因素使人们不可避免要接触，因此人们试图寻找有效的抗诱变物来降低这些有害物质对人类的损伤。 中草药是天然产物，种类繁多，资源丰富，药效广泛，含有大量生物活性成分，且有毒副作用小、不良反应少等特点，因此从中草药中寻找抗诱变成分已经成为中医药领域的一个研究热点[4]。本研究以蚕豆根尖微核实验研究甘草、绞股蓝、葛花这三种中草药的抗突变作用，为通过饮食途径预防肿瘤等疾病的发生提供实验依据。 微核（micronucleus, 简称MCN），也叫卫星核，是真核类生物染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。微核往往是各种理化因子，如辐射、化学药剂对分裂细胞作用而产生的。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样，一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断片产生的。这些断片或染色体在分裂过程中行动滞后，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即形成了微核。目前微核实验已被公认为筛选致突变性的主要方法之一。蚕豆根尖微核实验是一种以染色体损伤及纺锤丝毒性等为测试终点的植物微核监测方法；微核是常用的遗传毒理学指标之一，指示染色体或纺锤体的损伤。由于这种损伤会因细胞受到的外界诱变因子的作用而加剧，而微核产生的数量又可与诱变因子剂量的强弱成正比，因此可以用微核出现的频率来评价环境诱变因子对生物遗传物质的损伤程度。 1 实验部分 1.1 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 及仪器 实验材料：松滋青皮豆（Vicia faba Linn）、甘草（Radix Glycyrrhiza）、绞股蓝（Fiveleaf Gynostemma Herb）、葛花（Pueraria lobata） 药品与试剂：三氧化铬、卡诺氏固定液（乙醇：冰醋酸 = 3:1现配现用）、70%乙醇、醋酸洋红、蒸馏水、6 mol/LHCL等。 实验仪器：光学显微镜、恒温培养箱、电冰箱、分析天平计数器、镊子、量筒、容量瓶、培养皿、载玻片及盖玻片等。    1.2 实验方法和步骤 1.2.1　材料处理 浸种：选取饱满、大小均匀的蚕豆种子放入盛有自来水托盘中，置25℃温箱中，浸种24 h，期间至少换水2次。 催芽：待种子吸胀后，用纱布包裹置托盘内，25 ℃的培养箱中不照光培养生根，其间要注意保持湿度，至根长长度为2 cm ~ 5 cm备用[5] 。 三种中草药的制取：采用传统煎法提取。称取甘草、绞股蓝、葛花各100 g，加入蒸馏水500 ml，煮沸后10 min文火煎二次，收集二次药液过滤定容至100 ml当于生药量1 g/ml，再用蒸馏水配制成不同浓度的甘草汁、绞股蓝、葛花溶液各0.1 g/ ml、0.25 g/ml、0.5 g/ml、1 g/ml，4 ℃备用[6] 。 1.2.2　蚕豆根尖装片的制备 染毒：实验分为１４个组，甘草４个浓度梯度、绞股蓝４个浓度梯度、葛花４个浓度梯度的实验组，浓度梯度分别为0.1 g/ ml、0.25 g/ml、0.5 g/ml、1 g/ml，每个梯度各加10 ml，并且各加2.6 mmol/ml三氧化铬10 ml；另设对照组（加等量三氧化铬），空白组（加等量蒸馏水），每个组放入三个根尖发育良好的蚕豆，根尖浸没液体即可，然后置于25 ℃的恒温箱中培养24 h。 恢复培养：将处理后的蚕豆用蒸馏水浸洗3，每次2~3 min。将洗净的蚕豆再放入铺好脱脂棉的托盘里，25 ℃温箱中恢复培养22~24 h。 固定：将恢复后的蚕豆种子从根尖顶端切下１cm长的幼根，用卡诺氏固定液固定20～24 h。 酸解：固定后的根尖用蒸馏水浸洗2次，每次5 min。加入6 mol/L HCL酸解，室温下解离10 min至根尖软化。 染色：吸去盐酸，用蒸馏水浸没幼根3次，每次1 min~2 min，吸干后制片时截下1~2 mm根尖，滴一滴醋酸洋红，染色5~8 min，压片。 压片：盖上盖玻片，覆一层吸水纸，用带橡皮头的铅笔垂直敲打，或以拇指垂直紧压盖玻片（注意勿使盖玻片搓动），使材料分散压平，便于观察[7]。 镜检，每组至少观察3个根尖, 每个根尖统计1000 个细胞，统计微核千分率MCN/‰。 2  结果与分析 2.1  数据的处理 本实验用0.1 g/mL、0.25 g/mL、0.5 g/mL、1.0 g/mL的各4个不同浓度的甘草、绞股蓝、葛花水提取液中分别加入等体积等浓度的三氧化铬作实验组，用三氧化铬作阳性对照，用蒸馏水作阴性对照，观察它们对蚕豆根尖微核率的影响。然后按照以下公式计算微核率、微核指数和抑制率。实验结果见表1。 测试样品的微核数  MCN （‰）=  ——————————   ×1000‰ 测试样品观察的细胞数 阳性对照微核数-试验样本微核数 抑制率（%）= ———————————————— ×100% 阳性对照微核数  表1  甘草、绞股蓝、葛花水提取液对三氧化铬诱导的蚕豆根尖微核率的影响 组别 中药水提取液/(g/ml) 三氧化铬浓度/(mmol/ml) 平均微核率(MCN)/‰ 抑制率/% 阳性对照 阴性对照 甘草 绞股蓝 葛花 蒸馏水 0 0.1 0.25 0.5 1.0 0.1 0.25 0.5 1.0 0.1 0.25 0.5 1.0 0 2.6 2.6 2.6 2.6 2.6 2.6 2.6 2.6 2.6 2.6 2.6 2.6 2.6 8.56±0.41 36.21±1.06 30.01±2.19 22.33±1.50 17.01±0.76 11.33±1.01 33.33±3.10 25.67±1.50 20.67±1.71 15.57±0.93 35.67±1.66 29.01±0.98 25.33±0.78 18.34±1.32 100 0 18.20 44.00 54.10 60.36 14.30 30.63 44.14 57.66 13.71 21.60 35.00 50.50           **与对照组相比，P<0.01 2.2  相关分析 三氧化铬是一种染色体断裂剂，可使遗传物质损伤产生染色体片段即微核等异常现象。 用不同浓度的甘草、绞股蓝、葛花水提取液处理三氧化铬诱导的蚕豆根尖细胞，通过测算细胞微核率及抑制率分析这三种中药不同浓度对遗传毒性的影响，见表1。 根据图表分析可以得出，各浓度的三种中草药提取液与阳性对照之间均有显著的统计学差异(P<0.01)，随着药液浓度的升高，蚕豆根尖细胞产生的微核率降低，绞股蓝水提取液浓度从0.1 g/ml递增到1.0 g/ml时，微核率从33.33 ‰降到15.57 ‰ ；葛花水水提取液浓度从0.1 g/ml递增到1.0 g/ml时，微核率从35.67 ‰降到18.34 ‰ ；甘草的作用效果最明显，浓度为0.1时，蚕豆根尖细胞微核率低于同浓度时绞股蓝和葛花处理蚕豆根尖细胞的微核率。抑制率随三种中草药浓度升高而增强，甘草的高剂量组效果最明显，抑制率为60.36%。 以上结果表明，甘草、绞股蓝、葛花水提取液对三氧化铬诱导的蚕豆根尖细胞微核均有抑制作用，尤其是绞股蓝、葛花的中高剂量组，甘草的低中高剂量组， 证明 住所证明下载场所使用证明下载诊断证明下载住所证明下载爱问住所证明下载爱问 这三种中药水提取液具有抑制遗传毒性的效果，有一定的抗诱变作用。 3  讨论 目前对于中药抗诱变的作用机理有很多不同的解释，许多学者采用了不同的方法对中药的抗诱变作用进行了研究，并且认为，抗突变剂对遗传物质的保护作用可能通过两种途径。一是在细胞膜外发挥直接的去诱变作用，包括阻止诱变剂的摄入和形成，直接灭活已存在的前突变剂和致突变剂。二是在细胞内发挥作用，如阻止间接诱变剂的活化，阻止诱变剂到达靶作用点或阻止诱变剂与靶作用点发生作用，增强机体解毒酶活性，消除已存在的致突变自由基，促进损伤的DNA修复等[8-9]。 本实验选用的是对蚕豆根尖进行中药浸润处理的方法，然后采用微核实验检测中药甘草、绞股蓝、葛花的抗诱变作用。通过实验结果与分析可以得出，一定浓度的甘草、绞股蓝、葛花可以减轻致突变剂三氧化铬对正常蚕豆根尖细胞的损伤，降低细胞诱变率，并且甘草的作用效果最好。 说明 关于失联党员情况说明岗位说明总经理岗位说明书会计岗位说明书行政主管岗位说明书 甘草、绞股蓝、葛花具有一定的抗诱变作用，可以抑制一些诱变剂和致癌剂所致的突变。但是中药的化学成分较为复杂，药理作用较为广泛，其抗肿瘤的机制是从多层面、多环节、多部位发挥作用的，显示出明显的多靶点效应，而本实验只是利用蚕豆根尖微核实验技术直观的得出结果，对中药甘草、绞股蓝及葛花的抗诱变作用机制尚不了解。 我国中药资源丰富，所以从中草药中筛选抗癌药物具有得天独厚的优势，并对肿瘤的中医药治疗及其机制进行了大量科学研究，已取得一定的成就。当今，国外也出现了重视中药药效的热潮，从中药中提取有效的抗肿瘤物质在国外也成为研究热点。过去研究多偏重于对肿瘤直接杀伤活性的的评估，存在较大的局限性和片面性，药物选择单味药及有效成分较多，对中药复方采用拆分方法寻找主要活性成分，其结果不能说明其作用机制。今后应充分利用现代肿瘤学的研究成果，更新理论思路，瞄准新的治疗靶点，最大限度的利用国内外已有的体内、外筛选模型和方法，多方位研究中药的作用机制。相信随着药物筛选手段的逐步提高，更为合理的实验模型的建立，中药抗肿瘤作用机制的深入研究，具有更好疗效的新药将会不断问世[10]。 参 考 文 献 [1] Hahn W C，Weinberg R A.Modelling the Molecular Circuitry of Cancer[J].Nat Rev Cancer,2002,2(5):331-341. 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Genetic analysis of three kinds of Chinese herbal medicine antimutagenic ability  ZHANG Huan-huan Abstract: Using different concentration of licorice root,Gynostemma pentaphyllum,Puerari- a flower water extract and sodium azide combined treatment of Vicia faba root tip,The detection of Vicia faba root tip cells of Vicia faba root tip cell micronucleustechnique in herbal medicine in the effect of different concentration of three kinds of the micronucleus rate of Chinese herbal medicine, these three kinds ofanti mutation capability. Micronucleus test results show that, in the high dose group of Gynostemma pentaphyllum, Pueraria flower, high dose group in licorice can reduce three of chromium oxide induced micronucleus rate, smaller minimum dose groupGynostemma pentaphyllum, Pueraria flower rate of Vicia faba root tip micronucleus, when up to a certain concentration, Vicia faba root tipmicronucleus rate reduced, showed a dose effect relationship. Comprehensive analysis, licorice root, Gynostemma pentaphyllum, Pueraria flower that has certain anti mutagenic effect, the best effect of glycyrrhiza Key words: Chinese herbal medicine; Anti mutation; Mircronucleus