实验二酵母菌的形态观察及死活细胞鉴定霉菌的形态观察
新乡医学院三全学院实验课教案首页
课程名称:微生物实验课 授课教师姓名: 杜晓娜 助教
实验二 真菌的观察 授课题目 (酵母菌的形态观察及死活细胞鉴定、霉菌的形态观察) 授课对象 2011级专科生物技术班
(1)理论授课部分: 实验目的，实验原理(10 min);
实验步骤与操作(15 min); 时间分配
实验注意事项(5min)
(2)实验操作部分:学生实验操作练习(90 min)
1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式
2.学习鉴别死活细胞的实验方法。 课时目标
3.观察霉菌的形态特征
授课重点 酵母菌和霉菌的形态及繁殖方式;美蓝染液水浸片鉴定死活细胞的方法 授课难点 酵母菌和霉菌的形态观察及其繁殖方式
授课形式 小班授课
板书理论讲解、指导学生实验操作练习 授课方法
教材:
沈萍，陈向东(微生物实验(第四版)，高等教育出版社，2007
参考文献: 参考文献 ,(沈萍，范秀容，李广武(微生物学实验(第三版)，高等教育出版社，
1999
,(吴坤，张世敏(微生物学实验技术，气象出版社，2004
1.描述实验结果，包括观察到的酵母菌形态以及死活细胞鉴定结果; 思考题
2.在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌?
教研室主任教研室主任(签字 ) 课程负责人(签字) 及课程负责
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年 月 日 年 月 日
新乡医学院实验课教案
单位: 生命科学技术系发酵工程教研室 任课教师:杜晓娜
基本内容 教学手段和时间分配
实验二 真菌的观察
酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定、霉菌形态观察
一、实验目的
1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式
2.学习鉴别死活细胞的实验方法。
3.观察霉菌的形态特征
4.进一步熟悉掌握无菌操作技术
二、实验原理
1. 酵母菌
酵母菌是单细胞的真核微生物，形态与细菌类似，菌落表面光滑、
出芽繁殖:是酵母菌的主大而突起、湿润、稍透明。菌体比细菌大而且不运动，是常见细菌的要无性繁殖方式;出芽繁几倍到几十倍，在高倍镜下可以清楚看到。酵母菌的繁殖方式分为无殖的过程是在成熟的酵
母菌细胞表面，向外突出性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。芽殖是酵母菌普遍的无性
形成芽体，然后部分核物繁殖方式，少数为裂殖;有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。 质和细胞质进入芽体
内。当芽体长到一定程度由于细胞个体大，采取涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通
时，两细胞之间形成横过美蓝染液水浸片或水一碘液水浸片法来观察酵母的形态和芽殖方壁，随后脱离母细胞，成
为独立的新个体(子细式。
胞)。???假菌丝:未
同时，采用美蓝染液水浸片法还可以对酵母的死、活细胞进行鉴脱落没细胞的芽细胞上
又长出新芽。 别。美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用
分裂繁殖:如易变裂殖酵美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较母，当细胞长到一定大小
时，核先分裂为二，接着强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代形成隔膜将细胞分开，成谢作用微弱或死的细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染为两个子细胞。(裂殖与
细菌类似) 成蓝色或淡蓝色。因此，本实验通过美蓝染液水浸片法观察酵母细胞
形态和出芽生殖方式以及鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。(细胞之间将出芽繁殖用图画出，使
学生可以形象的理解，并单个分散或假丝状;球状、卵圆状或假丝状)
有目的的进行观察
2. 霉菌
霉菌可产生复合分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌
丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌
丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重
要依据。霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多，常是细
菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。可以采
用直接制片和透明胶带法观察，也可以采取载玻片培养观察法，通过
无菌操作将薄层培养基琼脂置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，
使菌丝体在载玻片和盖玻片之间的培养基中生长，将培养物直接置于
显微镜下可观察到霉菌自然生长状态并可连续观察不同发育期的菌
体结构特征变化。对霉菌可利用乳酸石炭酸棉蓝染液进行染色，盖上
盖玻片后制成霉菌制片镜检。石炭酸可以杀死菌体及孢子并可以防
腐，乳酸可以保持菌体不变形，棉蓝使菌体着色。同时，这种霉菌制
片方法不易干燥，能防止孢子飞散，用树胶封固后可制成永久标本长
期保存。
(菌落干燥、大而疏松或大而致密、不透明、颜色多样;细胞之
间丝状交织)
三、试剂与器材
1.材料 酵母菌、霉菌;
2.试剂 吕氏碱性美蓝染色液，乳酸石炭酸棉蓝染液;
3.器材 显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、洒精灯等。
四、实验内容
1.酵母菌---美蓝染液水浸片法
?制片:载玻片中央滴加一滴0.1%美蓝染液，无菌操作下用接
染液:染液适量，不宜过种环挑取少许酵母菌置于染液中，混合均匀;
多或者过少，否则用盖玻
?染色:用镊子取一块盖玻片，将盖玻片一边与菌液接触，缓慢片覆盖时，染液过多则会
溢出，过少则会产生大量将盖玻片倾斜并覆盖在菌液上，染色3min;
气泡
?镜检:用低倍镜和高倍镜观察酵母菌形态和出芽情况，并根据混合:由于细胞较大，用
接种环将菌体与染料混颜色区分死活细胞;
合时不要剧烈涂抹，以免
?30分钟后再镜检观察，注意死活细胞数量是否发生变化。 破坏细胞
加盖玻片:用镊子取一块 盖玻片，将盖玻片的一边
与菌液接触，缓慢将盖玻
片倾斜并覆盖在菌液上，
防止水泡产生
30分钟内要注意加染
料，防止干燥
2.霉菌---乳酸石炭酸棉蓝直接压片法观察
?用牙签从霉菌琼脂平板培养物取下一块薄薄的琼脂块(要薄
些)，?50%酒精溶液中洗去脱落孢子?使用牙签将霉菌培养基放于压片:琼脂块要薄些;
用镊子和用解剖针取载玻片上，加盖玻片?手指用力均匀按压2-3次，使霉菌平铺载玻片
菌时要细心，尽可能上，取下盖玻片，将培养基碎块挑出?滴加一滴棉蓝染液，加盖玻片保持霉菌自然生长状
态，尽量减少菌丝断吸水纸吸取多余染液?镜检:用低倍镜和高倍镜观察霉菌的形态
裂及形态破坏;盖盖
玻片时避免气泡产
生。 五、关键步骤及注意事项
?染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液溢出或出
现大量气泡。
?用镊子取一块盖玻片，先将一侧与菌液接触，然后慢慢将盖玻
片放下，使其盖在菌液上，盖玻片不宜平着放下，避免气泡产生。
?用接种环将菌体与染料混合时不要剧烈涂抹，以免破坏细胞。
?在直接制片观察过程中，用镊子和用解剖针取菌时要细心，尽
量减少菌丝断裂及形态破坏，盖盖玻片时避免气泡产生。
六、思考题
1.绘制高倍镜下酵母菌和霉菌的形态特征图;
2.30分钟后，酵母菌死活细胞的变化并分析原因。
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