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MAdCAM-1在大鼠小肠移植肠管中的表达及其意义

MAdCAM-1在大鼠小肠移植肠管中的表达及其意义 MAdCAM一1在大鼠小肠移植肠管中的表达及其意义刘志勇欧阳忠 (赣南医学院第一附属医院，江西赣州 341000) [摘要]【目的】通过建立大鼠小肠移植模型。观察粘附素细胞粘附分子一1(MAdCAM-1)在大鼠小肠移植肠管中的表达及移植肠管的改变。【方法】实验分三组，第1组为同系同基因移植(从LEW鼠到LEW鼠)，第 Ⅱ组为异系同基因移植(从D八鼠到LEW鼠)；第Ⅲ组为使用抗一MAdCAM-1抗体的异糸同基因移植。将 DarkAgouti(DA)鼠的小肠异位移植到Lewis(LEW)鼠中。观察各组...

MAdCAM一1在大鼠小肠移植肠管中的表达及其意义刘志勇欧阳忠 (赣南医学院第一附属医院，江西赣州 341000) [摘要]【目的】通过建立大鼠小肠移植模型。观察粘附素细胞粘附分子一1(MAdCAM-1)在大鼠小肠移植肠管中的表达及移植肠管的改变。【方法】实验分三组，第1组为同系同基因移植(从LEW鼠到LEW鼠)，第 Ⅱ组为异系同基因移植(从D八鼠到LEW鼠)；第Ⅲ组为使用抗一MAdCAM-1抗体的异糸同基因移植。将 DarkAgouti(DA)鼠的小肠异位移植到Lewis(LEW)鼠中。观察各组移植肠管的形态和组织学变化；’并用免疫染色检测MAdCAM-1和整合素a4J37在移植肠管中的表达。通过荧光激活细胞分类术来分析移植肠管中肠系膜淋巴结和肠管Peyefs淋巴结的淋巴细胞漫润情况。【结果】实验组大鼠移植肠管存活期为(7．0士3．3) d，对照组为(24．6土8．4)d(P 设计实验分三组，第1组为同系同基因移植，从LEW鼠到LEW鼠；第Ⅱ组为异系同基因移植，从DA鼠到LEW鼠；第Ⅲ组为使用抗一MAd- CAM一1抗体的异系同基因移植。在第Ⅲ组中对取出的移植肠管的肠系膜上动脉注入抗一MAdCAM一1抗体[购于日本SLC(Shizuo— ka，Japan)，4Pg／g(移植肠管重量)]，保留30min，然后用生理盐水冲洗。第1组和第Ⅱ组仅用生理盐水注入。在三组大鼠的腹部均行造瘘手术。观察移植肠管的存活时间和组织学改变如淋巴细胞浸润和移植肠管组织结构的毁坏。在术后d6 用一体荧光显微镜观测移植肠管的淋巴细胞浸润，如CD4+和CD8+T细胞在肠系膜淋巴结和Peyefs 淋巴结中的表达。 1．3观测指标与方法 1．3．1 移植肠管的存活时间记录移植肠管的存活时间，有无局部缺血及肠黏膜的坏死。通过观测造瘘口的情况来确定移植肠管的存活时间。 1．3．2组织学改变切除空肠的末段约5em的移植肠管作为标本，标本固定在5％缓冲福尔马林液中并用HE染色(苏木素)，评价其形态学改变，如绒毛上皮厚度(EVT)，绒毛高度(VH)，和黏膜下层厚度(ST)。 1．3．3抗一MAdCAM一1抗体、F(ab’)2的提取大鼠基因的第一个免疫球蛋白结构域的氨基酸序列是用来结合a487整合素的。这个结构域的DTNL— GNVQTLPGSR位点是产生抗一肽抗体的肽，用其免疫兔而产生抗体，抗体通过使用硫磺酸沉淀法和色谱仪分析而从血清中提取出来，其形式为IgG。得到抗一MAdCAM-1抗体的F(ab')2形式。 1．3．4抗一MAdCAM一1抗体、F(ab’)2的免疫标记移植肠管分别用已建立的兔抗大鼠抗体和一个已知抗体[羊抗鼠MAdCAM一1多克隆抗体，P一20 (SantacruzBiotechnology，California，USA)]在 4℃条件下抚育12h。然后，样本用PBS夜冲洗三次，用TRITC标记的猪抗兔Ig抗体(Dako， Gloptrup，Denmark)或HRP标记的抗羊Ig(Cap— pel，Westchester，PA，USA)在室温下抚育1h。 1．3．5CD4，CD8测定在小鼠的肠系膜淋巴结和肠管Peyer's淋巴结中获取的淋巴细胞(1×106)用小鼠抗大鼠CD4或CD8免疫球蛋白在4℃温度下抚育达1h。用PBS液冲洗，用流式细胞测定器进行荧光激活细胞分类。 1．3．6 MAdCAM一1和整合素a487的表达对于 MAdCAM一1和整合素a4p7标记，用已知的羊抗鼠 MAdCAM一1抗体对移植肠管抚育12h。然后，样品用PBS液冲洗三次，并用FITC标记的兔抗羊 IgG在室温下抚育1h。 1．4统计学分析统计数据用均数± 标准差表示，并对不同组别用Mann—Whitney检测进行统计学分析，当Pd0．05，为有统计学意义。 2 结果 2．1组织学变化术后d6的移植肠管可见，第1 组几乎具有正常的黏膜结构(图1A)，第Ⅱ组有显著的淋巴细胞浸润和绒毛结构的破坏(图lB)。第Ⅲ 组未看到急性排斥反应，黏膜破坏也不显著(图 1C)。在移植肠管的破坏程度方面，第Ⅲ组即使用抗一 MAdCAM一1抗体组的组织结构与第1组相似。其存活时间较长，通过组织学观测和评分发现，其毁坏程度也较轻(表1)。说明使用抗一MAdCAM-1抗体可以有效阻止移植段肠管的黏膜破坏。表1 移植肠管的组织学变化(n=5，=±s) *与第Ⅱ组比较：P

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