T-PSA

广州金域医学检验中心 KM-SOP0300·331 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 《文件已阅声明表》 《Procedure circulation form》 文件名称: 总前列腺特异性抗原检测作业指导书 表号: KM-MP03•02•02 已阅声明：本人承诺已了解此文件中的相关内容,今后的工作中将严格按照此文件执行,不随意对外传阅此文件,如有因与文件不相符的操作,责任由本人承担。 （I have understood the relevant content of the document.I will keep the document secret and be responsible to properly perform procedure） 阅读人签名表 姓名（NAME） 职务（POSITION） 签名（SIGNATURE） 签名日期（DATE） 《文件修改记录页》 《Procedure amendment form》 表号:KM-MP03.02.03 序号 NO. 页码(Page) 内容更改说明(Description of Modified contents) 审批人 (Approved by) 批准生效日期 (Approved date) 1 换版 《文件信息表》 《Procedure information form》 表号:KM-MP03•02•04 文件名称Title of Doc (Doc. Code) 总前列腺特异性抗原检测作业指导书(KM-SOP0300•331) 版本号(Edition No.) (Edition 3.0) 生效日期(Operative date) 2008-03-13 文控部门 (Doc. Control Dept.) 实验室文控室 回顾日期/签名 (Review date /signature ) 回顾日期(Review date) 回顾人员签名( Signature ) 替代文件(Replaces) 总前列腺特异性抗原检测作业指导书（Edition 2.0） 存放地点(Location)/持有人（Holder） No. Location （Holder） No. Location （Holder） 1 诊断部文控室（陈彬） 2 发光室（段学成） 作者签名/日期(Author signature/date) 李卫鹏 审批人签名/日期(Authorized by : Signature/Date) 陈建波 接收人签名/日期 （Receiptor/Date） 副本数(copy No.) 本文件是第 个文件拷贝 / 共发放 2 个文件拷贝。 总前列腺特异性抗原检测作业指导书 （Standard operation procedure for analysis of T-PSA） 1.原理（Test principle）: 微粒子酶免分析法（MEIA）：标本与微粒子于一定比例混合，标本中被检物质与微粒子上包被的抗体进行一定时间的反应，反应液的一部分被移到玻璃纤维上，洗去未反应的被检物质与其他不要成分，将碱性磷酸酶的共轭体加入纤维杯与抗原-抗体复合物反应，反应的第二阶段终了后，再次冲洗，将未反应的第二抗体除去，加入基质液，基质液被碱性磷酸酶分解成MU，当该生成物受荧光照射后就产生荧光，测定荧光强度的变化率，从而决定被测物质的浓度。并用测初速度法代替终点法，提高了结果的准确性。 2. 样本收集和储存（Specimen Collection and Storage）: 样本收集（specimen collection）：类型（type）：血清（serum）；用量（volume）200μL，仪器加样量（sample volume ）100μL。 拒收标本（specimen rejection）：EDTA抗凝血、严重脂血标本、接受过鼠单克隆抗体者、严重溶血标本拒收 标本储存条件(sample storage)：室温（room temperature）保存8小时； 2-8℃7天； -20℃3个月；十五天后处理标本。 其他（others）：为避免纤维蛋白对结果的影响，必须确定离心处理前样本已经完全充分凝集。对于正在接受抗凝剂治疗的病人样本，需要延长凝集时间。 3.试剂(Reagent)： 3.1美国ABBOTT AXSYM SYSTEM原装试剂。 3.1.1试剂内组份（components）： 试剂包，100个检测 AxSYM总PSA试剂包（3C19-20） 1瓶（8.3 mL）在含有蔗糖的TRIS缓冲掖中包被有微粒的抗PSA（鼠，单克隆）。 最低浓度：0.085％固体（重量/体积）。防腐剂：叠氮化钠。（试剂瓶1） 1瓶（9.4 mL）检验稀释液。含有蛋白质（牛）稳定剂的TRIS缓冲液。防腐剂：叠氮化钠和抗微生物剂。（试剂瓶2） 1瓶（13.5 mL）抗PSA（鼠，单克隆）：在含有蛋白质（牛）稳定剂的TRIS缓冲掖中的碱性磷酸酶共轭体）。最低浓度：0.1 μg/mL。防腐剂：抗微生物剂。（试剂瓶3） 3C19-66号试剂包包括一个AxSYM总PSA试剂包（100个检测），反应容器（每个试剂包100个）和纤维杯（每个试剂包100个）。3C19-20号试剂包包括国际运输情况下的项目。 3.1.2未随试剂盒提供的组分 9C11-10 总PSA质控品 9C11-01 总PSA 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 品 3C19-30 AxSYM总PSA主标准品 9C46-50 游离或总PSA样本稀释液 8A47-04 溶液1（MUP） 8A81-04 溶液3（纤维杯洗液） 8A46 溶液4（Line稀释液） 9A35-05 AxSYM探针清洗液 8A76-01 样品杯 移液器／移液器吸头（可选）用于转移命令屏上指定体积的液体。 其它必需：蒸馏水或去离子水、实验试管。 3.2 试剂准备：将试剂从冰箱中取出并平衡至室温；不同批号的试剂不能混用；新试剂与前一批号试剂不同，则需做样本结果的比对，并记录，差异在允许范围内方可使用。Put reagent from refregeratory to room temperature for proper time；New reagent lots must be tested in parallel with old lots before or concurrently with being placed in service to ensure that the calibration of the new lot of reagent has maintain consistent results for patient specimens。Record the results。 4.仪器（Instrument）美国 ABBOTT AXSYM SYSTEM： 仪器准备（prepare apparatus）：使用前将仪器的液体与固体垃圾清空；加入足够的蒸馏水、1液、2液、3液、纤维杯、RV杯。然后运行仪器操作软件。而后排水及底物，防止内有残留气柱。将仪器的试剂盘中加入所需的试剂。 5.安全防范（Safety Precautions）： 操作时必须穿戴手套和工作服；工作后的台面应消毒擦洗；用过的加样枪头等耗材应作为医用垃圾处理；为了避免形成气溶胶，所有样品尽可能不要在空气当中暴露太长时间；遇到样本洒出，被污染的区域应立即用次氯酸钠溶液清洗，擦拭用的物品应丢弃在标有生物污染的垃圾筒中。 6.校准（Calibration）： 6.1校准品：美国AXSYM ABBOTT原装校准品。要求在有效期内使用，过期的校准液应停止使用，保存于2-8℃可稳定到有效期。Stop using overdue calibration material 。 Use it within expiration date，storage in 2-8 ℃。 复溶：用复溶专用加样枪准确吸取4mL去离子水于瓶中，溶解静置30分钟，混匀并用有盖小子弹头分装600μL/个，标明配制日期，校准品批号，配制人以及有效日期，Label confecting date ，calibration lot 。person who confected，expiration date 。 于－20℃冻存备用。 复溶后校准品成分的稳定性：保存于15~25℃，可稳定8小时 保存于2~8℃，可稳定2天 保存于（-15）~（-25）℃，可稳定1个月（不可反复冻融）。 6.2当下列任何一种情况出现时，请重新校准：（If one of the two happened，recalibration） ⑴试剂批号改变（reasgent lot changes） ⑵根据质控需要进行校准（Recalibration based on quality control problem） 6.3步骤：将试剂盒放入试剂转盘后，在ORDER LIST内申请校准，采用专用条码样本杯座，将校标液(每杯7滴)按指定位依次放入样本架，开始校准。（非新试剂盒不做此步）。 每个样品杯至少加入样品184ul。将样本杯按仪器指定位置放好后，按“RUN”键开始。 校准结果判断标准: 雅培系统对检验校准的结果是否符合有效参数的规定值进行验证。若校准成功，仪器Message一栏会显示The calibration is passed的信息。如果校准不符合规定值，仪器会 报告 软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载 错误信息。有关对错误代码的纠正措施可见雅培系统操作手册第10单元。 校准周期（frequency of calibration）：两周（two weeks）。 7.操作过程：(Procedural Steps) 7.1 将从标本组取回的带有编号的血清标本离心取血清.将待测血清加入相应的样本管。 7.2取出空样本架，将含有血清的样本管加入样品架中，并将实验号与对应的样品架位置记录下来，将样品架推入样品槽中。因需要一定量样本做底，每个样品管加入样品200ul。（样本用量184ul）交待清楚实验号与样本架号的对应关系，便于联机。 7.3进入ORDER LIST，在Patient(F6)中指定样本位置，输入项目，输入完毕以后按F1退出，核对实验项目准确无误后点击RUN运行。结果出来后，在菜单RESULT中按日期打出结果，作为原始记录加以保留，并且操作者要签上名字及操作日期。 数据联机入系统： 计算机：设备管理→接口管理→点击雅培化学发光仪→点击“接收”→出现接收窗口→仪器→Result→点击select all→点击Print→点击Release→回到计算机的接收窗口。 数据审核：联机是否正确，实验号与样本架号的对应，原始导出结果与系统结果是否对应等。 8.质量控制(Quality control)： 使用雅培TMC质控物做室内质控。当室内质控失控时，重取质控品重新检测一次；若室内质控仍不能满足要求，则检查校准是否过期，重新校准，再检测室内质控；仍不能满足要求时，则做期间核查，检查仪器是否正常。室内质控操作过程：从冰箱冷冻格拿出的分装质控品必须放置室温半小时以上，每次用量至少184ul，上机操作同日常标本。T-PSA最大允许误差ALE为25%，室内质控CV为6.13%（低）、6.38%（高），偏移为6.26%,过程稳定性<2%.根据公式:△SEc=（ALE-Bias）/CV-1.65利用计算软件可得, 低值选择的质控规则: 13s/22s/R4s/41s N=2; 高值选择的质控规则13s/22s/R4s/41s N=2,当质控失控时，应按照《室内质量控制程序》处理 9.计算(Calculations)： AxSYM总PSA检验利用一种四参数逻辑数据减少法（4PLC）生成标准校准曲线。主校准利用线性变换（LT）技术调整主曲线。详细信息见AsSYM系统操作手册附录F。 10.参考范围（Expect Values）： 0-4.0 ng/mL 11.结果解释（Interpretation of Results）： 11.1前列腺癌患者PSA升高，约有2%正常人和41%~47%前列腺增生患者，PSA也可增高。 11.2在作PSA检测时，若以〉4.0ng/mL 作为前列腺癌诊断标准，其敏感性为71%，特异性仅为49%。 11.3检测时若t-psa,f-psa测定值均升高，而f-psa/t-psa比值降低，则高度提示患有前列腺癌的可能。故测定f-psa与t-psa的比值将能有效的帮助疾病的诊断 12.方法的局限性（Method Limitations）： 12.1已接受鼠单克隆抗体制剂进行诊断或治疗的患者样本中可能含有人抗鼠抗体（HAMA）。当使用含有鼠单克隆抗体的检验试剂盒检测这样的样本时，可能显示错误升高或降低的值。这些样本不能使用AxSYM总PSA检验。 12.2 血清中的嗜异性抗体对免疫检验系统具有潜在的干扰性。极少数情况下，由于患者血清中存在嗜异性抗体或非特殊蛋白质的结合，PSA水平可能会升高。如果PSA水平与临床证据不一致，建议进行其它PSA检测以确认结果。 12.3 如果用不同生产商提供的检验测定给定样本的PSA浓度，结果可能会由于检验方法，校准以及试剂特异性的不同而不同。多数情况下，患者进行直肠指诊后立即取样，PSA水平不会显示明显临床增高。但是，前列腺按摩，超声波检查和针刺活组织检查可能会引起PSA水平明显临床增高。PSA水平还会在射精后增高。血清中的活性游离PSA在采血样时会继续与血清蛋白酶抑制物，尤其是α-2-巨球蛋白结合，因此造成活性游离PSA水平快速降低。激素治疗可能影响PSA表现，因此包括激素治疗在内的任何治疗后的低PSA水平都不能充分的反映残留或复发性疾病的存在。不能把血清PSA浓度看作是否患前列腺癌的绝对证据。在良性前列腺增生或其它非恶性病以及前列腺癌患者血清中都可能会观测到PSA水平升高。此外，PSA浓度低也不是绝对表示不存在癌症。应将PSA值与临床评估的有效信息以及DRE等其它诊断方法相结合。某些早期前列腺癌不能通过测定PSA检出；DRE也是如此。诊断癌症需要进行前列腺活组织检查。 12.4 精密度（Precision）: Mean SD CV(%) 批间(L) 3.80 0.22 5.79% 批间(H） 8.19 0.52 6.35% 批内 6.62 0.21 3.11% 12.5 灵敏度（Sensitivity）： 0.04ng/mL（分析）、0.06 ng/mL（功能） 12.6 特异性（Specificity）：不可用于检测其它体液标本；接受过鼠单克隆抗体者，标本不可测定；严重溶血标本不可测定。 12.7分析测试范围（AMR）：0.04~50 ng/mL 12.8稀释：当仪器显示样本结果超出（AMR）时，可用去离子水稀释100倍检测。 12.9 病人结果报告范围（CRR）：0.04-5000.0 ng/mL 12.10 干扰物质（Interfering Substances）： 胆红素影响（bilirubin）：样本中胆红素的浓度直至200mg/L，在实验允许的精密度范围内对结果没有影响。 溶血影响（hemolysis）：样本中压积红细胞的浓度直至30ul/mL，在检测允许的精密度范围内对结果没有影响。 脂血影响样本中甘油三脂的浓度直至5000mg/dL，在检测允许的精密度范围内对结果没有影响。 12.11注意事项（Notices）：血清，其它体液标本拒收；接受过鼠单克隆抗体者，标本拒收；严重溶血标本拒收。 13.临床意义（Clinical Significance） 1) 绝大多数前列腺癌患者血清PSA水平增高。  2) 前列腺良性增生、前列腺炎患者PSA也会升高，但程度不及前列腺癌。 3) 单独使用T-PSA诊断前列腺癌时并不能排除前列腺肥大对前列腺癌诊断的影响，特别是当T-PSA在4.0~20.0ug/L时，应使用血清中T-PSA/F-PSA比值测定显得更有价值。文献报道T-PSA/F-PSA比值小于10%提示前列腺癌，T-PSA/F-PSA比值大于25%提示可能为前列腺增生，其特异性达90%，正确性大于80%。 14.参考文献（References）： 1) 临床免疫学和免疫检验. 2) 美国AXSYM Total-PSA试剂说明书 3) 中华医学检验全书 4) 美国AXSYM操作说明书 5) 实验诊断学 /王鸿利主编-北京：人民卫生出版社，2001：244: STANDARD OPERATION PROCEDURE page 3/10 总前列腺抗原检测作业指导书（2008-03-13）