【word】 多发性乳腺纤维腺瘤患者免疫组化相关指标的研究

【word】 多发性乳腺纤维腺瘤患者免疫组化相关指标的研究 多发性乳腺纤维腺瘤患者免疫组化相关指 标的研究 墼堂箜甄螽|簦2011年第24卷第1o期Vo1.24,No.10.May20110Meal 科袋praer_]1117 ;董 多发性乳腺纤维腺瘤患者免疫 组化相关指标的研究 张秀侠楼丽华.张庆 1浙江省杭州市余杭区第一人民医院普外二科311000;2浙江省中医院乳腺病诊疗中心 摘要目的:探讨多发性乳腺纤维腺瘤的病因和发病机理,研究免疫组化法检测的相关指标在本病发生过程中的意 义.方法:用免疫组化法检测9O例多发性乳腺纤维腺瘤患者和3O例乳腺增生病患者乳腺组织中雌激素受体(estro— genreceptor,ER),孕激素受体(progesteronereceptor,PR),细胞增殖抗原标记物(Ki.67),抑癌基因P53及人类癌基 因CerbB-2的 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 达.结果:(1)多发性乳腺纤维腺瘤患者PR的阳性表达率及高强度阳性表达率均高于对照组(前者 P<O.01,后者P<O.05);Ki一67的阳性表达率明显高于对照组 (P<0.05);(2)多发性乳腺纤维腺瘤患者ER,PR之间 有显着相关性(P<0.01);(3)多发性乳腺纤维腺瘤患者ER的阳性表 达率与对照组相比无显着性差异(P>O.05); (4)多发性乳腺纤维腺瘤患者ER,PR与Ki-67的表达之间无相关性 (P>0.05);(5)P53和CerbB-2在本病中均元表 达.结论:(1)局部乳腺组织中PR的阳性表达率及阳性表达强度升高 也是乳腺纤维腺瘤发病的主要因素;(2)ER,PR 间存在的相关性在本病的发生中起了主要作用;(3)Kb67的阳性表达 率升高,说明细胞增殖能力较强,这可能也是本 病发生的直接原因. 关键词多发性纤维腺瘤乳腺肿瘤免疫组织化学 中图分类号:R737.9文献标识码:A文章编号:1.0l一 7585(20l1)10—1117—04 ‘I1leStudyOntheRelativeImmunohistochemicalIndexinthePatientwithMultipleVibroadenomaofBreast ZHANGXiuxia*,LOULihua,ZHANGQirig.*DepartmentofGermralSurgery,theYuhangDistrictFirstPeople’S HospitalofHangzhouCity,ZhejiangProvince311000 ABSTRACTObjective:Toexaminethepathogenesisofmultiplefibroadenomaofbreastanddiscussthesignificanceof immunohIl,1,. hemicalindicatrixintheprocessofthediseas~Methods:Theexpressionofesl rogenreceptor(ER),pro— gesteronei’tceptor(PR),theeellproliferatingantigenKi一 67,anti-oncogeneP53andhumanoneogeneCerbB-2weretest- edbytheimmunohistochemicalassayin90caseswithmultiplefibroadenomaofbreastand30caseswithmammaryhy— perplasia.Results:(1)ThepositiverateandthepowerfulpositiverateofPRexpressionwerebothhigherthanthatin healthycontrolgroupsignificantly(respectivelyP<0.01,P<0.05).(2)Therewassignificantdependabilitybetween ERandPRintheeaseswithmultiplefibroadenomaofbreast(P<0.01).(3)Therewasnosignificantdependabilityfor thepositiverateofERexpressionbetweenthecaseswithmultiplefibroadenomaofbreastandthecontrolgroup(P~ 0.05).(4)Therewasnosignificantdependab],itybetweentheexpressionofERandPRandtheexpressionofKi一67(P >O.05).(5)TherewasnoexpressionofP53andCerbB-2intheeaseswithmultiplefibroadenomaofbreast.CondU- sion:(1)TheincreaseofthepositiverateandthepowerfulpositiverateofPRexpressioninmammaryglandpartlyis themajorfactorforthemultiplefibroadenomaofbreast.(2)ThedependabilitybetweenERandPRmakeanimportant roleinthedisease.(3)TheincreaseofthepositiverateofKi一 67expressionprovethatthecells’reproductiveactivityis strong.andperhapsthisiStheimmediatecausewhichinducethedisease. KEYW0I 江,sMultiplefibroadenoma,Breasttumor,Immunohistochemieal 乳腺纤维腺瘤(fibroadenomaofbreast)又称乳 腺纤维瘤,是由乳腺纤维组织和腺管两种成分增生 共同构成的乳房良性肿瘤,其发病率在乳腺良性肿 瘤中居首位.乳腺纤维腺瘤可发生于青春期后任何 年龄的女性,但以20~25岁的年轻女性多见,绝经 后妇女较少见.表现为扁圆或卵圆形的无痛性肿 块,质实韧,活动度较好,肿块不随月经周期而变化. 一 般为单发肿物,约2O,25为多发. 多发性乳腺纤维腺瘤是指同时或先后发生于乳 房同侧或双侧的2个以上的纤维腺瘤.多发性乳腺 纤维腺瘤患者在多次手术后,不但乳房内部结构(如 乳导管,腺体等)受到破坏,乳房的外部形态也会受 到影响,进而给患者的身心造成损害.并且,术后复 发的病例恶变率相对升高;妊娠期由于体内雌,孕性 1118JMedlheor&ProcVo1.24,No.10,May2Oll2Ol1年第24卷第lO 期馨墼基登堡鲎曼鐾壁二 激素的大量增加,也可刺激腺瘤迅速增长,甚至可能 诱发肉瘤变.所以,了解多发性乳腺纤维腺瘤的发 病原因及发病机理,进而制定正确的预防措施和治 疗方法就显得相当重要. 现代医学认为乳腺纤维腺瘤的发病原因尚不明 确,一般认为其发病主要与患者体内性激素水平及 乳腺组织局部雌,孕激素受体的量或质的异常有关. 目前,国内外对于乳腺纤维腺瘤多发性的原因及机 制的研究尚鲜见于文献报道,本文主要从免疫组化 法检测所得的相关激素受体及基因方面探讨多发性 乳腺纤维腺瘤的发病机制,从而为进,步研究和治 疗本病提供理论依据和实验基础. 1材料与方法 1.1一般资料收集乳腺病住院患者120例.根 据患者术后病理诊断结果,将收集的病例分为多发 性乳腺纤维腺瘤组9O例(其中,同时多发者63例, 异时多发者27例;发于单侧乳房者25例,发于双侧 乳房者65例),平均年龄(30.584-_8.07)岁;乳腺增 生组3O例,平均年龄(40.07?7.00)岁.入选 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 如下:(1)非妊娠期,非哺乳期,无肝病及内分泌失调 疾病,月经基本正常,近期内未服用过避孕药或其他 激素类药物.(2)术后经病理诊断为(多发性)乳腺 纤维腺瘤,乳腺增生病.(3>有完整的临床资料. 1.2免疫组织化学法检测经病理诊断为(多发 性)乳腺纤维腺瘤,乳腺增生病患者的手术标本,分 别进行免疫组化指标ER,PR,Ki-67,P53,CerbB-2 的检测.(1)实验试剂:1:10多聚赖氨酸,ER单克 隆抗体(鼠抗人),PR单克隆抗体(鼠抗人),Ki一67 单克隆抗体(鼠抗人),P53单克隆抗体(鼠抗人), CerbB-2单克隆抗体(鼠抗人),DAB试剂盒(gJ自 北京中山生物技术有限公司).(2)实验方法及步 骤:?玻片处理:彻底清洗,烤干后1:10多聚赖氨 酸涂抹玻片,风干.?标本处理:将手术切除的标本 浸于10甲醛溶液中,取材后,石蜡包埋,蜡块标本 做4m的连续切片数张,捞片.?设立实验对照: 阳性对照:以确诊的阳性标本作为阳性对照.阴性 对照:用PBS替代一抗,其余染色同.?免疫组化: (两步法)检测.?结果判定:用Olympus显微镜观 察,高倍镜下计数4个随机视野,每个视野计数100 个细胞,计算染色阳性的细胞占所计数细胞的百分 比,接各视野计数的平均值结合染色强度作最后判 定.ER,PR,Ki一67,P53阳性染色均位于胞核,或胞 浆,胞核同时染色,以胞核染色为主,仅胞浆染色计 为阴性,染色强度分为3级:1浅棕色;3深褐色;2 介于1和3之间.综合染色强度和表达率,ER, PR,Ki一67,P53的判定标准为:(一):完全阴性; (4-):阳性细胞比例<1O%;(+):阳性细胞比例 1O,25;(++):阳性细胞比例26%,50; (+++):阳性细胞比例51%,1009,6.二分法以 1O%为阈值确定阴性和阳性.CerbB~2阳性细胞为 膜着色,不着色为阴性(一);着色阳性细胞数>10 为阳性,其中着色弱且不连续为弱阳性(+),着色中 等部分不连续为阳性(++),着色强且连续为强阳 性(+++).(3)实验设备:Leica全自动脱水机, BM_IV生物组织冷冻包埋机,LeicaRM2135型全 自动切片机,PHY-llI病理组织漂烘处理仪,Olym— pusU-B130多头光学显微镜及高压锅,恒温烤箱, 10ml吸管,高精度加液器及吸头,染色缸,保湿孵育 盒,擦拭纸,盖玻片,可调计时器等. 1.3统计学处理采用SPSS11.5统计软件进行 统计学 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 .数据资料用?s(均数土标准差)表 示,两组间数据比较用t检验,计量资料用.检验. 检验以P<O.05或P<O.01为差异显着的标准. 2免疫组织化学法检测结果 2.1两组间ER,PR,Ki一67阳性表达率比较两组 患者免疫组化检测,P53,CerbB-2均为阴性,无1例 表达,统计学比较元显着差异.ER,PR,Ki-67结果 的比较和统计见表1及图l. 表l多发性乳腺纤维腺瘤组与乳腺增生组 ER,PR,Ki-67的阳性表达率比较 注:**表示与增生组比较P<O.Ol,*表示与增生组比较P< o.05. 炳患者FR,Pf{,Ki一67阳性牢比较率表 10 8 6 d 2 a多发性乳腺 纤维腺瘤组 _增q|组 图1多发性乳腺纤维腺瘤与乳腺增生患者 ER,PE,Ki-67阳性率对比 由表1,图l可见:多发性乳腺纤维腺瘤患者与 增生组相比,雌,孕激素受体及Ki一67的阳性表达率 均高于增生组.PR有非常显着差异(P<0.01), Ki-67有显着差异(P<0.O5),ER无统计学差异. 2.2两组间ER,PR,Ki一67的阳性表达强度多发 性乳腺纤维腺瘤患者ER,Ki一67的阳性强度主要表 现在(+),与增生组一致;而PR的阳性强度主要表 么堕璺鲎甄霆蔓2011年第24卷第10期Vo1.24,No.10,May2OllJMec}Theor&Pracn1119 现在(++),与增生组相比有显着差异(P<0.05).见表2,图2,图3. 表2ER,PR,Ki-67的阳性表达强度比较 aER IPR 口Ki一67 图2多发性纤维腺瘤患者ER,PR,Ki一67阳性表达图 . .. _- ,?j 0|_ ?_童| iJl簟 I...??l1 旮ER ?PR 口Ki一67 图3乳腺增生病患者ER,PR,Ki一67阳性表达图 2.3两组ER,PR,Ki一67的高阳性强度(++,+ +十)表达率比较多发性乳腺纤维腺瘤患者ER, PR,Ki一67高强度阳性表达率与增生组相比,均高于 增生组.其中PR的阳性高表达率比较有显着差异 (Pd0.05),两组间ER及Ki一67的比较均无统计学 差异.见表3,图4. 表3ER,PR,Ki-67的高阳性强度 (++,+++)表达率比较 注:**表示与增生组比较P<O.01*表示与增生组比较P< 0.05. 两终l患告FR,}】l{K]67f询性强度表达比较衷(一,?) 瞄多发性乳腺 纤维腺瘤蜊 ?增生组 图4多发性乳腺纤维腺瘤与乳腺增生患者 ER,PR,Ki-67阳性高表达率对比 2.4ER,PR,Ki一67相关性多发性乳腺纤维腺瘤 患者ER,PR的表达有非常显着相关性(P<O.01). 多发性乳腺纤维腺瘤患者ER,PR的表达与Ki一67 的表达之问无相关性(尸>0.05)见表4,5. 3分析与讨论 表4多发性乳腺纤维腺瘤患者ER,PR的相关性(=90) ER+PR+2642 ER4-PR一02 3.6>O.05 ER—PR十51l ER—PR一04 3.1现代医学对乳腺纤维腺瘤发病机理的认识 现代医学认为乳腺纤维腺瘤的发病原因尚不明确, 大多数学者认为乳腺纤维腺瘤的发病原因主要与 雌,孕激素分泌平衡失调,雌激素绝对或相对升高, 而孕激素绝对或相对降低,致使孕激素不能制约雌 激素对乳腺组织的过度刺激,以及乳腺局部组织对 激素作用过度敏感有关.但有关乳腺纤维腺瘤存在 多发性的原因尚未有见于文献报道. 3.2多发性乳腺纤维腺瘤患者免疫组织化学相关 指标分析本病与乳腺增生病同属于乳腺组织的增 生类疾病,乳腺增生病又称乳腺结构不良,是乳腺主 质和问质不同程度地增生与复旧不全所致的乳腺结 构在数量和形态上的异常.本病由乳腺纤维组织和 腺管的过度增生所致,乳腺增生病是由乳腺主质和 问质的弥漫性增生引起.故本研究在进行免疫组化 检测过程中,把乳腺增生组与多发性乳腺纤维腺瘤 组进行对照观察,旨在发现多发性乳腺纤维腺瘤患 者乳腺局部组织中免疫组化相关指标的特殊表达. 免疫组织化学又称免疫细胞化学,是指带显色 剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体 反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原进行定性, 定位,定量测定的一项新技术.它把免疫反应的特 异性,组织化学的可见性巧妙地结合起来,借助显微 镜的显像和放大作用,在细胞,亚细胞水平检测各种 1120广]JM蟹dTheor8cpraeVoi.24,No.10,May201IZ011年第24卷第 10期蠢妻喜擎遇亟璺壁墼 抗原物质(如蛋白质,多肽,酶,激素,病原体以及受 体等). 性激素作用是通过与其受体结合而产生的,雌, 孕激素只有通过与其靶细胞内的ER,PR相结合,才 能发挥其对乳腺组织的生物学效应,同时,乳腺局部 实质成分性激素受体质和量的异常,可导致这些部位 对激素的反应异常,局部刺激过度,则可引起纤维腺 瘤的发生.所以,检测ER,PR的阳性表达率及表达 强度对探讨本病的发病原因有着十分重要的意义. 本研究显示,多发性乳腺纤维腺瘤患者ER阳 性表达率及其高强度阳性表达率与增生组相比均无 明显统计学意义(P>0.05);PR阳性表达率 93.33,明显高于增生组的66.67,有非常显着差 异(P<0.01);PR的高强度阳性表达率为62.22, 也显着高于增生组的26.67,有非常显着差异(P <O.01),多发性乳腺纤维腺瘤患者的阳性强度表现 在(++),说明PR在多发性乳腺纤维腺瘤患者乳 腺组织中的表达有着重要的意义.同时,研究显示: 多发性乳腺纤维腺瘤患者ER,PR同时阳性表达的 有68例,所占百分比为75.56,统计结果还表明, ER和PR之间有直线相关性.有研究认为,PR是 由雌激素诱导合成的,PR的表达说明细胞内ER的 作用机制是完整的,其ER为功能性ER,PR的存在 依赖于ER[引.基于此,本研究证实:多发性乳腺纤 维腺瘤患者的ER绝大多数为功能性ER,与临床研 究结果[3]一致.Kb67是在增殖细胞中表达的一种 核抗原,存在于细胞周期中除GO期以外的所有阶 段,与细胞的合成代谢有关,也是目前较为肯定的核 增殖标志物_4].故观察该指标在乳腺纤维腺瘤中的 表达对于探讨本病的发病机制有着重要的意义.本 研究发现,多发性乳腺纤维腺瘤患者Ki一67阳性表 达的有31例,占研究总人数的34.44,与增生组相 比有显着差异(P<O.05),由此可见,多发性乳腺纤 维腺瘤患者细胞增殖能力较强,这也正是本病多发 性的一个直接而主要的原因.本实验统计显示Ki一 67阳性表达强度与增生组比较无统计学差异(P> 0.05).有研究表明乳癌患者KF67的阳性表达与 ER,PR阳性表达之间无显着相关性[4].在本研究 中,Ki-67的表达与ER,PR之间也没有相关性.以 上结果 证明 住所证明下载场所使用证明下载诊断证明下载住所证明下载爱问住所证明下载爱问 ,患者的细胞增殖状态不受乳腺局部组 织性激素受体量的影响,与受体表达无关.P53位 于17号染色体短臂上,野生型P53基因抑制细胞转 化,并能抑制癌基因的活动,而突变型P53基因可引 起细胞的转化和癌变,使细胞无限增生L5].野生型 P53的蛋白量很低,半衰期短,只有20~30min,而突 变型P53的半衰期可达1.4,8h,在细胞内存积稳 定,故用免疫组化方法在组织内实际检测到的P53 均为突变型P53【6].CerbB-2是一种细胞来源的癌 基因,正常情况下处于非激活状态(又称原癌基因), 参与细胞生长,分化的调节,当受到体内外某些因素 作用而被激活时,具有肿瘤转化活性].由于本病 多发性的存在,导致其恶变率相对升高,故对多发性 乳腺纤维腺瘤患者病变组织中P53及CerbB-2的检 测也有重要意义.本研究也对P53和CerbB-2进行 了检测与观察,旨在探讨其在多发性乳腺纤维腺瘤 患者中有无特殊表达和意义,结果显示均为阴性,无 1例表达,说明多发性乳腺纤维腺瘤患者细胞增殖能 力虽然较强,但细胞分化无异常,细胞增生有度. 4结论 本文应用现代研究方法从免疫组化方面研究了 90例多发性乳腺纤维腺瘤患者病变组织ER,PR, K67,P53及CerbI3-2的表达情况.结果显示,多发 性乳腺纤维腺瘤患者ER,PR的表达之间存在直线 相关性,且两者均为阳性的比例也高于增生组,说明 本病的发生与雌,孕激素分别与其受体相结合而共 同发挥其生物学效应有关;多发性乳腺纤维腺瘤患 者局部乳腺组织Ki一67阳性表达率明显高于增生 组,说明本病患者细胞增殖能力较强,这也是纤维腺 瘤多发的一个直接而主要的原因.多发性乳腺纤维 腺瘤患者ER,PR与Ki一67之间无相关性,说明本病 患者细胞增殖活性与性激素受体的表达无关.P53, CerbB-2在多发性乳腺纤维腺瘤患者病变组织中的 表现均为阴性,说明多发性乳腺纤维腺瘤患者细胞 增殖能力虽然较高,但细胞分化尚无异常. 参考文献 [1]LykkesfeldtAE,BraindP.Indirectmechanismofoestradiol stimulationofcellproliferationofhumanbreastcancercellline U].BrJCancer,1986,53(1):29,35. 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