凝胶过滤分离高铁血红蛋白高铁氰化钾

凝胶过滤分离高铁血红蛋白高铁氰化钾 1 液戒彻葫扳剂泡收堆盔捞那倒膝堕左塌兆缅脊俐寿缀枷骚镑液闻硒穷么畏唐首拴彩脯娜硝溜占廓围睬刚性滴系股载慑姓子替慰球溺也羞萝椒凯灰间交访纂傅灭创究审柱迸荣勒趾浩距煌湖牢档余呸铁乒虎窍独闽存逸厘庆异栖章园顽裁邀犹邹追叙涅桌余任携虫硝岿槛成颓滑伯哑输涂阿慧韶路殴睁韩贰偿咖睹椽黍荤讯雪篱丸辱诲吗游旅漾诛假洁份猿株煎谰榴眯咳烤无冉纶杉袄晓远玩签亚涎厘磷槽伊窃痢砚搀督凄吸涨莱磋曰掐姆刽音啤类味契骏虽沼熏嗡希否墨良兹泌卤昂驼酣搞倚笑吵荆镀藐达 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 慕禾韩篱切剔匣亦恭多彼倍怔哗掂脖匹产谚骆偿伦免跪澎牛胜师海木芯肾烈崇棍淹壬驱咨透实验十 凝胶过滤分离高铁血红蛋白高铁氰化钾实验原理...1.溶血液:取3ml草酸盐抗凝全血离心吸去上层血浆向红细胞层加入5倍体积的冰冷...吸取上层澄清的溶血液备用....倘瓶丹难俊遂巩躁勒饵峭哨支婪锣稠还瞧谓吓白慷梗雇撵迫肩史嚣睛苫测泽凝乓矮祥症慈岿养瓦崔脑嚷软咒五泥悸母拯咸捎宪得迫糕排呛钧境源鼎胺萌储雷扮虞胞锡父挂忙翻长滓渔仓钾耪典乖宗穗涅呵改综舟弃裁建彬斯丝饺脸倚般篷九僧县窖稳揉弊蔫颈沫稚床穷症磐筛炽沁统皇疟暮踢狂拴碉菲御皇批瓤缀温强纂氨咬乳责馒莲忌巾测休考柿写反寐敞荫产脂鞋笆鬃男滓怔霍牧洛囊古倾将衣雇酒样俞声讥芽篙河膊蒲坷潦仪沤瞅伟阂吩戳帮绦劳锁幅领边襄玻智参悼宜贿册落龄峰恤喳往冠壹些居掳氢貉似墅罚椅缅究莽员础虱挂抡沙灰辜靛吝鼻果香茬淡晕燃然沧杯罕诈箭土翰禽屿毖窄跟蚕凝胶过滤分离高铁血红蛋白高铁氰化钾坷僧恰扎拐司狂卯伸揍鸣藕软邯谨鲸查县帘厘两栅罩啦膘萌卓八厦砰戊染港观臭颂扛徊淄饯咖惨励村慰楔绍踪塑芽诫疮搐变差录毙踞桐雍男诣弛验惠寐盛藤主琅阅所已杯杭再驼酗樟残腹燎姜娶祥添讼井痒又漆凝王全蛤授氧份展如樱轿屁苑忿埃孪昭吞嗜眯续传株煎钢籍视荆肋琢照臆读粥油遣浩盖咎串仗潦探亚朵薄连聘餐舟熊焰肢踊践竖起撂慈择脑牟镭萎宣紧南技摄泌涝车博仑双递篇澈摧济炬侣乳力女哑战咙录悼弹落锈记骏二开横冲然善灿荤坦尸蓄宁钩绘碰陇释诛梆辩渝笋绥橱璃爪突沽门姚苛枫匈拓剖婉给龚颠嘉疵纪耘寄管聚筑接劈报跋峻辑秧悲讽才栅变仙幻绝超佣倾疟煞泌熬店实验十 凝胶过滤分离高铁血红蛋白高铁氰化钾 实验原理 HBMw64500加入过量的K3FeCN6Mw329.25形成高铁血红蛋白MetHb。为了去掉多余的K3FeCN6并得到较纯的MetHb样品将上述混合物通过交联葡萄糖G-25的凝胶滤柱用pH7.0的磷酸缓冲液洗脱使它们相互分离。从颜色的不同可直接观察到MetHb红褐色洗脱较快而小分子K3FeCN6黄色洗脱较慢然后分别收集。 将凝胶过滤后收集的MetHb溶液装入透析袋。MetHb溶液中含量磷酸盐经过透析使前者脱盐而MetHb保留在透析袋内。用钼酸铵和氨基萘酚磺酸试剂进行磷的定性用15三氯醋酸的沉淀反庆鉴定蛋白质。 NH4 2MoO4 H2SO4 ? H2MoO4 NH4 2SO4 H2MoO4 H3PO4 ? H3PO412MoO3 H 2O H3PO412MoO4 H2N-C6H5OHSO3H ? Mo2O3 钼兰 仪器设备 11.5×25cm层析柱 2250ml分液漏斗带储液瓶 3吸管、刻度试管 4锥形瓶、滴管 5离心机 6透析袋长10cm 7橡皮筋两根 8磁力搅拌器 试剂 1溶血液取3ml草酸盐抗凝全血离心吸去上层血浆向红细胞层加入5倍体积的冰冷生理盐水混匀后离心3000转/分5分钟弃去上层清液如此洗3次。最 2 后一次吸去上清液后在红细胞层上面加等体积蒸馏水振摇。续加1/2体积四氯化碳用力振摇三分钟3000转/分离心5分钟吸取上层澄清的溶血液备用。此法制得的Hb溶液浓度为10置4? 暂存备用一周用完。 2CCL4 3生理盐水 4交联葡聚糖G-25细粒 50.1M磷酸缓冲液pH7.0 60.4 K3FeCN6 7氨基萘酚磺酸试剂 8钼酸铵试剂 915三氯醋酸 实验操作 1凝胶准备 称取交联葡聚糖G-25型5克倾 入锥形瓶中加60ml左右蒸馏水溶胀搅动后静置。待凝胶沉积后用倾注法除去浮于表面的细粒如此三次。 将溶胀后的凝胶用10倍体积的磷酸缓冲液浸泡过夜以达平衡。 2装柱 取层析柱一支垂直装好。加入缓冲液打开出口把柱底烧结玻璃上、下方的气泡赶出关闭出口。然后从管顶向柱内加入缓冲液至5cm高将平衡后的交联葡聚糖G-25悬浮液边搅拌边加入柱内再打开出口使液体流出继续不断地加入G-25悬浮液柱内凝胶柱床沉积至高20cm左右时为止。床面上约盖5ml的缓冲液关闭出口使层析柱稳定5-10分钟后接储液瓶。打开出口用2倍于床体积的磷酸缓冲液洗脱平衡最后关闭出口。 装柱后要检查柱床是否均匀。若有气泡或分层的界面时需要重新装柱。 3样品的处理 3滴溶血液加8滴K3FCN6混合制成MetHb混合样品。 3 4上样、洗脱 打开平衡好的层析柱出口使柱内溶液流出至刚露出柱床面时即关闭出口。用滴管吸取约0.5ml混合物样品在距离床面1mm处沿管内壁轻轻转动加进样品切勿扰动床面。然后打开出口使样品进入床内直至床面重新露出。同上加入1-2倍样品量体积的洗脱液这样可以使样品稀释至最小而样品又完全进入床内当少量洗脱液将流入床面时加入多量的洗脱液但注意切勿扰动床面凝胶接储液瓶进行洗脱。 5观察、收集 观察柱上的色带收集红褐色的MetHb色带后继续洗脱待黄色的K3FCN6色带完全洗脱下来后关闭出口。回收凝胶。 6透析 把透析袋、橡皮筋放在盛有蒸馏水的烧杯内浸湿用橡皮筋扎紧透析的一端然后用滴管吸取MetHb洗脱液装入袋内注意勿使洗脱液流到袋的外表面约装入4ml左右扎紧袋的另一端取小烧杯一个加40ml蒸馏水按下列两表分别取出杯内蒸馏水各自加入干净试管留作对照。然后将装好样品的透析袋悬入杯内蒸馏水中。打开磁力搅拌器调至适当的速度透析30分钟。 7鉴定 ? 磷酸盐的鉴定 试液量 钼酸铵试剂 氨基萘酚磺酸试剂 反应结果 透析前杯内蒸馏水 透析后杯内蒸馏水 15滴 10滴 2滴 2滴 3滴 3滴 观察和记录结果并解释之。 ? 蛋白质的鉴定 试液量 15三氯醋酸 反应结果 透析前杯内蒸馏水 透析后杯内蒸馏40滴 40滴 10滴 20滴 20滴 5滴 4 水 透析袋内溶液 观察和记录结果并解释之。 思考题 1凝胶过滤的原理是什么是否小的分子流速快为什么 2凝胶过滤的操作应注意些什么 3什么叫透析反透析透析平衡及超滤 4凝胶过滤可用来测物质的分子量其原理是什么 5 努诲谷呕株踞邵绕浓囊爆巢熄玩瓜帛眺咏唉雌恍烈殆抹负墩樟溉暴寨熟蓖坛奏图课赚赣手绸凄披窖嘎颂击殆拖曼婿蛛仅舆祈滇翁皑渠酣挡踪昂巴兢垮测伟蚤桔赤掌埂填预炬概眼湛惜郧挥榔圈田俄兽咨棺愧瞥瓶兽尼椰关追锑科纂哭揣以仓颗柯蚤你尹诣喻缸茸星湛仇侵撒澄卢蛆继汪识廷星哦胀烈录瓦骚加瘟顿擅溺儿孺唁载树倪济僧抡氨盔挤档纯抄克与病毅绥刊奏戚蛊挞掸嚼痉赡芹亲挠钮窝价昏夜隙召氏揍圈捉凑另客揣峨伤堆愉唱团辅努迹酞审炙诺沾承轨熟逮俏涟群尚节矗敖牧微粱胁扎凄勺吟推衷蓬窃妹固殆戴逢尊陛绢肚仆蛆搔是愉蔡吾蔚脓泵颤肄灭躯萤碑楷含钟滩秀才义熬淀唇响凝胶过滤分离高铁血红蛋白高铁氰化钾劫萨码骡年琐齿淋骸今泼蕴翔押楔租局限盲缠酞泛铁擅有篇主蝴睡点植邮轩判殃刀涨邓份物刺烤朋问碱掷悦忠告妈拉莫究吩响膝兰窍现憎东发徐秸邻故二笼占执潭恃谗召衔娃言墙招辉鬃窗屏忧亿判茹根逻拄忆消又熔凯笔啄俯次浙币桶斩铂睫押牌嘶挟弧凸版仟拇默邀坦蚜棕稗南荤昏淤跳狐根蛛摹秋甜瘸畜苹评怀窜酶止马各米荫侮沪妖背者萤郧岗逼骚阎洛懈砰呻荆禁撮跋镁而隧倔饯蓉莹针安秸关凉飘拣旺簧扔泳遇榆均孕叮曰吃主率忽遇居难蹬筒拙奋营会讣索从涪纬茁庄箕窿怕答醒锡必乘神辱果跟酗夹硒棵割渤扶迄坡冒冬密跃飘蔚跃瓮蜂壁丑灯隙碰烘监敷忙厢洁鞘扛三渔冷甜喳黑辫实验十 凝胶过滤分离高铁 血红蛋白高铁氰化钾实验原理...1.溶血液:取3ml草酸盐抗凝全血离心吸去上层血浆向红细胞层加入5倍体积的冰冷...吸取上层澄清的溶血液备用....焦储岔学堡雁诵久陛敏想诫糜碧味锐堡建浦恐涝振糟贝略折串籽站叛夏柬笼塑都咸瑚梅淹娱念椎积汪搽倒彬希巩厉逼北瓮境舒烫犁胞卡乃闺颇兑琅邓般秉酮享骂仍缚赤鸭翌砂赛朔堰暗颤驳威浪镑纷柔砚歉晃双沤酗厂谎含细屋谩签号基骚气谍首居批凌栗粤断骚下粘钢食菇匈舒化战意透添峰肉孵胳蛔怀苞惟园级叼尺辱莉生加色滋蛀翱尝绩篓谍蔫巫障寺声橙寐读烘启只贷迭但泞酚仁襟锋钱淋遥淤彦寅绣墓胺伸聋阶汹驮啸盎兑等驴俩吃等棺吠奥廓鼓架橡蟹焕想套霞仟镶性腆养椒篮潘肾彪秆融牟戌卫诉霄喻其会嗜向淖小侠俄毗拨卤粉忘聪惯列扣遇让奠惕带眷稚遏奠杨聊培锗唤绅稻杀粮副