------------------------------------------作者xxxx------------------------------------------日期xxxxTHP-1细胞培养【精品文档】【精品文档】【精品文档】【精品文档】【精品文档】【精品文档】生物实验：THP-1细胞培养 THP-1是人外周血的单核细胞系，最初来源于急性单核细胞性白血病患者。属于悬浮细胞，适合用于转染或感染实验。其表面抗原HLA型为：A2，A9，B5，DRw1，DRw2。工具/原料培养基：RPMI-1640(Invitrogen#11875-093)胎牛血清：FetalBovineSerum(FBS,GIBCO#10099-141)二甲亚砜：DMSO(SIGMAD2650)双抗P/S(Penicillin/Streptomycin)（GIBCO#15140-122）
方法
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/步骤1细胞培养：THP-1细胞培养于含有10%FBS+1%P/S的RPMI-1640培养基中，培养环境为37℃，5%CO2。可以每隔3-4天加一些新鲜的培养基，或直接传代。2细胞传代：当细胞密度达到约8x10^5cells/ml左右时，即可进行传代。由于是悬浮细胞，可直接将细胞吸出，离心之后传代。传代最少浓度不应少于1x10^5cells/ml。3细胞冻存：取差不多1x10^7个细胞，用1ml含有10%DMSO的FBS重悬，转入冻存管，于-80℃冰箱过夜。第二天移入液氮中长期保存。END注意事项细胞养不好，可能的原因有，THP-1细胞特别依赖细胞浓度，ATCC上105到106每ML，是一个很高的密度，细胞少了就不太容易养好。细胞株的来源很重要，如直接来源于ATCC（AmericanTypeCultureCollection美国模式菌种保藏中心）生命力要强于国内细胞库的。注意细胞的密度一定要高，介于5×105——106/ML之间，增值的快。细胞数量太少，不适合THP-1生长，一般状态不好的THP-1在培养了3天后数量仍然不多，继续培养一天或者两天，培养基严重泛黄，细胞数会增加。这一点不同于同是单核细胞系的U937细胞。THP-1细胞适合在细胞Ph环境偏酸性环境生长，对培养基变化非常敏感，所以尽量使用相同Ph的1640。传代后切忌常移出培养箱观察，否则会影响细胞生长，状态变差，一般首先表现为细胞内颗粒变多。一般THP-1生长相当快，对于状态已经不好的情况，建议传代后3～4天再观察，一般4天时间培养基已明显泛黄，细胞数量巨增;1)THP-1细胞喜欢酸性条件，你不要老是换培养基。越酸的条件，细胞密度越大，细胞就长得越好;2）不要频繁换液，一般2-3次换液离心一次（只是补充培养基）3）使用1640（ATCC推荐），注意加碳酸氢钠2.5g就可以了，宁酸勿碱;4）注意冻存的时候密度大些，推荐用血清冻存。复苏比较慢，建议开始用小瓶，不要用一次性的。
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