高温快速消化与国标消化的凯氏定氮法测定蛋白质含量的比较研究

高温快速消化与国标消化的凯氏定氮法测定蛋白质含量的比较研究 1 2 1 1 1 1 宋 鹏,赵海岳,佟 菲,周 晋,张迎媚,刘秀华 ( 11 哈尔滨医科大学第一临床医学院血液 实验室 17025实验室iso17025实验室认可实验室检查项目微生物实验室标识重点实验室计划 ,黑龙江 哈尔滨 150001 ; ) 21 哈尔滨世亨生物工程药业股份有限公司质保部 ,黑龙江 哈尔滨 150078 摘要 :目的 比较高温消化与国标消化的凯氏定氮法检测蛋白含量的准确性与稳定性有无差异 ,以达到 () 简化操作 、节省时间的目的 。方法 分别用国标消化与高温消化法对 50 g/ L 蛋白校准液 重复 15 次及 15 份 人血白蛋白样品的蛋白含量进行检测 。结果 高温消化与国标消化法检测蛋白含量结果 :蛋白校准液分别为 ( ) 49191 g/ L ?0100 g/ L 和 49195 g/ L ?0100 g/ L t = 111602 , P < 0105; 人血白蛋白样品分别为 : 97165 g/ L ? ( ) 0155 g/ L 和 97161 g/ L ?0157 g/ L t = 015762 , P < 0105。两种检测方法的回归分析 Y = 019987 X + 010797 , 2 R= 019999 。高温消化法的蛋白回收率为 9810 %。结论 高温快速消化的凯氏定氮法检测蛋白含量结果和国 标规定方法无差异 ,但比国标规定方法可以大大缩短工作时间 ,提高工作效率 ,值得进一步推广 。 关键词 :凯氏定氮法 ;蛋白质含量 ;高温消化 文献标识码 : A学科分类代码 : 31014730 中图分类号 : R97212 () 文章编号 : 1004 - 5775 200909 - 0649 - 03 Comparative Study of Protein Levels Detected by Thermophilic Tachy - digestion and Encoding Standard Digestion of Kjel da hl Determination SONG Peng ,ZHAO Hai - yue , TONG Fei , et al 1 ( Haem atology L aboratory of t he Fi rst Aff ili ated Hospit al of Harbi n Medical University , )Harbi n 150001 , Chi na Abstract :Objective The protein levels were detected by thermophilic tachy - digestion and encoding standard digestion of Kjeldahl determin1ation respectively to compare the difference in exactitude and constancy of the two method to simplify the operation and save time1 Methods The proteins of 15 portions of albumin standard liquid and samples were detected by thermophilic tachy - digestion and encoding standard digestion of Kjeldahl determination respectively1 Results The standard fluid ,s protein levels detected by thermophilic tachy - digestion and encoding standard digestion of Kjeldahl de2 ( ) termination were 49191 g/ L ?0100 g/ L and 49195 g/ L ?0100 g/ L t = 111602 , P < 0105respectively1 The sample ,s ( ) protein levels detected by those were 97165 g/ L ?0155 g/ L and 97161 g/ L ?0157 g/ L t = 015762 , P < 0105respec2 2 tively1 The regression analysis formula of detection results of the two methods was Y = 019987 X + 010797 , R= 0199991The protein recovery rate detected by thermophilic tachy - digestion was 9810 %1 Conclusion The detected dif2 ference of thermophilic tachy - digestion and encoding standard digestion of Kjeldahl determination had no significance , but the former procedure could shorten operating time and raise work efficiency and deserve further generalization1 Key words :Kjeldahl determination ; Thermophilic digestion ; Protein level 凯氏定氮法 ,是一种经典的测定蛋白质含量的 ,即得出样品中蛋白质含量 。整 耗量乘以换算系数 方法 。其国标规定的基本检测过程包括 : 消化 : 样 个过程至少需要 6 h 的时间 ,其中消化这一过程即 品和消化剂 、硫酸一同加热 , 使蛋白质消化分解并 至少需要 3,4 h , 耗时较长且操作繁琐 。为此 , 我 释放出氨 ,氨与硫酸结合生成硫酸铵 ; 蒸馏 : 碱化蒸 们经过长时间的实践操作总结 ,对凯氏定氮法中消 馏使硫酸铵中的氨游离 ; 滴定 : 用硼酸溶液吸收后化这一过程进行了改进 , 以期达到简化操作 , 缩短 黑 龙 江 医 学 第 33 卷 Vol133 ,No19 650 Sep12009 2009 年第 9 期HEI LONG J IANG MEDICAL JOURNAL ) 1 方法1000 , P > 0105。 1 111 实验分组对人血白蛋白样品进行蛋白质含量检测结果 , 国标消化法为 97161 g/ L ?0157 g/ L ,高温消化法为分为 2 组 :对照组和实验组 。两组在测定样本 ( 97165 g/ L ?0155 g/ L , 两 种 方 法 无 显 著 差 异 t =蛋白质含量的过程中 , 采用不同的消化方法 , 之后 ) 015762 , P > 0105。样品氮含量结果 :国标消化法为的蒸馏 、滴定 、计算方法 ,则完全相同 。 〔1〕 1516 g/ L ?0101 g/ L ,高温消化为 1516 g/ L ?0101g/ L ,11111 对照组 : 操作严格按照国标规定进行 。其 ( ) 采用的消化方法为小火碳化消化法 : 取样品稀释液 两种方法无显著差异 t = 018069 , P > 0105。 将两 110 mL 与消化剂及硫酸一起加入定氮瓶内 ,于瓶口种方法对蛋白标液和样品检测结果进行 2( ) 放一漏斗 ,将瓶以 45角斜支于有小孔的石棉网上?加 回归分析 见图 2,得出 Y = 019987 X + 010797 , R () = 019999 。热消化 ,消化过程要求小火 400 ?碳化 3 h 左右 。 11112 实验组 :采用的消化方法是高温消化法 :将样 品稀释液 110 mL 与消化剂一起加入定氮瓶内保持 1 000 ?的高温持续加热 ,其过程要求保持定氮瓶内 液体沸腾 ,但所产生的蛋白质气泡不溢出瓶口 ,同时 产生的蒸馏水气体在瓶壁遇冷回流 ,可以将瓶内壁上 的蛋白质带回瓶底进行消化 ,整个消化过程大约 1 h 。 112 蛋白质含量检测 11211 两 组 方 法 的 稳 定 性 、准 确 性 比 较 : 分 别 对 ( ) 50 g/ L蛋白校准液 上海申索及 15 份人血白蛋白 () 样品 蛋白含量未知进行两种方法的蛋白质含量 检测 ,前者重复 15 次 。 ( ) 11212 实验组蛋白回收率检测 见 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 1: 任取 2 种 ) ( 含蛋白的样品 A 、B 蛋白含量未知,每种样品分别 图 1 高温消化法与国标消化法检测样品中蛋白 μ取 3 份各 916 mL ,加入 50 g/ L 的蛋白 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 液 0 L 、 含量和氮含量结果μμμμμ100L 、400L 和分别对应 400L 、300L 、0L 的生 理盐水 ,执行 4 次重复试验 ,进行 2 种方法的蛋白质 含量检测 。最后计算回收率 。 113 统计学分析 数据以 xx ?SD 表示 ,两组间结果比较采用配对 资料的 t 检验及回归分析 。 2 结果 () 211 两组方法的稳定性 、准确性比较 见图 1高温消化法与国标消化法检测蛋白含量结 图 2 对 50 g/ L 蛋白校准液进行蛋白质含量检测结 果的回归分析 果 ,国标消化法为 49195 g/ L ?0100 g/ L , 高温消化 212 实验组蛋白回收率检测 ( 法为 49191 g/ L ?0100 g/ L ,两种方法无显著差异 t结果 见 表 1 。相 对 标 准 偏 差 分 别 为 117 %、 ) = 111602 , P > 0105。蛋白校准液 氮 含 量 检 测 结 μμ018 %、117 %和 112 % , 两 种 分 别 加 入 0 L 、100 L 、 果 :国标消化法为 8120 g/ L ?0100 g/ L ,高温消化为 μ40050 g/ L 的蛋白标准液的混合样品回收率分别 L 、( 8121 g/ L ?0100 g/ L , 2 种 方 法 无 显 著 差 异 t = 为 :9810 %、9715 %、9810 %和 9815 % ,平均为 9810 %。 表 1 实验组蛋白回收率检测结果 蛋白标准液 样品 50 g/ L 蛋白 生理盐水 检测值 回收量均值 相对标准 回收率 理论含量((μμ) ) ()( )( )() () 916 mL标准液 LL % mg/ mLmg/ mL偏差 % () mg/ mL 010 150 ?0100 A 0 400 96- - - 149 17 A 01015 10 ?0102100 300 9896199 ?0100 210 1195 018 A 400 0 98145 ?01009715 ?0103 B 010 - - - 0 400 40120 ?0100 01149 17 9810 ?0102B 100 300 015 40169 ?0100 B 400 0 210 42117 ?0100 1197 112 9815 ?0102 ()山东省乳山市人民医院神经内科 ,山东 乳山 264500 摘要 :目的 探讨综合疗法对急性一氧化碳中毒患者预后的影响 。方法 选择 2002 - 09,2005 - 12 间 56 例患者为对照组 ,给予高压氧 、吸氧 、脱水剂 、B 族维生素 、改善脑细胞代谢等对症治疗 ; 另选择 2006 - 02 ,2009 - 04 间 58 例患者为治疗组 ,在对照组治疗基础上 ,同时给予纳洛酮 、依达拉奉 、针刺等综合治疗 ,并 2 ( χ与对照组进行疗效对比 。结果 治疗组患者总有效率明显高于对照组 ,两者间有显著性差异 = 5121 , P ( ) ) < 0105;治疗组患者意识恢复时间明显少于对照组 ,两者间有高度显著性差异 t = 61960 , P < 0101;治 疗2 ( χ组患者一氧化 碳 中 毒 后 迟 发 性 脑 病 发 生 率 明 显 低 于 对 照 组 , 两 者 间 有 显 著 性 差 异 = 5154 , P < ) 0105。结论 对一氧化碳中毒患者采用综合治疗措施 ,可以明显提高患者的治愈率 ,降低致残率 ,并减少 后遗症的发生 ,提高患者的生活质量 。 关键词 :纳洛酮 ;依达拉奉 ;针刺 ;一氧化碳中毒迟发性脑病 文献标识码 : A 学科分类代码 : 320157 中图分类号 : R749163 () 文章编号 : 1004 - 5775 200909 - 0651 - 03 Prognostic Effect of Acute Carbon Monoxide Poisoning Patients Treated by Combined Thera py HU J i - qing , WANG Hong - ju ( ) Rus han People’s Hospit al of S handong Provi nce , Rus han 264500 , Chi na 3 讨论, 结果显示 : 两种测定方法 白含量进行检测并比较 近年来 ,对样品中蛋白质含量检测的准确度要 在稳定性 、准确性方面无显著差异 。两种方法比较 求越来越高 ,特别是奶粉的“三聚氰胺”事件发生以 的回归分析显示斜率为 019987 ,接近于 1100 , 显示 出的比 例 分 析 误 差 是 0113 % , 这 种 误 差 相 当 于 在来 ,在对有关含氮的各检测方法中凯氏定氮法的标 50 g/ L为 - 01065 g/ L ,在 100 g/ L 为 - 01065 g/ L 。Y 准地位也再一次被确定 。凯氏定氮法不仅是对含 氮的有机化合物定量的标准方法 ,也是蛋白质含量 轴截矩接近于 0 ,表明固有系统误差很小 ,符合实验 测定最经典的方法 , 但其同时也存在操作步骤多 , 要求 。回收率测定 x x = 9810 % ,即相当于 2 %的比 耗费时间长等缺点 。国标规定的凯氏定氮法测定 例误差 。这一误差小于实验允许的总误差 ,再次验 蛋白质含量时 , 其消化过程要求小火碳化 , 温度约 证了该方法具有良好的准确性 。 400 ?,待 样 品 呈 澄 清 透 明 后 再 继 续 大 火 消 化但本实验室经多次试验与统计学分析发现 ,高30 min ,总消化过程需要 3,4 h ,整个蛋白检测过程 温消化方法并不适用于免疫球蛋白含量较高的样 至少需要 6 h 的时间 。 品的蛋白含量检测 ,其原因有待于进一步探索 。 为了缩短检测时间 ,本实验室采用高温持续消综上所述 ,本研究揭示高温消化方法检测蛋白化的方法代替国标的小火碳化消化法 ,使加热温度 含量结果准确 、快速 , 较国标规定的方法大大缩短 保持在 1 000 ?左右 ,使消化液处于持续沸腾状态 , 了工作时间 ,提高了工作的效率 ,适于广泛推广 。 同时产生的蛋白质泡沫又不溢出瓶口 。高温消化 参考文献 : 〔1〕中华人名共和国国家标准 GB/ T 500915 —法使消化过程缩短为 1 h 左右 ,使整个蛋白检测过 程缩短为 3,4 h 。 2003 蛋白质测定的国标规定方法 :凯氏定氮法 () 通过高温和小火碳化两种消化方法对样本蛋编辑 :谢忠艳 ()收稿日期 :2009 - 07 - 27