HPLC切换波长法同时测定参芪五味子片中五味子酯甲和五味子甲素的含量

HPLC切换波长法同时测定参芪五味子片中五味子酯甲和五味子甲素的含量 HPLC切换波长法同时测定参芪五味子片 中五味子酯甲和五味子甲素的含量 ? 458?齐鲁药事?QiluPharmaceuticalAffaits201IVo1.30.No.8 HPLC切换波长法同时测定参芪五味子片中 五昧子酯甲和五味子甲素的含量 连传宝 (淄博市药品检验所,山东淄博255086) 摘要:目的通过切换波长高效液相色谱法同时测定参芪五味子片中五味子酯甲和五味子甲素的含量.方法采 用高效液相色谱法,使用AgilentZorhaxSB—Cl8(250mm×416mm,5m)色谱柱,以甲醇一水(69:31)为流动相,流速: 1.0mL?rain,,柱温:40?,五味子酯甲检测波长为222nm,五味子甲素检测波长为251nm.结果五味子酯甲,五味 子甲素分别在0.171,3.420p.g(Y=24107309X+2.71784×10,r=0.9999),0.218—5.460~g(Y=2069343X+ 1.04110X10,r=0.9999)范围内与峰面积呈良好的线性关系.平均加样回收率分别为99.73%,99.21%,RSD(n= 6)分别为1.3%,1.4%.结论本法灵敏,准确,简便,快速,可用于同时测定参芪五味子片中五味子酯甲和五味子甲素 含量. 关键词:参芪五味子片;五味子酯甲;五味子甲素;切换波长;高效液相色谱法 中图分类号:R927.2文献标识码:A文章编号:1672—7738(2011)08—0458—03 SimultaneousdeterminationofwuweiziesterAanddeoxysehizandrinin ShenqiWuweiziPillbyHPLCwavelengthswitchingmethod uANChuan.bao (ZiboInstituteforDrugControl,Zibo255086,China) Abstract:ObjectiveToestablishanHPLCwavelengthswitchingmethodforsimultaneousdeterminationforwuweiziester AanddeoxyschizandrininShenqiWuweiziPil1.MethodsThedeterminationwasperformedbyHPLConAgilentZorbaySB— Cl8Column(250mmx4.6mm.5m)byisocraticelutionwiththemobilephaseofmethanol— water(69:31)attheflowrate of1.0mL?min, Thecolumntemperaturewas40oC.Thedetectionwavelengthofdeoxyschizandrinwas251amandthatofWU. weiziesterAwas222nm.ResultsThelinearrangeofwuweiziesterAanddeoxyschizandrinwere0.171—3.420g(Y=24 107309X+2.71784X10',r=0.9999).0.218,5.460g(Y=2069343X+1.04110× 10.r=0.9999).respectively. TheaveragerecoveryofwuweiziesterAanddeoxyschizandrinwere99.73%(RSD:1.7%)and99.21%(RSD=1.4%),re? spectively.ConclusionThismethodwassensitive,accurate.simpletrapidandsuitableforthedeterminationofwuweiziesterA anddeoxysehizandrin. Keywords:ShenqiWuweiziPill;WuweiziesterA;Deoxyschizandrin;Wavelengthswitching;HPLC 参芪五味子片收载于《中国药典)2010年版(一部)J, 产品是根据中医学理论,由南五味子,党参,黄芪,炒酸枣仁 四味中药加工而成的纯中药制剂,具有健脾益气,宁心安神. 用于气血不足,心脾两虚所致的失眠,多梦,健忘,乏力,心 悸,气短,自汗.南五味子是方中的君药,为木兰科植物华中 五味子(SchisandrasphenantheraRehd.etWils.)的干燥成熟 果实,具有收敛固涩,益气生津,补肾宁心等功效….其主要 活性成分为木脂素类,包括五味子甲素,五味子酯甲,一五 味子素等.2010年版《中国药典》采用HPLC法测定五味子 醇甲的含量.为进一步控制产品质量,本实验首次利用 HPLC切换波长技术同时测定参芪五味子片中五味子酯甲和 五味子甲素,为研究参芪五味子片的质量 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 提供科学依 据.结果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明:该法简便,快速,准确,可用于同时测定参芪 五味子片中五味子酯甲和五味子甲素的含量. 1仪器,样品与试剂 LC一20ATVP高效液相色谱仪(Shimadzu),SPD一20AVP 紫外检测器(Shimadzu),CTO一20A柱温箱,SIL一20A自动 进样器.五味子酯甲对照品(中国药品生物制品检定所,批 号为:200405),五味子甲素对照品(中国药品生物制品检定 所,批号为:9804).参芪五味子片(甘肃独一味生物制药股 齐鲁药事?QiluPharmaceuticalAffairs2011VoL30,No.8 份有限公司,批号:1006010003),阴性对照为自制.甲醇为 色谱纯,水为二次蒸馏水. 2方法与结果 2.1色谱条件色谱柱为AgilentZorbaxSB—Cl8(250mm ×416mm,5m),流动相为甲醇一水(69:31),五味子酯甲 检测波长为222nm,五味子甲素检测波长为251nm,流速: 1.0mL?min,,柱温:4O?,进样量1O.理论板数按五 味子酯甲和五味子甲素峰计算均不低于6000,分离度均大 于1.5. 2.2对照品溶液的制备取经五氧化二磷减压至干燥恒重 的五味子酯甲对照品17.10mg,置50mL量瓶中,加甲醇溶 解并稀释至刻度,摇匀,制成对照品贮备液(0.3420mg? mL),再精密量取1mL,置5mL量瓶中,加甲醇稀释至刻 度,摇匀,即得五味子酯甲对照品溶液(每1mL中含五味子 酯甲0.0684mg). 取经五氧化二磷减压至干燥恒重的五味子甲素对照品 10.92mg,置10mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇 匀,制成对照品贮备液(1.0920mg?mL),再精密量取1 mL,置10mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得五味子 甲素对照品溶液(每1mL中含五味子甲素0.1092mg). 2.3供试品溶液的制备取本品10片,除去糖衣,精密称 定10片(10片重:3.1402),研细,精密称取本品约3g,置锥 形瓶中,精密加入甲醇25mL,称定重量,超声处理(功率300 w,频率40kHz)30min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失 的重量,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液. 2.4阴性供试品溶液的制备按处方中药味的比例制成缺 南五味子的模拟制剂,取3g,按供试品溶液的制备方法制成 阴性供试品溶液.由图4可以看出,阴性溶液在与五味子酯 甲和五味子甲素对照品相同保留时间处未显色谱峰,故认为 无干扰.色谱图如1—4. 图1五味子酯甲对照品 量 I 图2五味子甲素对照品 ? 459? 图3参芪五味子片样品 图4阴性样品 2.5线性关系考察分别精密吸取五味子酯甲对照品贮备 液(0.3420mg?mL)0.5L,1IxL,2IxL,5L,10L,注 入液相色谱仪,测定峰面积.结果以峰面积为纵坐标,进样 量(g)为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程:Y=24107 309X+2.71784×10,r=0.9999.结果表明五味子酯甲在 0.171,3.420Ixg范围内线性关系良好,结果见表1. 表1五味子酯甲线性关系考察 编号12345 对照品进样量(P,g)0.1710.3420.6841.713.420 峰面积4373235869762317145320加59432583075365 分别精密吸取五味子甲素对照品贮备液(1.092mg? mL)0.2,0.5t.tL,1,2,5,注入液相色谱仪,测 定峰面积.结果以峰面积为纵坐标,进样量(g)为横坐标, 绘制标准曲线,得回归方程:Y=2069343X+1.04110× 10,r=0.9999.结果表明五味子甲素在0.218—5.460g 范围内线性关系良好,结果见表2. 表2五味子甲素线性关系考察 2.6精密度试验分别精密吸取五味子酯甲和五味子甲素 对照品溶液10,重复进样5次,结果五味子酯甲平均峰面 积为17032351,RSD为0.32%;五味子甲素平均峰面积为 2391768,RSD为0.34%.结果表明,精密度良好. 2.7重复性试验取同一批(批号1006010003)样品5份, 分别按2.3项下方法制备供试品溶液,并进行测定,结果样 品中五味子酯甲和五味子甲素的平均含量分别为0.2031 mr,/片和0.6374mg/片,RSD分别为0.59%和0.62%.表 明重复性试验良好. 2.8稳定性试验将2.7项下第一份供试品溶液,置室温 下分别放置0,2,4,6,8,10,12h,各进样1O,五味子酯甲 ? 460? 平均峰面积为17012251,RSD为0.91%,n=7;五味子甲 素平均峰面积为2389325,RSD为0.56%,n=7,结果表明 供试品溶液在12h内基本稳定. 2.9回收率试验采用加样回收率法.取已知含量的同一 批(批号1006010003,五味子酯甲含量0.2031mS/片和五味 齐鲁药事?QiluPharmaceuticalAffaits2011Vo1.30,No.8 约3g,分别精密加入五味子酯甲贮备液(0.3420mg? mL)和五味子甲素贮备液(1.092mg?mL)各1mL,按 2.3项下方法提取,制备供试品溶液,进样量均为10,测 定峰面积,计算,五味子酯甲平均回收率为99.73%,RSD= 1.3%,五味子甲素平均回收率为99.21%,RSD=1.4%.结 子甲素含量0.6374me/片)60片,除去糖衣,研细,精密称取果见表3和表4. 表3五味子酯甲回收率试验 3讨论 3.1原质量标准中只测定五味子甲素的含量,而五味子酯 甲有明显的降低谷丙转氨酶的作用J,所以建议增加五味子 酯甲的含量测定,以更好地控制产品质量,保证I临床疗效. 3.2经对五味子酯甲和五味子甲素对照品的甲醇溶液,经 紫外分光光度计扫描,五味子酯甲在222am有最大吸收,而 五味子甲素在222am附近吸收较小,五味子甲素在248am 有最大吸收,如果只选择222nm或者248am为检测波长不 利于与杂质峰的分离和含量的计算,故选择220llm作为五 味子酯甲的紫外检测波长,251nm作为五味子甲素的检测波 长.在本实验色谱条件下,五味子酯甲的保留时间是15.5 min左右,五味子甲素保留时间是28.86min左右,故本实验 采用切换波长法对供试品进行检测分析,以避免单一波长不 能使每个组分都在最佳检测波长下检测的欠缺,本实验所确 定的0—22min222llm;22,50min248nm,此条件基线平 稳,可获得满意的分离和测定结果. 3.3根据五味子甲素和五味子酯甲的性质,曾对同一批号 样品(批号1~010003)采用三氯甲烷和甲醇进行提取,结 果表明以甲醇提取效率较高.在此基础上又进行甲醇超声 30min及加热回流提取30min进行比较,甲醇超声30min 各指标成分含量较高,提取简单.故确定供试品溶液的制备 方法为甲醇超声提取30min. 3.4流动相为乙腈一醋酸一水(64:1:35)J,甲醇一四氢呋 喃一水(76:4:20)和甲醇一水(78:22)j,甲醇一水 (71:29:0.1)以及甲醇一水(69:31)进行比较,发现甲醇 一 水(69:31)五味子甲素和五味子酯甲均能达到基线分离, 对色谱柱的损害较小.故采用甲醇一水(69:31)为流动相. 参考文献: [1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[s].北 京:中国医药科技出版社,2010:227,859. 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