RP-HPLC 法测定参芪二仙片中淫羊藿苷的含量【精品分享】
【摘要】目的建立RP-HPLC法测定参芪二仙片中淫羊藿苷的含量。方法色 谱柱,资生堂C18 (250X4.6 mm, 5|J m);流动相乙腈-水,30: 70),流 ,
速,1. 0ml • min-1,检测波长,270 nm。结果淫羊藿苷在0. 0408? 0.2040M g *1111-1的范围内,线性关系良好,r=0.9993;平均回收率,96.1%, RSD=0. 56% (n=6)。结论方法简便,快速,结果准确,可用于参芪二仙片的质 量控制。
【关键词】参芪二仙片,淫羊藿苷,反向高效液相色谱法 参芪二仙片含有红参、黄芪、当归、仙茅、淫羊藿、巴戟天、黄柏、知母成 分。原标准收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第二十册。具有补肾填精, 调补冲任,益气养血的功效。用于肾虚腰膝酸软,阳痿早泄,遗精,妇女更年 期经血不调等症[1]。原标准中质量控制项只有性状、显微鉴别项和检查项,没 有含量测定。本实验建立了对处方中淫羊藿的淫羊藿苷含量测定方法,科学合 理有效地控制了药品质量,提高了药品质量标准[1]。
1仪器与试药
1.1仪器
日本岛津LC-2010C HT高效液相色谱仪,日本岛津LC Solution色谱工作站。 电子分析天平,瑞士,d=0. Olmg)。
1.2试药
淫羊藿苷对照品,中国药品生物制品检定所,批号,110737-200415),水为 二次蒸馏水,甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙腈均为色谱纯,其余试剂均为分析纯; 参芪二仙片,沈阳红药制药有限公司,批号,20090202、20090203、 20090204)。
2方法与结果
2. 1对照品溶液的制备
取淫羊藿苷对照品10.012 mg,精密称定,加甲醇制成每1 ml含 10. 012 M g的溶液,即得。
2.2供试品溶液的制备
取本品10片,除去糖衣,精密称定,研细,取0.5g,精密称定,加入50% 乙醇溶液50ml,加热回流30分钟,放冷,滤过,用50%乙醇溶液洗漆残渣及 滤器3次,每次lOral,合并滤液及洗液,蒸至近干,残渣加水20ml使溶解, 转移至分液漏斗中,用乙酸乙酯振摇提取5次,每次15 ml,合并提取液,蒸 干,残渣加甲醇使溶解,转移至10 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤 过,取续滤液,即得。
2.3阴性对照溶液的制备
取除淫羊藿柏以外的其它药材,按制法中工艺制备阴性样品。其它操作同供试 品溶液的制备方法,制成阴性对照溶液。
2. 4色谱条件
色谱柱,资生堂C18 (250X4.6 mm, 5jJ ra),检测波长为,流速为 1.0 ml - min-1,流动相为乙腈-水,30: 70),理论板数按淫羊藿苷峰计算不 低于5000;按上述色谱条件,分别取供试品溶液、对照品溶液及阴性液各进样 10m 1,记录色谱图,见图1)。结果
表
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明在淫羊藿苷对照品色谱相应的位置上, 供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰,阴性对照溶液在此峰位无吸收,对本 品中淫羊藿苷含量测定无干扰,淫羊藿苷峰与其它组分峰分离完全[2. 3]。
2. 5线性关系考察
精密称取淫羊蕾苷对照品10. 20mg,置100ml量瓶中,用甲醇溶解并稀释至 刻度,摇匀,制成对照品溶液。,0.1020mg *1111-1)。分别精密吸取对照品溶 液4[J 1、8|J 1、12[l 1、16|J 1、20(J 1分别注入液相色谱仪中,记录色谱图, 将峰面积对其相应的浓度进行回归处理,得回归方程,Y=1.36X106X+ 1.46X104,r=0. 9993,表明淫羊藿苷对照品进样量在0. 0408?0. 2040|J g范 围内线性关系良好。
2.6精密度试验精密吸取同一供试品溶液10ul连续进样6次,测定峰面积, RSD为1.8%,表明本法精密度良好。
1. 7重复性试验
取批号20090202的样品6份,按2. 2项下供试品溶液制备方法试验,测定 样品中淫羊藿苷的含量,平均值0.2494 mg.g-l,RSD为1. 6%.表明方法重复性 良好.
2.8稳定性试验
取同一供试品溶液在0、2、4、6、12、24h分别进样10 ul,测定峰面积, RSD为1.8%,结果表明供试品溶液在12小时内稳定。满足方法要求. 2.9加样回收率试验
取已知含量的本品,批号20090202,含量0.2494mg/g),精密称取供试品 0.25g,共称取6份,分别精密加入淫羊藿苷对照品溶液,C=0.06186rog/ml)
lral,再加入50%乙醇溶液50ml,按2. 2项下“……加热回流30分钟”起制备 供试品溶液。精密吸取10M 1,注入液相色谱仪,测定色谱峰面积,计算回收 率,结果加样回收率为98.7%, RSD为0.87% (n=6)。
2.10样品含量测定精密吸取供试品溶液10ul,
进样依法测定,结果见表1。
3讨论
2. 1检测波长的选择
在200?600nni波长对淫羊藿苷对照品进行紫外扫描,淫羊藿苷在270mn处 有最大吸收,且其他组分无影响,故确定270rai为测定波长。
3.2提取方法的选择
根据《中国药典》2010版一部中淫羊藿的含量测定方法中采用稀乙醇做为提 取溶剂,故在本试验中,进行多种方案提取,最终选定加入50%乙醇溶液50ml, 加热回流30分钟,放冷,滤过,用50%乙醇溶液洗潘残渣及滤器3次,每次 10ml,合并滤液及洗液,蒸至近干,残渣加水20ml使溶解,转移至分液漏斗 中,用乙酸乙酯振摇提取5次,每次15ral,合并提取液,蒸干,残渣加甲醇使 溶解为最佳方法。
3.3流动相的选择
在试验中,参考有关文献,采用乙腈-水几种配比作为流动相,但结果不理想, 最后认定乙腈-水,30: 70)为流动相,测定淫羊藿苷的含量,分离效果较好, 峰型理想。该方法简便,快速,稳定,分离效果佳,结果准确,可用于参芪二 仙片中淫羊藿苷的含量测定的方法。
参考文献
[1] 卫生部药品标准[S].中药成方制剂.第二十册.1998:156. [2] 中国药典[SL
2010年版•一部.306 [3] 徐天玲.HPLC法测定强骨益肾胶囊中淫羊藿苷的含量[J].中国药 师,2010, 13(10): 1526-1527.
浙公网安备 33021202002483