益脉康滴丸研究（可编辑）

益脉康滴丸研究（可编辑） 河南大学 硕士学位论文 益脉康滴丸的研究 姓名:田帅华 申请学位级别:硕士 专业:中药学 指导教师:李钦 20100501摘 要 摘 要 益脉康滴丸是依据中医理论及临床经验、针对中风恢复期(中医辨证属 气虚血瘀证)制成的纯中药制剂。具有益气活血,化瘀通络之功效,主要用 于中风所致半身不遂、口歪眼斜、肢体麻木等。我们本着以中医药学理论为 基础,与现代制剂技术相结合的原则,选择中药滴丸剂为该药的剂型。在研 究过程中,依次对复方中中药提取纯化工艺、益脉康滴丸的制备工艺、质量 标准、稳定性进行了研究。提取纯化工艺研究:根据复方中各味中药的理化性质,参考相关文献, 确定工艺路线为灯盏细辛乙醇回流提取,碱水助溶,酸沉纯化;人参乙醇回 流提取;水蛭地龙水提醇沉。通过正交试验,确定灯盏细辛的提取工艺为: 加8倍量75%乙醇,回流提取3次,每次1.5h;灯盏细辛中野黄芩苷的纯化 工艺为碱提pH为7.5,酸沉pH为 2.0,保温温度55?,保温20min。通过 正交试验,确定人参中人参皂苷的提取工艺为:加 10倍量 75%乙醇回流三 次,每次1.5h。通过正交试验,确定水蛭地龙的提取工艺为:加12倍量水 煎煮提取三次,每次2h,提取液浓缩至适量,加乙醇使含醇量达到60%,滤 过,即得。 滴丸成型工艺研究:通过对成型工艺影响因素的考察与正交 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 研究, 得到最佳成型工艺条件为:以聚乙二醇6000PEG6000为基质,二甲基硅油 为冷凝剂,提取物与基质配比为1:1.8,药液温度为65~70?,冷却温度 为10~15?。 质量标准研究:本文建立了 HPLC法测定益脉康滴丸中野黄芩苷的含量 测定方法,并进行了方法学考察,拟定含量限度为:本品每丸含灯盏细辛以 野黄芩苷计,不得少于 1.0mg;本文建立了 HPLC法测定益脉康滴丸中人参 皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1总皂苷含量的测定方法,并进行了方 法学考察,确定含量限度为:本品每丸含人参以人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、 人参皂苷Rb1总量计,不得少于 70.0μg;建立了TLC法鉴别灯盏细辛、人 参、地龙、水蛭、冰片的方法,阴性无干扰,专属性强;进行了益脉康滴丸 I河南大学硕士学位论文 田帅华 中丸重变异系数检查和溶散时限检查。本实验建立的定性、定量方法,经方 法学考察,符合要求,可较好的控制该制剂质量。 加速稳定性考察:益脉康滴丸采用拟上市包装(药用塑料瓶包装,150 丸/瓶,薄膜衣丸,53mg/丸),试验温度40??2?、相对湿度RH75%?5 %条件下进行加速稳定性试验。分别于0、1、2、3、6个月末取 样,对质量 标准的主要 内容 财务内部控制制度的内容财务内部控制制度的内容人员招聘与配置的内容项目成本控制的内容消防安全演练内容 进行了考察,考察项目包括:性状、鉴别、含量测 定、丸重 差异及溶散时限。结果表明:三批样品放置六个月,各项 检测 工程第三方检测合同工程防雷检测合同植筋拉拔检测方案传感器技术课后答案检测机构通用要求培训 结果 与“0” 月比较,未见明显变化,说明本品质量稳定。 本文对益脉康滴丸进行了制备工艺、质量标准和加速稳定性试验, 结果 表明:工艺合理,质量控制方法先进、药品质量稳定,为该制剂的 进一步深 入研究提供了实验基础。 关键词:益脉康滴丸;制备工艺;质量标准;稳定性IIAbstract AbstractYi Mai Kang dripping pills are made of pure Chinese medicine which are based on traditional Chinese medicine theory and clinical experience and for apoplexy recovery TCM differentiation of symptoms and signs are deficiency of vital energy and blood stasis. Yi Mai Kang dripping pills have effect in benefiting vital energy , promoting blood flow , dispersing blood stasis and dredging collateral .They are mainly used for curing hemiparalysis,mouth tilt and eye obliquity,anaesthesia of limbs,which are caused by apoplexy.We are guided by traditional Chinese medicine theory, we combine it with modern preparation technology, and finally selected dripping pills as doses drug formsIn the course of the study, extraction and purification of the traditional Chinese medicine in this complex prescription, preparation process of Yi Mai Kang dripping pills, quality standards and stability were studiedExtraction and Purification Technology study: According to the physical-chemical property of various compounds in the medicines of the complex prescription, and with reference to relevant literature, we determined the technology route as follows: extracting fleabane with ethanol by recirculation; extracting Panax ginseng with ethanol by recirculation; extracting leech and angle worm with water and then sedimentating the extract with ethanol. By using orthogonal experiment, we determined the extraction process as follows: 8 times the amount of solvent ,75 % ethanol, refluxing and extracting three times, each time for 1.5 hours; process of purification of scutellarin in fleabane: alkali-extracted pH 7.5, acid- stagnation pH 2.0, preservation temperature 55?, preservation for 20 min.By using orthogonal experiment, we determined the extraction process of ginsenoside in Panax ginseng as follows: 10 times the amount of solvent ,75 % ethanol, refluxing and extracting three times, each time for 1.5 hours.The extraction process of leech and earth worm was determined as follows: 12 times the amount of water, decocting three times, each time for 2III河南大学硕士学位论文 田帅华 hours, concentrate the extract to the appropriate amount, add ethanol so that it contains 60% alcohol, filtration, the filtrate is what we wantDripping Pills Preparation technology Study: Through the investigation of factors and orthogonal design research, the best modeling technique were: polyethylene glycol 6000 PEG6000 as the substrate, dimethyl silicone as the condensing agent, ratio of extract and substrate is 1:1.8, liquid temperature is 65 ~ 70?, the cooling temperature is 10 ~15? Quality standards study: In this paper, a HPLC method for the determination of scutellarin in Yimaikang dripping pills was established, and the methodology was investigated, content limits are as follows: Total scutellarin content of the product per Pill not less than 1.0mg; In this paper, a HPLC method for the determination of ginsenoside Rg1, ginsenoside Re, ginsenoside Rb1 in Yimaikang dripping pills was established, and the methodology was investigated, content limits are as follows: Ginsenoside Rg1, ginsenoside Re, ginsenoside Rb1 amount of the product per pill not less than 70.0?g; TLC identification of fleabane, ginseng, earthworm, leech, borneol methods were established, non-interference of negative, good specificity; We conducted Pill weight variability coefficient and time limited of melting of Yimaikang dripping pills. The established qualitative and quantitative methods were investigated by the methodology, results show that they meet the requirements and can control the quality of preparationAccelerated stability study: Yimaikang dripping pills that are para-marketing packaging plastic drug bottles, 150 pills / bottle, film Yi pill, 53mg / pill, test temperature 40? ? 2?, relative humidity RH75% ? 5% ,under such conditions ,accelerated stability test were conducted. Sampling respectively at the end of 0,1,2,3,6 month, we investigated the main contents of the quality standards which include: character, identification, determination, pill weight variance and time limited of melting. The results showed that: three batches of samples placed on six months of the test results compare with "0" month, there is no significant change, indicating that the product quality is stable This article is about preparation process, quality standards and acceleratedIVAbstract stability of Yimaikang dripping pills, test results show that: technology is reasonable and quality control method is advanced, drug quality is stability, which provides experimental basis for the further research of this preparation Key words: Yimaikang Dripping pills; preparation process; quality criteria; stability V第二章 益脉康滴丸的制备工艺研究 第一章 概述 第一节 研究的目的和意义 中风也称脑卒中,多在人体气血内虚情况下,或因劳倦内伤、或因忧思 恼怒、或因嗜食厚味及烟酒等诱发,以突然昏仆、半身不遂、口歪眼斜、言 语蹇涩、偏身麻木为主症,分为两种类型:缺血性脑卒中和出血性脑卒中。 中风是中医学对急性脑血管疾病的统称。由于本病发病率高、死亡率高、致 残率高、复发率高以及并发症多的特点,所以医学界把它同冠心病、癌症并 列为威胁人类健康的三大疾病之一。 我国中风病的发病率、患病率及死亡率都较高,在造成我国人口死亡的 三类疾病中占第一位,比冠心病要高 2-4倍之多。在我国,它的发病率为每 年每 10万人 185219例,以我国总人口数 12亿计算,则中风病人有 515万-744 万人,并且在我国,中风发病率有逐年上升的趋势。随着我国人口老龄化趋 势的加剧,在我国的发病率呈逐年上升趋势,发病年龄有提前的趋势,并具 有起病急、病情重、变化快及病死率高的特点,成为致残致死的首要原因, 严重危害着人类身体健康,给患者、家庭和社会带来了沉重的负担,因而这 类疾病一直是医学界的重点课题。 目前,西医临床治疗心脑血管疾病主要采用血管扩张剂、降压剂等药物 的联合治疗,虽然疗效较快,但对人体均有相当程度的不良反应和副作用, 且其重点是针对疾病的急性期,对于病人急性期后的恢复和后遗症的治疗还 缺少安全有效的药物;而中医目前治疗中风及胸痹类的药物一般以益气活血 类药为主,如复方丹参片、血栓心脉宁胶囊等,但还存在疗效不稳定和治愈 率低等不足。因此,在现有中成药品种之外,研制开发功能较为全面、适应 范围较为广泛,对于病人急性期后的恢复期的治疗安全有效的药物,显得迫 切,并具有现实意义。 本课题拟将临床有效治疗中风恢复期的中药复方,采用现代技术提取、 纯化复方中中药的活性成分,制成新型速效制剂益脉康滴丸,并对其进行质 量标准研究、稳定性考察等。将为临床提供中风恢复期治疗一种新的选择。 1河南大学硕士学位论文 田帅华 第二节 中医药理论阐述 本发明根据传统中医理论,依据“异病同治”、“标本兼治”、“治病求本” 等辨证论治思想,结合设计者多年临床实践和现代药效学、毒理学的研究成 果精心研制而成。中风病机为本虚标实,本虚为气血亏虚。又以气虚最为突 出,标实为血疲、痰浊、寒凝,又以血痪为主,正虚邪实相搏为患。中风多 因气虚血癖、脉络癖阻、肝阳上亢、风痰阻络为患。好发生于中老年人,主 要是因为人过中年,正气日衰,气虚无力推动血行,血液运行迟缓并逐渐停 滞而癖阻于脉中。根据对上述病因病机的认识,本发明设计了“心脑同治” 的治疗原则,精选灯盏细辛、人参、水蛭、地龙、冰片 5味药物,全方具有 益气活血、化癖通络止痛之功效,对中风的治疗特别是对此二症 恢复期及后 遗症期的治疗具有很好的效果,可明显改善气虚血癖证候,显著降低或消除 此类病症对人们健康的威胁。 本药方充分体现了祖国医学的辩证论治原则。其中重用灯盏细辛,灯盏 细辛又名灯盏花,性温,味辛、微苦,归心、肝经,活血通络止痛、祛风散 寒为君;人参味甘、微苦、温,大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津,安 神定志而止惊悸,配灯盏细辛使活血通络不致太过而伤正,为臣药;地龙具 有清热息风、通行经络之效,水蛭善破血逐癖,此处以二味虫药作为方中佐 药,既是取虫类能搜剔络中之邪的作用,通经透络,又有引药入经之义,可 引方中诸药直达病所脉络。此外,虫类药味咸,其与方中活血药同用则有辛 咸同用之义,盖辛则通,咸能软坚散结,使血络瘀滞得行、气机调畅、邪去 正安。冰片性微寒味辛,为开窍醒神、清热止痛之上品,用为使药。全方中 诸药合用,可共奏益气活血、化癖通络止痛之功,审因论治、法随证立,方 从法出、立方有据。 第三节 处方中药物化学成分及药理的现代研究 1 灯盏细辛 本品为菊科植物短葶飞蓬Erigeron breviscapusVant.Hand.-Mazz.的干 [1] 燥全草。灯盏细辛有祛风除湿、活络止痛之功效 。野黄芩苷是从中草药灯 盏细辛中提取得到的。现代药理研究表明,野黄芩苷能够显著降低血液粘度 2第二章 益脉康滴丸的制备工艺研究 [2] 和血脂水平 ,改善脑血流量,降低血管阻力和抗血小板聚集及抗血栓形成 [3-5] ,逆转心室重构、抗心肌缺血、心律失常、逆转高血压心肌、间质及血 [6-8] [9-11] 管重构 ,抗心绞痛、心律失常多种功效 。 2 人参 中药人参为五加科多年生草本植物人参Panax ginseng的干燥根,是传 统名贵中药,始载于我国第一部草本专著《神农本草经》。其味甘、微苦、 性温,有大补元气,生津止渴,安神等功效。其化学成分包括人参皂苷,人 参多糖和多种活性肽等。其中前者为人参的主要有效成分之一。根据苷元的 结构不同,人参皂苷又分为齐墩果烷型五环三萜皂苷,其皂苷元为齐墩果酸, 在自然界中普遍存在,人参皂苷-Ro属此类皂苷;另一类为达玛烷型四环三 萜皂苷,人参皂苷绝大多数属于此类皂苷。该类皂苷又可分为 20s-人参二 醇组皂苷PDS和 20s-人参三醇组皂苷PTS。近年来,围绕人参的研究主 要集中于对人参皂苷的心血管药理方面的研究及探讨。现已证明人参对心肌 缺血/再灌注损伤具有保护作用,能抗心律失常、抗休克保护心肌,能有效 地改善血流动力学以达强心作用,能提高机体耐缺氧能力并可调节脂质代谢 [12,13] 以发挥抗动脉粥样硬化等作用 。 3 水蛭 水蛭是一味传统的中药,俗称蚂蝗,属高度特异化的环节动物,在我国分 布就有 62 种之多。中国药典 2005 年版收载为水蛭科动物蚂蝗Whitmania pigra ,Whitman 、水蛭Hinude nipponica ,Whitmand 和柳叶蚂蝗Whitmania acranulata ,Whitman 的干燥体。水蛭始载于《神农本草经》,谓其“味咸平、 主逐恶血、瘀血、月闭、破血瘀积聚、无子、利水道。”中医认为它有破血、 逐瘀、通经的功能,临床用于治疗?瘕、痞块、血瘀闭经、跌打损伤等。水 [14,15] [16-18] 蛭的现代药理研究表明,水蛭有很强的抗凝 和抗血栓形成作用 ,可 增加动物的脑动脉血流量,促进血肿吸收,缓解颅内高压,改善局部血液循 [19] 环,保护脑组织免遭破坏,有利于神经功能恢复 。 3河南大学硕 士学位论文 田帅华 4 地龙 本品为钜蚓科动物参环毛蚓Pheretima aspergillum E. Perrier 、通俗 环毛蚓 Pheretima vulgaris Chen、威廉环毛蚓 Pheretima guillelmi Michaelsen 或栉盲环毛蚓 Pheretima pectinifera Michaelsen 的干燥体。性味咸寒, 有清 热、平肝、正喘、通络之功效, 主治中风半身不遂等。实验结果表明, 地龙 提取液对家兔具有抑制血栓形成的作用, 这种作用可以从血小板血栓和纤 [20] 维蛋白血栓形成时间的明显延长得到证实 。研究发现,地龙提取物可明 显降低大鼠血小板黏附率,延长体内血栓形成和溶解体内血栓,并能增加大 [21] 鼠脑血流量,减少脑血管阻力 。 5 冰片 冰片亦称龙脑、龙脑香、梅花脑、梅花冰片等,功能开窍醒神、清热止 痛,用于热病神昏、痉厥、中风痰厥、惊痫痰迷、喉痹齿痛、口疮痈疡、目 赤。冰片较少单独应用,常用作“引药及佐药”,中成药有较多的冰片配伍应用, [22] 由于冰片可促进药物通过血脑屏障 ,在心脑血管病治疗中应用尤其广泛。 第四节 课题研究特色 本药方充分体现了中医学的辩证论治原则。其中灯盏细辛活血通络止 痛、祛风散寒为君;人参大补元气、复脉固脱,安神定志而止惊悸,配灯盏 细辛使活血通络不致太过而伤正,为臣药;地龙具有清热息风、通行经络之 效,善破血逐癖,可引方中诸药直达病所脉络。水蛭能软坚散结,使血络瘀 滞得行、气机调畅、邪去正安。冰片性微寒味辛,为开窍醒神、清热止痛之 上品,用为使药。全方共奏益气活血、化癖通络止痛之功。本复方疗效确切, 目前已经申报专利,公开号:CN101181327。 本复方将首次被开发为现代剂型?滴丸剂,采用固体分散技术制 备滴 丸。固体分散技术制备滴丸,可以使药物以分子、胶体或微晶状态均匀分散 于基质中,使药物总表面积增大,从而使溶出速率加快,吸收完全,提高了 生物利用度,因而剂量小,起效快,可达到高效、速效作用。同时,主药在 基质中分散均匀,剂量准确,不易水解,氧化,药物稳定性高,从而保证临 [23] 床用药的安全、有效、质量稳定、质量可控 。4第二章 益脉康滴丸的制备工艺研究 本课题中对灯盏细辛的纯化工艺,在部颁标准的基础上对野黄芩苷的碱 提酸沉工艺进行了工艺参数的优化,使野黄芩苷得到更有效的富集。在质量 标准中,除了传统的薄层鉴别以外,分别以野黄芩苷含量和人参皂苷 Rg1、 Re、Rb1 总含量为指标,对本制剂的有效成分含量进行控制,使制剂质量 得到保证。 5河南大学硕士学位论文 田帅华 第二章 益脉康滴丸的制备工艺研究 1 实验材料 1.1 仪器 LC-2010A高效液相色谱仪(日本岛津), CLASS-VP数据处理工作 站。AG135型电子 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 天平METTLER TOLEDO公司。101-2AB电热鼓风 干燥箱天津泰斯特仪器有限公司。N-1001S型旋转蒸发仪(上海爱朗仪器 有限公司)。pHB-8型笔式 pH计(上海虹益仪器仪表有限公司)。超声波 清洗器昆山市超声仪器有限公司。 1.2 材料与试剂 野黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所提供,供含量测定用,批号: 110842-200605);人参皂苷 Rg1、Re、Rb1对照品中国药品生物制品检定 所提供供含量测定用,批号分别为:110703-200424;110754-208>0421; 110704-200420;灯盏细辛 (购于开封县医药公司,经河南大学中药研究 所李钦教授鉴定为短葶飞蓬 Erigeron breviscapusVant. Hand. -Mazz干燥全 草,产地为贵州);人参(购于吉林省安图县二道镇,经河南大学中 药研究 所李钦教授鉴定为五加科植物人参 Panax ginseng C. A. Mey. 的干燥根及根 茎,产地为吉林);水蛭(购于禹州市钧发药材行,经河南大学中药研究所 李钦教授鉴定为水蛭科动物蚂蟥 Whitmania pigra Whitman 的干燥全体, 产地为广西);地龙(购于禹州市钧发药材行,经河南大学中药研究所李钦 教授鉴定为本品为钜蚓科动物参环毛蚓Pheretima aspergillum E. Perrier 的干燥全体,产地为广西); 乙腈(merck公司)、甲醇(天津四友精细 化工试剂厂)、四氢呋喃(天津四友精细化工试剂厂)均为色谱纯,乙酸乙 酯(天津市德恩化学试剂有限公司)为分析纯,水为重蒸水。 2 工艺路线的确定 处方由灯盏细辛、人参、地龙、水蛭、冰片五味药材组成,根据剂型特 点和对处方中药材主要活性成分的分析,确定工艺路线如下:灯盏细辛临床 上主要用于中风、冠心病等,主要含有野黄芩苷(又名灯盏乙素) 等黄酮类 6第二章 益脉康滴丸的制备工艺研究 [24,25] 成分,研究证明治疗心脑血管病的主要活性成分为野黄芩苷 ;因野黄芩 苷分子为连有葡萄糖醛酸结构的黄酮类化合物,易溶于醇、水,在酸水中沉 淀析出,故采用乙醇提取,酸化沉淀的方法提取纯化野黄芩苷,用正交试验 法对工艺进行优化。 研究表明:水蛭提取液呈一定的酸性,人参皂苷在酸性环境中不太稳定, [26] 两者共煎时人参皂苷含量下降 。所以采用人参单独提取的工艺。 人参主要含有多种人参皂苷等成分,主要药理作用为改善微循环、提高 2+ [27] 组织抗缺氧能力、抑制血小板聚集、Ca 拮抗作用、抗脑缺血 、保护脑损 [28] 伤等 。人参皂苷属四环三萜类化合物,常用稀醇提取,故采用正交试验 法对乙醇提取工艺进行优化。 地龙含地龙解热碱、蚯蚓素、氨基酸、微量元素等成分,临床主要用于 [29] 治疗中风半身不遂等,文献报道具有明显的抗血栓活性 ,地龙的有效化 学成分多为水溶性。地龙为动物药,重金属含量较高(《中国药典》2005 年版一部地龙项下,规定地龙含重金属不得过百万分之三十),且水提出膏 [30] 率高,结合生产实际需要,参考有关文献 ,地龙采用水煎后过滤浓缩, 重金属含量超标;采用水提醇沉法提取,则重金属含量均符合药典规定。故 地龙采用水提醇沉工艺,使重金属含量符合药典规定,同时也降低了出膏率。 水蛭主要含有蛋白质,新鲜水蛭唾液中含水蛭素、伪水蛭素、肝素等, 水蛭中还含有天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸等多种氨基酸,以及 Ba、Be、Bi、 [31] [32] Cd、Co等元素 。现代实验研究证明,水蛭具有明显的抗凝 和抗血栓 [33] 形成作用 。近年来通过对水蛭不同提取方法的研究,发现采用传统的水 煎醇沉法得到的提取物抗凝和抗栓作用均较好,有关动物实验也证明了这一 [34-37] 点 ,结合生产实际,水蛭采用水提醇沉的提取工艺。水蛭、地龙均为动 物药,根据有关文献,水蛭、地龙采用水提醇沉的提取工艺。 7河南大学硕士学位论文 田帅华 3 提取、纯化工艺研究 3.1 灯盏细辛的提取、纯化工艺研究 灯盏细辛的主要有效成分为黄酮类成分,其中含量最高的是野黄芩苷, 野黄芩苷易溶于醇、易溶于碱水,在酸水中沉淀析出,根据野黄芩苷的理化 性质,灯盏细辛采用乙醇提取,碱提酸沉工艺路线。 3.1.1 野黄芩苷含量测定方法的建立 参照《中国药典》2005年版一部灯盏细辛项下的含量测定方法,结合 预实验结果,方法内容如下: 3.1.1.1 色谱条件 Thermo Hypersil Gold C18柱250×4.6 mm,5?m,柱温为 30?,流动 [38] 相为乙腈-水-四氢呋喃-磷酸(15:85:1.5:0.1),流速 0.8 mL/min ,检 测波长 335 nm。 3.1.1.2 对照品溶液的制备 精密称取野黄芩苷对照品 2.18 mg,置 10 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀 释至刻度,摇匀,即得含野黄芩苷 0.218 mg/mL的对照品溶液。 3.1.1.3 标准曲线的绘制 分别精密吸取对照品溶液 1、3、5、7、9、11?L进样,按上述色谱条 件测定。以进样量 X(?g)为横坐标, 峰面积值 Y为纵坐标,绘制工作曲 线,得回归方程为 y 4026505.44 x - 13136.28, r0.9999,线性范围 0.218 ~ 2.398?g。 3.1.2 灯盏细辛乙醇回流条件的选择 根据野黄芩苷的理化性质和文献报道,选择了乙醇浓度、回流次 数、回 [39] 流时间、加醇量四个因素 ,每因素又各选三水平进行正交试验 ,其试验 设计和结果见表 2-1 。8第二章 益脉康滴丸的制备工艺研究 表 2-1 乙醇回流条件因素与水平表 Tab? 2-1 Factors and levels of ethanol refluxing condition 因素 乙醇浓度 加醇量倍 回流时间h C 回流次数 水平 A B D 1 45% 6 0.5 1 2 60% 8 1.0 2 3 75% 10 1.5 3 试验设计 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 和结果 4 分别称取灯盏细辛 30g,9份,按 L(3)正交表安排实验,合并提取 9 液,滤过,回收乙醇至无醇味,加水定容至 200ml,摇匀,用乙酸乙酯振摇 提取 5次,每次 100ml,水溶液部分浓缩并定容至 50ml,精密吸取 2ml置 50ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,用 0.45?m微孔滤膜滤过, 精密吸 取上述各溶液 5?l 入高效液相色谱仪中,测定。计算含量,结果 见表 2-2 表2-2 正交试验设计和结果 Tab? 2-2 Design of orthogonal experiment and results 试验 因 素 野黄芩苷 号 A B C D 含量(%) 1 1 1 1 1 0.44802 1 2 2 2 0.88533 1 3 3 3 0.86214 2 1 2 3 0.69045 2 2 3 1 0.62446 2 3 1 2 0.83257 3 1 3 2 0.81988 3 2 1 3 1.02519 3 3 2 1 0.6806 野? 2.1954 1.9582 2.3056 1.7530黄? 2.1473 2.5348 2.2563 2.5376芩? 2.5265 2.3752 2.3063 2.5776苷K1 0.7318 0.6527 0.7685 0.5843含K2 0.7158 0.8449 0.7521 0.8459量K3 0.8418 0.7917 0.7688 0.8592R 0.1260 0.1922 0.0167 0.2749 从直观结果看,四个因素对试验结果影响的大小依次为 DBAC 。 下 面再看方差分析结果,结果见表 2-3。 9河南大学硕士学位论文 田帅华 表2-3 方差分析表 Tab? 2-3 Analysis of variance table 因素 离差平方和 自由度 F 显著性 A 0.028 2 28.000 * B 0.059 2 59.000 * C 0.001 2 1.000D 0.144 2 144.000 ** 误差 0.00 2 总和 0.232 10注:**表示极显著性差异,*表示显著性差异 方差分析的结果表明,因素 D对试验结果影响最大,因素 A、B对试 验结果也有一定影响,结合生产实际选用 A B C D即加 8倍量 75%乙醇, 3 2 3 3 回流提取 3次,每次 1.5h为最佳提取工艺条件。 3.1.3 纯化工艺考察 野黄芩苷系黄酮苷类化合物,具有酚羟基,显酸性,易溶于碱水,难溶 于酸水,在酸水中沉淀析出。根据野黄芩苷的理化性质,以野黄芩苷总含量 ?g为指标,采用正交试验法,对碱提 pH、酸沉 pH、保温温度、保温时间 进行考查。 根据野黄芩苷的理化性质和文献报道,选择碱提 pH、酸沉 pH、保温 温度、保温时间四个因素 ,每因素又各选三水平进行正交试验 ,其试验设 计和结果见表 2-4 。 表2-4 纯化工艺实验因素与水平表 Tab? 2-4 Factors and levels of purification technology table 因素 碱提pH 酸沉pH 保温温度/? 保温时间/min 水平 A B C D 1 5.5 2.0 35 15 2 6.5 2.5 45 20 3 7.5 3.0 55 25 10第二章 益脉康滴丸的制备工艺研究 4 每个实验号取相当于 30g 灯盏细辛的浓缩液,按照 L(3)正交表安排 9 试验 ,滤过,滤液按正交表分别用 10%氢氧化钠溶液调节碱提 pH值、用 20%硫酸溶液调节酸沉 pH,保温规定温度和时间,静置半小时,析出棕色 沉淀物,倾取上层液,静置 20h后,析出棕黄色沉淀物,分取棕色沉淀物和 [40] 棕黄色沉淀物,水洗至中性,低温干燥,备用 。取沉淀物适量,加甲醇溶 解并定容。用 HPLC法测定沉淀物中野黄芩苷含量。含量结果见 表 2-5。 表2-5 正交试验设计和结果 Tab? 2-5 Design of orthogonal experiment and results 试 浸膏中 因 素 野黄芩 验 出膏率 野黄芩 苷总含 号 (mg) 苷含量 A B C D 量mg % 1 1 1 1 1 862.9 21.66 186.9 2 1 2 2 2 879.9 20.73 182.4 3 1 3 3 3 867.5 22.04 191.2 4 2 1 2 3 823.9 24.64 203.0 5 2 2 3 1 887.6 24.73 219.5 6 2 3 1 2 878.8 24.50 215.3 7 3 1 3 2 810.6 33.31 270.0 8 3 2 1 3 834.8 29.54 246.6 9 3 3 2 1 851.1 27.54 234.4 野 ? 560.5 660.0 648.8 640.8 黄 ? 637.8 648.5 619.8 667.7 芩 ? 751.0 640.9 680.7 640.8 苷 K1 186.8 220.0 216.3 213.6 总 K2 212.6 216.2 206.6 222.6 含 K3 250.3 213.6 226.9 213.6 量 R 63.5 6.40 20.3 8.97 对上述结果进行方差分析,结果见表 2-6。11河南大学硕士学位论文 田帅华 表2-6 灯盏细辛碱提酸沉条件方差分析表 Tab? 2-6 Variance analysis table of alkali-extract and acid-stagnation conditions 因素 偏差平方和 自由度 F 显著性 A 6120.0 2 100.4 ** B 60.97 2 1.000C 618.60 2 10.15D 160.80 2 2.64误差 60.97 2注:**表示极显著性差异方差分析的结果表明 ,因素 A对试验结果影响很大,我们结合生产 实际选用 A B C D。即:碱提 pH7.5,酸沉 pH 2.0,保温温度 55?,保温 3 1 3 2 20min为最佳生产工艺条件。 3.2 人参提取工艺研究 3.2.1 对照品溶液的制备 分别精密称取人参皂 Rg1对照品 1.21mg,人参皂苷 Re对照品 1.05mg, 人参皂苷 Rb1对照品 1.19mg,置同一 5mL容量瓶中,加甲醇溶解并定容。 制成每 1mL分别含 0.242 mg、0.210 mg和 0.238 mg的混合溶液,摇匀,即 得。 3.2.2 工作曲线的绘制 分别精密吸取上述人参皂苷混合对照品溶液 1、3、5、7、9、11?L溶 液, 注入液相色谱器仪中,测定色谱峰面积,测定结果见表 2-7。 12第二章 益脉康滴丸的制备工艺研究 表 2-7 人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Re、人参皂苷 Rb1的液相色谱数据 Tab? 2-7 HPLC data of ginsenoside Rg1、ginsenoside Re、ginsenoside Rb1 对照品名称 对照品进样量μL μg 色谱峰面积 1.0 1.21 453820 人 3.0 2.42 903495 参 5.0 3.63 1359690 皂 7.0 4.84 1798014 苷 9.0 6.05 2232611 Rg1 11.0 7.26 2687301 1.0 1.05 265085 人 3.0 2.10 527817 参 5.0 3.15 798832 皂 7.0 4.20 1063584 苷 9.0 5.25 1317563 Re 11.0 6.30 1568406 1.0 1.19 198265 人 3.0 2.38 392666 参 5.0 3.57 583014 皂 7.0 4.76 782619 苷 9.0 5.95 974425 Rb1 11.0 7.14 1165076 人参皂苷 Rg 1、人参皂苷 Re、人参皂苷 Rb1对照品分别以进样量为横 坐标,色谱峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,经线性回归,回归方程见表 2-8 。 表2-8人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Re、人参皂苷 Rb1的工作曲线 Tab? 2-8 Calibration curve of ginsenoside Rg1、ginsenoside Re、ginsenoside Rb1 对照品名称 工 作 曲 线 相关系数r 线 形 范 围(μg) 人参皂苷 Rg1 y 368195x + 13181.0 0.9999 1.21~7.26 人参皂苷 Re y 248996x + 8488.3 0.9999 1.05~6.30 人参皂苷 Rb1 y 162760x + 4783.8 0.9999 1.19~7.14 结果提示, 人参皂苷 Rg 1、人参皂苷 Re、人参皂苷 Rb1对照品在表 中的进样量范围内线性关系良好。 13河南大学硕士学位论文 田帅华 3.2.3乙醇回流条件的选择 根据实际情况,选择了乙醇浓度、加醇量、回流时间、回流次数四个因 [41] 素 ,每因素又各选三水平进行正交试验 ,其试验设计和结果见表 2-9 。 表2-9 实验因素与水平表 Tab? 2-9 Factors and levels table 因素 乙醇浓度 加醇量倍 回流时间h 回流次数 水平 A B C D 1 75% 6 1.0 1 2 85% 8 1.5 2 3 95% 10 2.0 3 4 采用 L9(3)正交表安排试验 ,每个实验号均称取人参 30g ,按正交 表分别加不同浓度的乙醇,回流,滤过,合并滤液,浓缩,烘干,三氯甲烷 脱脂,水饱和正丁醇超声提取,分别测定人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Re和人 参皂苷 Rb1积分面积,计算含量。吸取上述各溶液 10?l 入高效液相色谱仪 中,以以水为流动相 A,乙腈为流动相 B,按表 2-10进行梯度洗 脱;检测 波长 203 nm。含量及出膏量结果见表 2-11。 表 2-10 人参梯度洗脱程序表 Tab? 2-10 Ginseng gradient elution program table 时间min 流动相A(%) 流动相B(%) 0~35 81 19 35~55 81?71 19?29 55~70 71 29 70~120 71?60 29?40 14第二章 益脉康滴丸的制备工艺研究 表2-11 正交试验设计和结果 Tab? 2-11 Design of orthogonal experiment and results 试 因 素 人参皂苷 出 膏 验 Rg1、Re、Rb1 量(g) 号 A B C D 总含量(%)1 1 1 1 1 0.5403 4.7995 2 1 2 2 2 1.3074 9.1418 3 1 3 3 3 1.2348 10.4817 4 2 1 2 3 1.1503 8.8271 5 2 2 3 1 0.4252 2.9942 6 2 3 1 2 0.8781 6.9709 7 3 1 3 2 0.6095 4.5388 8 3 2 1 3 0.6784 4.7452 9 3 3 2 1 0.7634 5.5764 人? 3.0825 2.3001 2.0968 1.7289 参? 2.4536 2.4110 3.2211 2.7950 皂? 2.0513 2.8763 2.2695 3.0635 苷K1 1.0275 0.7667 0.6989 0.5763 含K2 0.8179 0.8037 1.0737 0.9317 量K3 0.6838 0.9588 0.7565 1.0212 R 0.3437 0.1921 0.3172 0.0895 出? 24.4230 18.1654 16.5156 13.3701 膏? 18.7922 16.8810 20.8579 20.6515 量? 14.8604 23.0290 18.0147 24.0540K1 8.1410 6.0551 5.5052 4.4567K2 6.2641 5.6270 6.9526 6.8838K3 4.9535 7.6763 6.0049 8.0180 R 3.1875 2.0493 1.4474 3.5613 对上述结果进行方差分析,结果见表 2-12、2-13 。15河南大学 硕士学位论文 田帅华 表2-12 人参皂苷含量方差分析表 Tab? 2-12 Variance analysis table of ginsenoside content 因素 偏差平方和 自由度 F 显著性 A 0.180 2 2.903B 0.062 2 1.000C 0.244 2 3.935D 0.332 2 5.355误差 0.06 2 总和 0.878 10方差分析结果表明,因素 D对人参皂苷的提出影 响较大 ,因素 A、C 也有一定影响。B列极差最小,作为误差列。 根据上表结果,提取人参皂苷的最佳方法是 A B C D,即加