大剂量X射线照射后淋巴滤泡的形成

大剂量X射线照射后淋巴滤泡的形成 大剂量x射线照射后淋巴滤泡的形成 徐玉东刘丽谢遵江马月秋张云芳杨玉凤 【摘要】目的:观察用500radX线全身照射后小鼠胭窝淋巴结淋巴滤泡的形成.方 法:本实验用光镜,透射电镜 方法及三维重塑技术.结果:X线照射后,淋巴细胞发生凋亡和坏死,淋巴滤泡被破 坏.之后,淋巴细胞逐渐增多, 从照射后第5天开始,出现淋巴滤泡的再构筑;第10天淋巴滤泡数量增多并且出现 生发中心;到照射后第l4天,淋 巴滤泡的数量正常.此外,滤泡树突状细胞的超微结构没有发生改变.结论:500rad的x线可以破坏淋巴滤泡,受 破坏的滤泡经过一定时期可以重新再聚集.再构筑的滤泡不是新产生的而是受损 滤泡再生形成的.滤泡的再构 筑与有无生发中心无关. 【关键词】淋巴滤泡;滤泡树突状细胞;淋巴细胞;x射线 FormationofLymphFolliclesafterI-rlgh——DoseX——Irradiation XuYudong,LiuLi,X/eZunj/ang.et. (DepartmentofAnatomy,HarbinMedicalUniversity,Harbin150086) 【Abstracts】 Objective:Toobservethedevelopmentoflymphfolliclesinthemousepopliteallymphnodea fter500radX—irra. diationdamage.Methods:b出microscope,electronmicroscopeandthree— dimensionalreconstructionmethodwereusedinthe experiment.Results:AfterX— irradiation,therewerewitheredandnecroticlymphocytes,andlymphfollicleswereseverely de- s~yed]hence,lymphocytesincreasedgradually.at5days,lymphfollicleswerereconstructed ;lymphfolliclesincmas~andgenni- nalcentersaplpat10days;by14days,atotalnumberofreconstructedfolliclesreturnedtonor ma1.Moreover,therewasriot changeaboutultrastmctureoffolliculardendriticcells.Conclusion:Thelymphfolliclesmay bedestmiedafter500radX—irradi- ation.butdestroyedlymphfolliclescanbereconstructedaftersonledays.Reconstructedfo~c lesarenotnewfolliclesbutI黜0ven damagedfollicles.Reconstructionoffollicleshavenothingtodowiththegerminalcenter. 【KeyWords】Lymphfollicles;Folliculardendriticcells;Lymphocytes;X—irradiation 淋巴结内的淋巴滤泡主要是由淋巴细胞和滤泡 树突细胞构成的,它们可以包括或不包括生发中心. 滤泡树突细胞具有趋化,诱导B淋巴细胞聚集形成 淋巴滤泡和获取,保持抗原一抗体复合物,维持免疫 记忆诱导B淋巴细胞分裂,分化形成生发中心的能 力].DeBmyn_3曾经报导过用800rad和600rad 的X线给兔和大鼠进行全身照射破坏淋巴滤泡的 导致大约3周的滤泡缺如期,之后会有新 主要成分, 的滤泡出现,但它们没有发生中心.而有学者则认 为在剂量x射线照射后生发中心也有恢复的趋势. x线照射后淋巴滤泡会发生怎样的动态变化,在这 个变化的过程中,重新出现的滤泡是新形成的还是 受损的滤泡重新聚集而成的,它们是否具有生发中 心.已经证实,在未照射的正常小鼠胭窝淋巴结中 的滤泡只有一部分具有生发中心,那么,大剂量x 线照射后不具有生发中心的滤泡是否有再构筑,就 作者单位:哈尔滨医科大学解剖学教研室哈尔滨150086 I1【-厂一 这些问 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 ,我们 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 了该实验. 1材料和方法 给予8周龄雄性昆明小鼠55只.分为两组,对 照组取10只动物于实验0日取出胭窝淋巴结,5只 做苏木素伊红染色光镜观察淋巴滤泡.实验组:分 别在x线全身照射后1,2,5,10,14天分别处死10 只动物并取出胭窝淋巴结,每组中5只做苏木素伊 红染色观察淋巴滤泡,另5只用电子染液染色电镜 观察滤泡树突细胞和淋巴细胞. x线强度为50rad/min,共照射10rain,射线总量 为500rad.取出的胭窝淋巴结,15%福尔马林固定, 酒精逐级脱水,二甲苯透明,石蜡包埋.连续半薄切 片,将切片进行苏木素伊红染色,显示淋巴滤泡.利 用连续切片三维重塑技术,统计出淋巴滤泡总数. 用于超微结构观察的淋巴结,经2.5%戊二醛和1% 锇酸双重固定,丙酮逐级脱水,树脂包埋.超薄切 片,醋酸铀和柠檬酸双染后,透射电镜观察,摄片. 2结果 12鲤剖与~——2002年第7卷第1/2期 JournalofAnatomyandClinics2002,Vo1.7No.1/2 2.1对照组 平均每个淋巴结有11.4个淋巴滤泡,一些淋巴 滤泡具有生发中心(图1). 2.2实验组 2.2.1x线照射后1天:淋巴滤泡遭到破坏,淋巴 滤泡的形态结构已经消失,淋巴结内的淋巴细胞明 显减少且散在分布,在它们中间可见到变得缩小,致 密的淋巴细胞(图2).其中大多数淋巴细胞发生凋 亡,它们的细胞核的染色质凝聚,重排,使细胞核呈 不同的形态.少数淋巴细胞发生坏死.它们的细胞 膜破裂失去完整性,胞浆外逸,染色质结絮,染色质 碎片周围无质膜包绕. X线照射后滤泡树突细胞没有发生明显改变. 电镜观察,细胞核的染色质没有凝聚,移动,结絮等 变化,核仁清晰.细胞膜完整,胞浆内有丰富的线粒 体,核糖体,内质网围绕在核的周围.滤泡树突细胞 的突起仍很丰富,覆盖了凋亡的淋巴细胞和周围的 区域,与淋巴细胞相接触.我们还观察到,在滤泡树 突细胞的树状突起和细胞核周围的胞浆之间,突起 和突起之间仍存在紧密连接和中间连接. 2.2.2x线照射后2天:正常的淋巴细胞增多,且 分布紧密,观察不到凋亡的淋巴细胞.观察不到淋 巴滤泡形成的迹象(图3).滤泡树突细胞状态良 好.细胞的突起伸人淋巴细胞之间并与淋巴细胞相 接触.淋巴细胞运动趋势明显,可见明显的伪足,且 细胞形态多样.可见到从突起上脱落下来的免疫复 合物小体,该小体可被B细胞吞噬. 2.2.3x线照射后5天:开始有小淋巴细胞聚集, 淋巴滤泡出现,但滤泡体积很小而且数量少,平均为 4.4个,尚无生发中心.滤泡树突细胞的结构,状态 与正常状态一致(图4). 2.2.4X线照射后10天:淋巴滤泡数量增多,体积 变大,平均为7.7个,出现生发中心,但它们的数量 尚未达到正常值(图5). 2.2.5x线照射后14天:淋巴滤泡形成良好达到 11.7个,数量与对照组无统计学差异.次级淋巴滤 泡中可见明显的生发中心(图6). 3讨论 大剂量x线照射后,滤泡受破坏,主要是x线 破坏构成滤泡的淋巴细胞的DNA结构,使淋巴细胞 发生了凋亡的结果j,而有的淋巴细胞发生坏死,不 发生凋亡.这可能是因为死亡类型(凋亡和坏死)不 同决定于线粒体的改变.有实验证明,当凋亡激发 I]圜目I__百一一——广一_ 因子刺激线粒体,结果有两种,一是使线粒体外膜破 裂,电化学梯度破坏和ATP减少使细胞坏死.一是 线粒体外膜通透性增加,释放细胞色素C,激活 caspases蛋白溶解酶,产生细胞凋亡. 此后,循环的淋巴细胞不断经毛细血管后微静 脉进入淋巴结并安家在淋巴滤泡,使淋巴结内的淋 巴细胞逐渐增多.Horie等人_5给小鼠局部注射大 剂量的菌葡聚糖硫酸盐,破坏了滤泡树突细胞的聚 集B淋巴细胞的能力,致使淋巴滤泡消失.经观察 3周内并没有淋巴滤泡形成,3周后,损伤的淋巴滤 可见通过新的滤泡树突细 泡才逐渐构筑恢复正常. 胞的再聚集,使淋巴滤泡和生发中心恢复,最快也只 能在3周后才使淋巴滤泡开始重建.在本实验中, 我们发现大剂量x线照射后滤泡树突细胞的超微 结构并无明显改变,并且受损的淋巴滤泡2周内就 已恢复正常并且出现生发中心.这说明了,经大剂 量X线照射后,滤泡树突状细胞对大剂量x线的抵 抗力很强.滤泡树突细胞吸引B淋巴细胞,形成淋 巴滤泡,获取并保持抗原一抗体复合物,维持免疫记 忆形成生发中心的能力没有丧失.另外,这也说明 本实验再构筑的淋巴滤泡并不是新的滤泡树突细胞 重新聚集而新生成的滤泡,而是通过受损滤泡内原 有的滤泡树突状细胞吸引B淋巴细胞再生形成的. 我们还观察到照射前小鼠的胭窝淋巴结平均有 11.4个滤泡,但只有少数生发中心,大剂量x线照 射后,滤泡又都重新构筑起来,数量与对照组无统计 学差异.这说明不管滤泡是否有生发中心,滤泡都 有再构筑的过程,滤泡的再构筑与是否拥有生发中 心无关. (本文图1,6见封3) 参考文献 [1]TewJG,KoscoMH,BurtonGF.Fu?iculardendriticcellsas accessorycells.ImmunolRev.1990.117:185,186. [2]DiikstraC.D,VandenBerg,T.K.111ef0lliculardendritic cell:Possibleregulatoryrolesofasociatedmolecules.Reslm— muno1.1991.142:227,229. [3]DeBmyn.,I1heeffectofX—raysonthelymphaticnodule, threferencetothedoseandrelativesensitivitiesofdifferent species.AnatBee.1988.101:373,374. [4]J.JohnCohen.Apoptosis.ImmunologyToday,1993,14:126, 130. [5]HorieK,HoshiH,HamanoK,eta1.Morphologicalchan in出emollsepopliteallymphnodeafterlocalinjectionofdex— transulfate.T0hokuJExpMed,1994,172:175,179. (2001—04-20收稿) 徐玉东等?大剂量X射线照射后淋巴滤泡的形成(正丈见11,12页) 图1正常的淋巴结.F:淋巴滤泡 图2X线照射后1天淋巴结内淋巴滤泡的正常结构消失.淋巴细胞明显减少. 图3X线照射后2天淋巴结内正常的淋巴细胞增多.但是没有淋巴滤泡形成. 图4X线照射后5天淋巴结内淋巴滤泡开始出现.但是体积小.数量少.F:淋巴滤泡 图5X线照射后10天内淋巴滤泡体积变大.数量增多.但未达到正常值.G:生发中心 图6X线照射后14天淋巴结内淋巴滤泡形态,数量达到正常.G:生发中心