刚地弓形虫

刚地弓形虫 赛润 ELISA classic 刚地弓形虫 IgG/IgM 目录 1.用途 2.诊断意义 3.赛润 ELISA classic 检测 工程第三方检测合同工程防雷检测合同植筋拉拔检测方案传感器技术课后答案检测机构通用要求培训 原理 4.试剂盒组成 5.检测所需物质，试剂盒未提供 6.储存和稳定性 7.赛润 ELISA classic的检验步骤 7.1注意事项 7.2检验前的准备工作和储存 7.3试剂盒反应试剂的准备 7.4检测程序概要 7.5检测过程 8.检测结果评估 8.1 4PL单点定量法 8.2检验有效性 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 8.3计算赛润 ELISA classic刚地弓形虫IgG/IgM（定量） 8.4检测结果分析 9. 性能特性 9.1重复性 9.2敏感性和特异性 10.警告 10.1警告和安全措施 10.2废料处理 11.参考文献 03/07-1 1 赛润 ELISA classic 刚地弓形虫 IgG/IgM试剂盒 酶联免疫法测定人体抗体（IgG/IgM） - 只限用于体外诊断- IgG 试剂盒 (定量) 编号: ESR110G IgM 试剂盒 (定量) 编号: ESR110M 检测评估标准: Dade Behring BEP ? III / BEP ? 2000, DSX, 手动操作 1. 用途 赛润 ELISA classic 刚地弓形虫IgG/IgM试剂盒主要用于定性和/或定量检测人血清或血浆中的抗刚地弓形虫抗体。IgG-ELISA试剂盒用于确定血清学状态及诊断 是否近期曾受感染；而IgM- ELISA试剂盒则用于诊断刚地弓形虫的急性感染。 2.诊断意义 刚地弓形虫是一种真核生物病原体，属于孢子虫纲。这种必须寄生在细胞内的寄 生虫散播在世界各地，其孢囊繁殖的特点是能够在有性繁殖（只有在最终宿主猫 科动物中才会进行有性繁殖）和无性繁殖之间转化。 刚地弓形虫经口进入体内（如食用被污染的食物）后，会穿透肠道进入网状内皮 系统，它能通过血液传播，感染宿主体内许多不同的器官和组织。 刚地弓形虫在正常人群中的传播与年龄有密切的关系，50岁的人群中血清阳性率接近50%，年龄每增长10岁，弓形虫抗体的血清普及率就会以10%的幅度增加。环境和营养因素也有很重要的意义，可以对弓形虫的血清普及率产生显著的影响。 刚地弓形虫感染后，大约50%的人没有临床症状，而另外50%的感染者经过1-3周的潜伏期后，只有一些非特异性症状如低烧、疲乏、头痛、肌肉和关节痛；少 数病人会出现高烧（至39?）和颈部淋巴结肿大。据报道儿童和未成年人感染后 有1%的病人还会出现并发症如心肌炎、脑膜炎或肺炎等。 2 患者康复后，刚地弓形虫细胞会在感染组织中持续存在并形成胞囊，能阻挡机体 免疫系统的攻击。这就是通常所说的潜伏期，在免疫力正常的宿主体内不被激活。 或许由于抗原的存在对机体产生长期的刺激，使机体获得终生免疫力。 孕妇的弓形虫感染筛查是有重大意义的。有关研究表明：刚地弓形虫通过胎盘的 传播在怀孕的各个阶段都有可能发生，但产前传播和感染率的高低与怀孕的不同 阶段有密切关系。 1. 第1-3个月 17% （最常见的是流产, 很少对胎儿造成严重伤害） 2. 第4-6个月 24% （会对胎儿造成中级或严重的伤害） 3. 第7-9个月 64% （会对胎儿造成轻度伤害或晚期对胎儿有致命性伤害） 初期感染但血清学检测呈阴性的孕妇，通过胎盘传播感染胎儿的风险较低，据报 道在德国新生儿的感染率为2-7‰。 仅有1-3%的被感染新生儿会立即出现弓形虫病的临床症状，但多达80%的无症状（被感染的）新生儿会在后期受到伤害并有严重的临床表现。 母亲初期感染但经化学治疗康复后，传播给胎儿的风险降低了75%。 机体出现免疫抑制后，潜伏期感染会被激活。在艾滋病人群中，弓形虫脑炎已成 为最关键的、也是最终的致死病因。甚至近期有报道显示：弓形虫感染会随免疫 抑制的出现而相继发生。 3.赛润ELISA classic - 检验原理 用抗原包被微量板孔，制成固相载体。加患者血清到板孔中，其所含的抗体特异 性地与固相载体中现存抗原结合，形成免疫复合物。除去多余物质后，加入结合了碱性磷酸酶的IgG、IgA或IgM抗体，使之与上述免疫复合物反应。洗板，除 去多余的结合物，加入底物（对硝基苯磷酸盐）。该反应产生有颜色产物，颜色强 度与特异性抗体含量成正比。 3 4.试剂盒的组成 IgG试剂盒 IgM试剂盒 试验成分 数量 / 容积 微孔条（此微孔条可以掰开单独使用，每条有8孔，共96孔，已经包被了抗原） 12 12 1个微孔条框架 包被的抗原为灭活抗原 标准血清（立即可用） 人血清溶于含蛋白的磷酸盐缓冲液；抗HIV抗体、抗乙肝病毒（HBV）表面抗原和抗丙肝病毒（HCV）抗2×2毫升 2×2毫升 体均为阴性； 防腐剂：< 0.1%叠氮化钠 染色剂：紫红色O 阴性质控血清（立即可用） 人血清溶于含蛋白的磷酸盐缓冲液；抗HIV抗体、抗乙肝病毒（HBV）表面抗原和抗丙肝病毒（HCV）抗1×2毫升 1×2毫升 体均为阴性； 防腐剂：< 0.1%叠氮化钠 染色剂：里沙明绿 V 酶标记的抗人IgG, IgA, IgM （立即可用） 羊抗人IgG, IgA, IgM（多克隆），碱性磷酸脂酶，以蛋 白封闭液封闭。 13毫升 13毫升 防腐剂: 0.01%g甲基异噻唑啉酮 0.01%溴化硝基二垩烷 浓缩洗液（可稀释至1000毫升） 氯化钠，含吐温20和30mM Tris 1×33.3毫升 1×33.3毫升 防腐剂：< 0.1%叠氮化钠 稀释缓冲液 磷酸盐缓冲液，内含蛋白和吐温20 2×50毫升 2×50毫升 防腐剂：< 0.1%叠氮化钠 0.01克/升的溴酚蓝钠盐 终止液 15毫升 15毫升 1.2N 氢氧化钠 底物（立即可用） 邻硝基苯磷酸盐，不含其它溶剂的缓冲液 防腐剂：< 0.1%的叠氮化钠 13毫升 13毫升 （瓶子未盖好底物可能会轻微变黄，但不会影响其质 量） 带有标准曲线和评估表的质量控制认证文件 1 1 （抗体以IU/毫升或U/毫升计量） 4 5.其它检测所需物质 - 普通实验室所需的仪器装置 - IgM检测：特别赛润对照抗原类风湿因子Rf－吸附剂（Rf－吸附剂／对照抗原； 产品编号T200/20ml） - 分光光度计，波长405纳米，建议参考波长范围620纳米- 690纳米（例如 650纳米） - 37?温箱 - 湿盒 - 蒸馏水。 6.储存及稳定性 试剂 储存 稳定性 开封后放在2-8?装有干燥剂的密封铝箔微孔条（抗原） 4星期 袋中。 有效期内； 质控血清 / 标准血清 开封后保存于2-8?。 24个月 立即可用的溶液于2-8?储存。 有效期内 酶标记抗体 避免污染（使用无菌针头）。 24个月 18个月 开启后于2-8?储存。 稀释缓冲液 有絮状时丢掉 有效期内 未开封 36个月 浓缩液开封后保存于2-8?。 工作液在2-8?。 有效期内 洗涤液 工作液在室温下。 2星期 盛过工作液的瓶子应按常规方法清洗，并1星期 丢弃混浊溶液。 2-8?储存，避光。 避免污染（使用无菌针头）。当溶液变为黄有效期内 底物 色时应予以丢弃（水作空白，吸光度大于24个月 0.25时）。 终止液 开封后保存于室温下。 有效期内 5 7.赛润 ELISA classic的检验步骤 7.1注意事项 只有全部使用赛润 ELISA classic试剂才能保证检测效果，因为所有试剂都是有关联的，不能混用其他制造商的产品。尤其是标准血清，对照血清以及酶标记物， 必须使用试剂盒配备的，不要使用其它批号产品。稀释缓冲液，洗液，终止液和 底物溶液可用于所有赛润 ELISA classic试剂盒。 未开封的情况下，如果保存于2-8?，ELISA classic试剂盒内所有试剂均在标定的有效期内有效。详细的稳定性和储存资料在“6. 储存及稳定性”内将加以详述。 每一种试剂都是经过校准以保证最佳的检测结果。这些试剂如果经过稀释或改动 都会导致检测的敏感度的降低。 在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发 和污染，试剂避免受到微生物的污染，因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的 结果。 如果铝袋破损或者已开启装有干燥剂的铝袋而未以夹子封紧的，则不要继续使用 微孔条。 开始试验前，将所有试剂置于室温。 从试剂管中吸取试剂的时候，应注意使用无菌技术以防污染。为避免假阳性结果，吸加酶结合物时，吸嘴应确保不接触或喷洒于小孔的顶避，注意不要盖错瓶盖或 6 管盖。 试验结果的可重复性依赖于充分混合试剂。使用前振荡装有对照血清的小管和所 有稀释过的溶液（例如使用混合器）。 小心吸取试剂并严格遵守给定的孵育时间和温度。请注意在吸取标本 / 对照血清，酶结合物或底物时，第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果太大， 将会导致不同的 “预孵育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。 只有严格遵守赛润ELISA classic试剂的试验说明才会得到最佳的检测结果。 如果实验中未严格遵守控制质量控制认证文件上的有效性特异准则，则试验结果无效。 洗涤不充分将影响试验结果： 应该小心进行洗涤。洗涤步骤应遵守相关洗涤器（平底孔，孔直径7毫米，深10.9毫米）指导 手册 华为质量管理手册 下载焊接手册下载团建手册下载团建手册下载ld手册下载 进行，所有的孔内均应加入相同体积的洗涤缓冲液。洗涤结束时， 应将微孔板倒扣于纸巾上并轻轻敲打，以确保所有孔内均无洗涤缓冲液。避免产 生泡沫！如果使用自动洗板机，注意正确操作。 7.2检验前的准备工作和储存 为避免干扰结果，高血脂的，溶血的，或污染的血清不要用于检测。 样品不应加热灭活。 7 7.2.1样品准备 赛润 ELISA classic 刚地弓形虫 IgG 开始试验前，患者的待测样品必须以稀释缓冲液稀释如下（V1+V2）： V1+V2=1+100 加 10微升 患者待测样品 于 1000微升 稀释缓冲液 稀释后及加入微孔板前，样品必须充分混合。 赛润 ELISA classic 刚地弓形虫 IgM 类风湿因子抗体是IgM的自体抗体，可与IgM免疫复合物结合。非特异性IgM抗体（类风湿因子）的存在将导致IgM检测的假阳性结果。另外，也存在弱结合 的病原体特异性IgM抗体被强结合的IgG抗体取代的可能性。在这种情况下，IgM的检测将得到假阴性的结果。因此，在进行IgM检测前应用类风湿因子吸附剂对 血清作预处理。 Rf（产品编号T200, 20ml）不仅包含抗人IgG抗体，还含有一定量的对照抗原。类风湿因子和抗体可识别宿主细胞的膜成份，并与之结 合。不必进行微量孔内覆有对照抗原的平行试验。 在进行以下SERION ELISA classic IgM检测时，此类RF—吸附剂需作为附加试剂 另行购买: 巨细胞，单纯疱疹病毒，麻疹，腮腺炎，风疹病毒，刚地弓形虫，带状疱疹病毒 首先应该使用稀释缓冲液(V2)对类风湿因子吸附剂(Rf吸附剂/对照抗原)(V1)进行如下稀释： 8 V1+V2=1+4 加 200微升 Rf-吸附剂/对照抗原 于 800微升 稀释缓冲液中 然后将患者的待测样品(V1)在此Rf稀释缓冲液(V3)中进行稀释： V1+V3=1+100 加 10微升 患者待测样品 于 1000微升 Rf稀释缓冲液中 7.2.2样品储存 密封的患者样品可在冰箱中2-8?保存7天。? -20?可保存更久。 避免样品反复冻融。 已稀释的样品可在2-8 ?下保存一星期。 试剂盒反应试剂的准备 7.3.1 微孔条 微孔条置于一框架内，并与干燥剂一同封于铝袋之中。应将不需要的微孔条取下 并重新放入铝袋。将袋口折叠2-3次，并以夹子夹紧，确保铝袋的密封性。 7.3.2 对照血清/标准血清 对照和标准血清立即可用，不必进一步稀释。试验时，可直接使用。 对于每次试验和每批检测体系，无论使用的微量板数目的多少，均应包括阴性阳 性对照孔。界定对照应作双份。如果是定量试验，标准血清也应作双份。 9 不要用RF吸附剂处理对照血清！ 7.3.3 抗人 IgG, IgA 或IgM抗体稀释液，用 AP标记（即用） 禁止将不同试剂盒的酶标抗体混合。同一试剂盒才能具最佳检测效果。 7.3.4 洗液 以1：30稀释浓缩洗涤缓冲液（V1）至终体积V2。 例如： 浓缩缓冲液（V1） 终体积（V2） 33.3毫升 1000毫升 1.0毫升 30毫升 7.3.5 样品的稀释缓冲液（即用） 7.3.6 底物（即用） 试验时戴手套以避免污染。必须以无菌针头吸取底物溶液。 7.3.7 终止液（即用） 10 7.4 检测程序概要 刚地弓形虫 IgG/IgM定量 进行IgM检测时先吸除RF因子, 见7.2.1 室温孵育15分钟或4?过夜 样品稀释液（病人血清） 1+100 , 将稀释的样本，和立即可用的对照血清 / 标准血清，加 到微量孔内（100微升） , 孵育60分钟 / 37? 湿盒中 洗涤 , 加入已稀释的酶标记抗体溶液（100微升） , 再孵育30分钟 / 37? 湿盒中 , 洗涤 , 加入底物溶液（100微升） , 再孵育30分钟 / 37? 湿盒中 , 加入终止液（100微升） , 在405 纳米处读数 11 7.5检测过程 7.5.1将检测所需数目的微孔条放到微孔板框上并准备好一张草签。 7.5.2在微量孔内分别加入100微升的已稀释样本或立即可用的对照血清。留一 个孔为底物空白使用，例如： 定量的IgG / IgM 微量孔 孔A1 底物空白 孔B1 阴性对照 孔C1 标准血清 孔D1 标准血清 孔E1 标本 1...... 7.5.3将样品放于湿盒内37?（?1?）孵育60分钟（?5分钟）。 7.5.4孵育后以洗液缓冲液洗涤板孔（使用自动洗板机或手工洗板）： - 吸去或甩去洗液 - 每孔内加入300微升洗液 - 吸去或甩去洗液 - 重付息涤过程3次（共4次！） - 将微孔板翻转过来在纸巾上拍打，使微孔中不再含有液体 7.5.5加入酶标记抗体。 于适当孔内（底物空白除外）加入100微升 IgG / IgM / IgA酶标记抗体 ＊7.5.6湿盒内37?（?1?）孵育30分钟（? 1分钟）。 7.5.7孵育后，以洗液清洗板孔（洗涤见上） 7.5.8加入底物 于每孔内加入100微升底物溶液（包括底物空白孔） ＊7.5.9湿盒内37?（?1?）孵育30分钟（? 1分钟）。 ＊注意：在特殊的工作环境下有必要对孵育时间进行调整。 12 7.5.10终止反应 每孔内加入100微升终止液，轻微振荡微孔板以混合溶液。 7.5.11读取消光度 以底物空白为空白对照液， 60分钟内读取405纳米的OD值，建议参考 波长范围为620纳米-690纳米（例如650纳米）。 8. 检测结果评估 赛润 ELISA classic刚地弓形虫 IgG/IgM（定量） 8.1 4PL单点定量法 通过利用非线性方程，可以保证根据消光信号的定量数值精确计算出抗体活性， 该方程可在不对OD值进行转换的情况下调整S型曲线。 用赛润 ELISA classic试剂检测，抗体浓度可通过对数模型（4PL, 4个参数）来计算，该模型对浓度曲线有很精确的适用性。计算 公式 小学单位换算公式大全免费下载公式下载行测公式大全下载excel公式下载逻辑回归公式下载 如下： D - A OD = A + B(C-ln conc.)1 + e 参数A、B、C和 D能够反映曲线的精确形状。 1. 下端渐进线 , 参数A 2. 曲线斜率 , 参数B 3. 转折点 , 参数C 4. 上端渐进线 , 参数D 标准曲线是由德国维润赛润研发有限公司（维尔茨堡市）在严格条件下经过多次 试验制定的。使用者无需花费大量的时间和使用昂贵的仪器来制作标准曲线。 13 每一个试剂盒内均附有专用的标准曲线和评估表用来计算抗体浓度。如有需要也 可取得相关的评估软件。 为了校正正常试验偏差和建立试验对照，每轮试验均需使用标准血清作为对照。 该对照血清的有效范围参考值是由厂商的质量控制部门确定的，在此范围内可保 证抗体浓度测定的正确性。标准血清不一定是阳性对照，且在某些ELISA试验中标准血清数值可能是临界值或阴性结果。 8.2有效性标准 - 底物空白的OD值必须 < 0.25 - 阴性对照必须为负值 - ELISA定量试验：标准血清的平均OD值必须在有效范围内，此范围已在试 剂盒专用的质量控制证书中给定（减去底物空白之后！） - ELISA 定性试验：阳性对照的平均OD值必须在有效范围内，此范围已在试 剂盒专用的质量控制证书中给定（减去底物空白之后！） - 如果未达到以上标准，则试验无效且必须重做。 8.3赛润 ELISA classic刚地弓形虫 IgG/IgM的定量计算 抗体活性的计量单位是IU/ml，其中IgG抗体单位IU/ml采用的是1980年的第2 版刚地弓形虫国际标准-2000国际单位/小瓶，而IgG抗体单位IU/ml采用的是1994年的第3版刚地弓形虫国际标准-3000国际单位/小瓶。 14 8.3.1 每个试剂盒内均备有一个标准曲线和一个评估表，因而每一个OD值都可得到一个抗体活性值。标准血清的参考值和有效范围已在评估表格(质量控制证书）中给定。 所有的OD值在求值前必须先减去空白（A1）. 方法1：定性评估 为确定临界值范围，请将已测得的标准OD平均值与质量控制证书上给出的数据 相乘（见专用公式），例如： OD = 0.502 x MW(STD) 临界值上限 OD = 0.352 x MW(STD) 临界值下限 如果得到的标准血清的平均消光度值是0.64, 那么临界值的范围即为 0.225-0.321。 方法2用评估表精确评估抗体活性 1. 计算标准血清两个OD值的平均值，并检查其是否在给定的有效范围内。 2. 然后，根据标准血清的平均OD值在下表中确定对应的数据栏。 3. 用已测得的患者样品OD值查出“IU / ml或U / ml”栏中对应的抗体活性。 例如： 标准血清/OD范围 0.57-0.61 0.62-0.65 IU/ml和U/ml 其它 < 0.06 < 0.07 < 5 0.07-0.12 5-10 0.13-0.22 11-19 0.23-0.32 20-30 0.33-0.40 31-40 例如：测得的标准血清平均消光度值为0.64，则对应表中OD值0.62-0.65一栏中的数据。如果患者血清样品的OD值为0.25, 对应的抗体活性范围应是20-30。 15 方法3：利用标准曲线进行抗体活性的连续求值。 测定间差异（指不同时间的检测差异和不同实验室的检测差异）可用校正系数 F 与当前测定数值相乘进行校正。校正系数的计算公式为： （标准血清）OD参考值 F = （标准血清）当前测量OD值 用户利用专用的标准曲线对检测试验的偏差进行校正是非常必要的。 首先，不同日期检测之间的差异可通过计算校正系数 F 进行校正。 1. 计算标准血清的两次OD值的平均值，并确认是否在有效范围内。 2. 校正系数 “F”的计算：用给定的参考数值除以标准血清两次消光数的平均值。 F = 标准血清的参考消光数值 / 标准血清消光数的平均值 3. 将测得的所有病人血清的消光数值与校正系数 “F”相乘。 4. 用经过校正的消光数值在标准曲线“U/ml或IU/ml”坐标轴上确定对应的抗体活 性。 赛润 ELISA classic刚地弓形虫 IgG抗体活性的计算： 阳性结果: > 20 IU/ml 不确定性结果: 10-20 IU/ml 阴性结果: < 10 IU/ml 赛润 ELISA classic刚地弓形虫 IgM抗体活性的计算： 阳性结果: > 540 IU/ml 不确定性结果: 450-540 IU/ml 阴性结果: < 450 IU/ml 针对不确定性结果的样品，应在1-2 周后对相应的病人再进行取样，重新检测。 16 8.3.2 利用SERION easy base 4PL软件/SERION评估软件进行自动评估 输入四个参数和标准血清参考值之后，联机软件就会计算出抗体活性。 如果标准血清的消光值超出有效范围，SERION easy base 4PL软件就会出现如下信息： “标准已超出允许范围”和 / 或“标准差异大于20%”。 SERION 评估软件只用英语显示： „Standard values out of ranges in following groups: Group 1-24. Standard value differ more than 20% in following groups: Group 1-24.” “以下组样品标准值超出范围：组1-24。以下组样品标准值差异大于20%：组1-24。” 在这种情况下，此轮试验无效，需重做。 只有更换批号时，参数和参数值才需要改变（评估表中标有参数与参考值）。组别 特异性数据的正确输入与否可以以标准血清的 IU / ml 或 U / ml 值为基础进行检验。计算出的平均单位值需与组别特异性认证书所示的单位值相对应。可自动 校正测定值。使用标准版本打印机会显示如下内容： 样品编号 OD值 IU / ml或 U / ml 结果说明 17 8.4 检测结果说明 用赛润ELISA classic刚地弓形虫试剂检测时，阴性结果(< 10 IU/ml)说明处于非免疫状态，但并不能排除是处于刚地弓形虫感染的初期阶段。孕妇及 计划 项目进度计划表范例计划下载计划下载计划下载课程教学计划下载 怀孕的妇 女由于免疫力降低，感染胎儿的机率会很高。因此强烈建议间隔8-10周后再取样检测，以监测母亲的血清学状态。 孕妇的IgG抗体滴度呈阳性（但IgM抗体滴度呈阴性），说明病人处于刚地弓形 虫感染的潜伏期或既往感染，不会对胎儿造成感染。 如果IgG抗体滴度很高或滴度增加，且IgM抗体滴度也呈阳性，则说明病人处于 刚地弓形虫的急性感染期。对此我们强烈建议再进行其它血清学检测（如 IgM-ELISA试验、Sabin Feldman染色试验），以获得关于感染具体时间的更多信 息，特别是孕妇，因为临床治疗主要取决于感染发作的具体状况。同时也建议再 采集血样进行抗体滴度的动力学分析，以便掌握感染发作和进展的有关信息。 为确定血样的血清学状态，首先要进行筛查试验，然后还必须进行附加试验进行 精确检测。 感染 急性感染期 近期感染过 潜伏期 血清转化 筛查试验 IgG-ELISA + + 或 + ISAGA + + 或 - - IgM-ELISA + + 或 - - 附加试验 血清转化 CFT 滴度降低 - 或 + 18 9. 性能特征 9.1重复性 检测内结果的重复性通过在同一批试验中检测20次不同反应的血清来判断，而检 测间结果的重复性通过分别在5天进行10次独立的血清检测分析来判断。 标准差 差异系数 (CV) = × 100 平均值 赛润 ELISA classic刚地弓形虫 lgG: 平均消光值 检测内分析平均消光值 检测间分析 (OD) (CV%) (OD) (CV%) 样品 弱阳性 0.559 8.3 0.535 14.4 阳性 0.834 8.0 0.777 10.0 强阳性 1.653 5.6 1.500 12.8 赛润 ELISA classic刚地弓形虫 lgM: 平均消光值 检测内分析平均消光值 检测间分析 (OD) (CV%) (OD) (CV%) 样品 弱阳性 0.302 5.05 0.202 9.89 阳性 0.938 4.8 0.936 6.53 强阳性 1.146 5.31 1.142 5.79 19 9.2 敏感性与特异性 对450份来自病人和健康人的血清样品用赛润ELISA classic 刚地弓形虫 IgG试剂与间接免疫荧光法分别检测，进行对比分析。使用赛润ELISA classic 弓形虫 IgM和其他厂商生产的弓形虫 IgM-µ-Capture ELISA检测76份血清并进行对比分析， 能够确定赛润ELISA classic弓形虫IgM其敏感性和特异性。 在计算时不考虑临界值血清。 赛润 ELISA classic IgG检测 赛润 ELISA classic IgM检测 敏感性 98.2% 100% 特异性 99.4% 97.2% 在一个附加试验中，用赛润ELISA classic刚地弓形虫试剂和间接免疫荧光分析（作 为对照试验）分别对来自怀孕妇女的1000份血清样品进行了检测。两种方法检测 结果不一致的样品再用第3种方法Sabin—Feldman染色试验(Sabin Feldman Test)进行检测。 赛润 ELISA classic IgG检测 敏感性 99.7% 特异性 99.5% 结果表明：赛润ELISA classic 刚地弓形虫IgG 试剂盒能很好地适用于对怀孕妇 女特异性抗刚地弓形虫抗体的检测。血清中血红蛋白达到10mg/ml时也不会影响试验结果，此外使用赛润ELISA classic 刚地弓形虫IgG 试剂时也没有发现交叉反应。 通过确定赛润ELISA classic刚地弓形虫IgM的临界值可以达到很强的敏感度。仅 有< 1%的献血者血清和大约3%的随机抽取的孕妇血清检测结果为阳性。（图1） 20 图1：对94份随机抽取的献血者血清(BS)，279份孕妇血清(SS2)和46份部分阳性的经过预先评估的血清进行赛润ELISA classic 刚地弓形虫IgM检测得出的OD消光值分布图。 21 10.警告 10.1警告和安全措施 赛润 ELISA classic试剂盒是针对熟悉实验室操作人员所设计使用的。 所有试剂盒试剂及人类标本必须采用已有的良好实验技术，小心处理： - 此试剂盒内含人血成分。尽管所有的对照及定点对照都已经过试验验证并且发 现对于乙型肝炎表面抗原，丙型肝炎抗体，HIV抗体均为阴性；但仍认为它们具有潜在的感染性。 - 移液过程禁止用口。 - 在处理试剂和标本的地方禁止吸烟，饮食。 - 使用试剂盒和标本时，必须戴一次性手套，穿试验服，戴安全镜。使用后请彻 底洗手清洁。 - 患者样本及其他潜在感染材料试验后应予以消毒。 - 试剂应保存在安全的地方，禁止儿童接触。 - 终止液：具有腐蚀性（C）；发生酸烧伤（R34）；因此在操作时应穿戴防护镜，手套和试验服。 10.2废料处理 请注意相关要求！ 22 11.参考文献 Balsari, A. et al. ELISA for Toxoplasma antibody detection: a comparison with other serodiagnostic testsJ. clin. pathol. 33, 640, 1980 Boniolo, A. et al. ELISA for Toxoplasma antibodies In: „Immunoenzymatic assay techniques“, Malvano, R. ed., Nijhoff, M., Publ.,1980 Hlobil, H. et al. Epidemiologie, Prophylaxe und Therapie bei Toxoplasma-Infektionen in der Schwangerschaft-eine kurze Übersicht- Klin. Lab., 687-693, 1992 Janitschke, K. Pränatale Übertragung der Toxoplasmen von der Mutter auf das Kind. Bundesgesundheitsblatt-Gesundheitsforschung-Gesundheitsschutz (42) 548-552, 1999 Janitschke, K. Toxoplasmose: Diagnostik im Rahmen der Mutterschaftsvorsorge Diagnose&Labor 39, 24, 1989 Robert-Koch-Instiut Virusdiagnostik und Toxoplasmose-Diagnostik vor und in der Schwangerschaft. Epidemiologisches Bulletin (22) 178 - 179, 2000 Van Loon, A. M. et al. Enzyme-linked immunosorbent assay for quantitation of Toxoplasma antibodies in human sera J. clin. Pathol. 33, 635, 1980 23 Walls, K.W., et al. Use of the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and ist microadaption for the serodiagnosis of toxoplasmosis J. clin. Microbiol., 5, 273, 1977 Welch, P.C., et al. Serologic diagnosis of acute lymphadenophatic toxoplasmosis J. Inf. Dis., 142, 256, 1980 ELISA classic LOT 签号 / lot REF 订货号码 / reference or order number x…y? 储存在x…y之间的温度下 / store between x and y degree celsius CE 按照欧共体标准98/79执行 / CE marking according to IVD guideline 98/79 EC CE0197 按照欧共体标准98/79附录II, B目录执行 / CE marking according to IVD guideline 98/79 EC according to annex II, list B 终止日期 / expiry date MTP 微孔板 / microtiter plate(breakable strips) AG 抗原 / antigen CAG 对照抗原 / control antigen STD 标准血清 / standard serum POS 阳性对照 / positiv control C / O 界定血清 / cut-off serum NEG 阴性对照 / negative control APC 酶标记的抗人 / alkaline phosphatase conjugate anti-human + 低浓度的酶标记物 / conjugate with low concentration 24 ++ 中等浓度的酶标记物 / conjugate with medium concentration +++ 高浓度的酶标记物 / conjugate with high concentration RF 类风湿因子RF—吸附剂 / rheumatoid factor absorbent(rf-absorbent) Rf/CAG 赛润对照抗原类风湿因子RF—吸附剂 / rheumatoid factor absorbent(rf-absorbent) with control antigen DILB 血清稀释缓冲器 / dilution buffer for sera WASH 洗涤液 / washing solution concentrate pNPP pNPP酶结合物 / pNPP substrat STOP 终止液 / stopping solution 有腐蚀性 / corrosive CERT 标准曲线和评估表 / certificate(standard curve and evaluation table) INFO 用法说明书 / instructions RTU 立即可用 / ready-to-use CONC 浓缩 / concentrate DIL 稀释或溶解 / dilute or disolve in AQUA 蒸馏水 / aqua detillata IVD 体外诊断使用 / in-vitro diagnostic use 128 腺病毒 / Adeno, Virus 132 烟曲霉 / Aspergillus fumigatus 120 百日咳 / Bordetella pertussis 1201 百日咳毒素 / Bordetella pertussis Toxin 121 Burgdorferi 疏螺旋体 / Borrelia burgdorferi 116 布鲁氏菌 / Brucella 117 白色念珠菌 / Candida albicans 137 衣原体 / Chlamydia 1311 热柯克斯体 Q-Fever I / Coxiella brunetii (Q-fever) phase 1 1312 热柯克斯体 Q-Fever II / Coxiella brunetii (Q-fever) phase 2 134 柯萨奇病毒 / Coxsackievirus 109 巨细胞病毒 / Cytomegalovirus 25 130 白喉 / Diphtheria 1362 EB病毒 EBNA1 / Epstein-Barr, Virus/EBNA 1 1361 EB病毒 VCA / Epstein-Barr, Virus/VCA 107 棘球属 / Echinococcus 135 艾柯病毒 / Echovirus 133 肠道病毒 / Enterovirus 112 TBE病毒 / TBE Virus 118 幽门螺旋杆菌 / Helicobacter pylori 1051 单纯疱疹病毒1 / Herpes Simplex, Virus 1 1052 单纯疱疹病毒2 / Herpes Simplex, Virus 2 105 单纯疱疹病毒1 / 2 / Herpes Simplex, Virus 1/2 1231 流感病毒 A / Influenza, virus A 1232 流感病毒 B / Influenza, virus B 106 嗜肺军团菌1-7 / Legionella Pneumophila 1-7 125 钩端螺旋体 / Leptospira 102 麻疹病毒 / Measles Virus 103 腮腺炎病毒 / Mumps Virus 127 肺炎支原体 / Mycoplasma pneumoniae 1261 副流感病毒1 / Parainfluenza, virus 1 1262 副流感病毒2 / Parainfluenza,virus 2 1263 副流感病毒3 / Parainfluenza,virus 3 126 副流感病毒1, 2, 3 / Parainfluenza,virus 1, 2, 3 122 细小病毒 B19 / Parvovirus B19 113 呼吸道合胞病毒 / Resp. Syncitial Virus 129 风疹病毒 / Rubella virus 108 破伤风 / Tetanus 110 弓形虫 / Toxoplasma gondii 104 带状疱疹病毒 / Varicella-Zoster Virus(VZV) 138 耶尔森氏菌 / Yersinia 26