【doc】利用OD值估测双歧杆菌活菌数的可行性研究
利用OD值估测双歧杆菌活菌数的可行性研
究 一
舌2;7
?5i?
利用OD值估测双歧杆菌活菌数 的可行性研究
河北医学院微生物教研室石家庄050017
魏林郝维黾序悟芳刘勖
,—————,—————V
双歧杆菌做为肠道的正常生理性细 菌,它的重要性已逐渐被人们所认识,有 关制剂如雨后春笋,相继出现在双歧杆 菌的研究及制剂生产过程中.需经常测 定双歧杆菌的活菌数.甘前大都采用滴 注培养法.但这一方法比较繁琐,而且成 本高.我们试图比浊法代替滴注法.为 此,在应用分光光度计测定培养液光密 度(OD值)的同时,用滴注法测定活菌 数结果表明二者之间呈现很好的正相 关关系,因此可用此大致估测双歧杆菌 的活菌效,提高了工作效率,降低了实验 成本.
l材料与方法
11菌株:双歧杆菌为本室分离保 4'
存菌株.
1.2培养基:为本室研制的双歧杆 菌l号,2号,3号液体培养基.
1.3仪器:7?一1型分光光度计. 1.4在1,2,3号液体培养基中,以
10个/m|的浓度接种入双歧杆菌菌种, 37"C温箱孵育,分别在4,8,12,16,20,
2d,36,48小时取培养液微量测定其OD 值,并以滴注法进行活菌计数
2结果与讨论
2.1在1,2,3号液体培养基中.分
别以】O个/ml浓度接种敷歧杆菌O.1 m1培养液.37?培养4,8,12,16,20,24,
36,48小时,测定OD值及进行活菌计 数,结果如表一.
菌16SrRNA核苷酸序列在进化上较其 DNA保守得多.其同瓣陛分析已成为化 分种系的重要依据,它与上述几种基因 相比有更大的特异性,为此我们选用了 与HPI6srRNA互补的引物来扩增 HP16SrRNA.结果PCR析出HP的总 阳性率明显高于尿素酶法,胃,十二指肠 溃疡阳性率分别为87.5和86.96, 明最高于胃炎的阳性率(63.5】)这与 文献报导是一致的,尿素酶法除胃炎 组阳性率与PCR法相近,其余均低于 PCR法,且与PCR法符合率较低,这说 明尿素酶法敏感性低并有假阳性存在, 因为在胃肠道的奇异变形杆菌,肺炎克 雷白氏杆菌及尿素分解尿原体均有屎素
酶存在.本文结果表明PCR法较尿素酶 法敏感特异,HP感染与胃,十二指肠疾 病密切相关,已有研究表明PCR可以从 唾液中检出HP,并用PCR单链构象多 态法对Hp进行分型0一,无疑这对确定 HP的感染来源,传播途径及疗效观察
提供有力的工具
参考文献
:I]陈一平等.PCR对胃活检标车巾直门螺杆菌 DNA的楦谢,中华传染病学杂志199'~:12(3):
14I
[2]朱敬等用巢式聚合酶链反应在唾液中检出幽 门螺杆菌,中华流行病学杂志L903~14:237 [3]胡伏莲.J1螺杆菌的分子生物学研究现状, 中华消化杂志1994~l{(e):313 (牧档日期95?)
?
52?中国微生巷学杂志1996年第8卷第1朔 从表中可见,1,2,3号培养基接种菌
种后生长繁殖方式无论以光密度法,还 是活菌计数法均符合正常生长曲线,并 且两种方法所测得的曲线幅度.以及生 长最高峰时间是一致的.如1,2号均为 培养20小时.3号为]6小时达最高峰. 表1三种培养基在不同培养时问测得双歧杆菌OD值及活菌数
时问l号培养基2号培葬基j3号培养基 (时)OD值活菌数0D值活苗数loD值活菌数 00.89l×10*n3551×l0I1.0391×10'
1_206曼9×l037213×l0I10691.8×10 B1.2562.8Xl00.48Z70×1ojl1-170】_l×1 :21.40184×i0s以5301_1)<106I1_5702.】×l 1d12幺4×】0.5831.5×】02.034I.0Xl0 202.0843.8)<1006227.0×lI202780×10 24200530×10n6152.5×1o6l1.9170×l0 061_7I81_3×1060.4300×10I1_8196.0X1 481.5.551.OXl舻0.33180×101.5773.4×106 .
2以×代表OD值Y代表菌数,用
发性方程1gy一2.5919+】|9837X计
,OD值与菌落计数的对数值呈线性
王相关关系,l,2,3号培基的OD值与
茵落计数的相关关系分别为0.82,0.71 孟0.95.假设检验P值分别为(0.05, 05以及(O.0l.
以此三种双歧杆菌培养基为例,判
巷断i准如表二:
2.3从以上的结果及统计资料可
见,分光光度计测定光密度(OD值)与
活菌计数之间,存在着很好的正午戗关对 应关系,在双歧杆菌研究或活菌制荆制 备中,若以OD值测定取代活菌计数,不 但降低实验成本,还可大为减轻工作量. 表2以OD值判定活菌数的判定
标准
excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载
OD值
1号培养基2号培养基3号培养基
10s1_2l1701487018714 1061_71501.20851.3380
l022l娩2.2683&0047
(收稿日期9s_4一10)
STUDlESONSEWAGETREATMENTBY
ELECTROHYDRAULICEFFECT
蕊Jie.af
De?arfmm~tPhy~s.DatiauUniv~.sityDamon]16035
AbstractThispaperhasstudiedsewagetreatmentbyelectrohydrauliceffe~?It~ntro- ducedthemethodoftestandgavetheexperiment~results.Theexperimentalresults indicatedthattheelectrohydraulieeffectstronglyactsonsterilization. KeywordsElectrohvdrauUceffectSewagetreatment
浙公网安备 33021202002483