中药大黄的薄层色谱鉴别
[适用对象] 生物工程、药学、药物制剂、中药学、制药工程、中药学(国际交流方向)专业
[实验学时] 3学时
一、实验目的
1.掌握CMC-Na硅胶H板对大黄中蒽醌类化学成分的分离。
2.掌握色谱斑点的检出识别方法。
3.计算5中成分的R值和以大黄素为标准的4种成分的R值 fst
二、实验原理
1.中药大黄中含有5种蒽醌成分，由于取代基不同，引起结构的极性不同，利用薄层色谱法可将5种成分进行分离，并利用对照品进行鉴别。
2.由于大黄中成分具有多环共轭体系，因此可通过日光下检视斑点的黄色和紫外光灯下检视斑点的荧光进行鉴别，此外大黄中成分具有蒽醌结构还可以用氨熏使之变色进行鉴别。
三、仪器设备
1. 仪器:层析缸，玻璃板，毛细管，紫外分析仪
2. 试剂:大黄酸水解乙醚提取液，氯仿、石油醚(30-60C)、甲酸乙酯、甲酸、硅胶H，羧甲基维素钠
四、相关知识点
1. 色谱分离的原理是利用组分在固定相和流动相中分配系数的不同而得到分离
2. 薄层色谱中展开剂极性的选择依据
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3. 薄层色谱板的制备方法
4. 平板色谱的操作程序
5. 薄层色谱法进行定性鉴别的依据及色谱斑点的鉴别方法
6. 点样方法及注意事项
7. 展开时的方法及方法的选择
五、实验步骤
(一) CMC-Na硅胶H板的制备
称取羧甲基纤维素钠(CMC-Na)0.75g于100ml水中，加热使溶解，混匀，将硅胶H33g加入其中调成糊状。取此吸附剂混悬液适量放在清洁的饿玻璃板上(710cm板铺板)，晃动玻璃板，使其均匀流动布满整块玻璃板上，而获得均匀的薄层。将玻璃板凉干，在于110C活化1小时，储存于干燥器中备用。
(二) 点样
将薄层板平放在水平面上，用毛细管吸附少量提取液点在离板底断约1-2cm位置处。要注意点样方法。
(三) 饱和
将调好极性的展开剂倒入层析缸中，密闭15min，形成展开剂的饱和蒸气压。
(四)展开
将点好样的薄层板放入层析缸内进行展开。采用倾斜上行展开法，展开剂:石油醚(30-60C)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)，展距15cm。然后取出薄层板在空气中凉干。注意在本实验中的展开方
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法。
(五)色谱鉴别
1)日光下检视黄色斑点。
2)置薄层板于密闭的氨水中熏10分钟，斑点应为红色。
3)置氨熏后的薄层斑点于365nm紫外光灯观察斑点的荧光颜色。
(六)计算R值。 f
量取斑点和展开剂的迁移距离并计算R值和R值 fst
六、 实验
报告
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要求
要求有原始数据，薄层板展开后的模拟图，实验时间，实验注意事项，实验合作人
七、 思考
题
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1. 如何将分离得到的5种成分按极性大小进行排列
2. 如果要将本实验分离得到的5个斑点鉴别分别是什么化合物，应如何进行。
3. 展开剂的极性如何进行选择
4. 在薄层色谱法中的展开中可以有那些展开方法，展开过程中应注意些什么,
5. 点样时要注意写些什么,在展开时如何防止拖尾及前倾,
八、 实验成绩评定办法
实验成绩的评定包括实验操作(包括薄层板的制备、点样操作、展开方法、展开剂极性的调节、展开后斑点的分布情况、点样位置、斑点鉴别方法、斑点和展开剂迁移距离及R值和R值的计算以及卫fst
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生情况等9个小项)和实验结果(包括实验结果的准确性主要是分离
后的斑点的数目及斑点的形状)。
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