黄绿青霉素对心脏毒性损伤作用

黄绿青霉素对心脏毒性损伤作用 作者:刘密凤，王丽华，林林，姚洪菊，张芳鸣，王文革，杨建伯【摘要】目的观察黄绿青霉素(IT)对离体心肌细胞及大鼠心肌组织结构和功能的损伤。方法电镜检查法观察黄绿青霉素致离体心肌细胞超微结构的，… 作者:刘密凤，王丽华，林林，姚洪菊，张芳鸣，王文革，杨建伯 【摘要】 目的 观察黄绿青霉素(IT)对离体心肌细胞及大鼠心肌组织结构和功能的损伤。方法 电镜检查法观察黄绿青霉素致离体心肌细胞超微结构的，并对15g,(kg?d)IT喂饲8周的大鼠心肌组织病理学观察。结果 光镜下IT组大鼠心肌变性和坏死，病变呈灶状或条索状分布，有炎性细胞浸润，肌原纤维凝集崩解，心肌细胞颗粒变或空泡变性。电镜下，2 5μl/L IT组，细胞形状不规则，染色质边集，肌丝，胞质内脂滴颗粒，线粒体嵴清晰，线粒体空泡变性;25μl/L IT可使完整的肌细胞结构消失;随剂量，毒性作用。结论 IT在体内和体外均可引发心肌的变性和坏死。 【关键词】 黄绿青霉素 黄绿青霉素(IT)是黄绿青霉的次级毒性代谢物，能在较低的温度和较高的湿度下生长〔1〕，自然界中，容易污染新收获的农作物，呈黄绿色霉变，食用后可急性中毒，是与人类生活密切的真菌毒素。现已证明，该毒素神经毒作用〔2〕及致畸性〔3〕。也有，其是克病的病因〔4〕。该毒素在体外能抑制人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)活性及白色念球菌生长〔5〕。本文旨在从体内和体外观察黄绿青霉素的心脏毒性作用。 1 材料与方法 1 1 仪器和试剂 lypus光学显微镜和倒置显微镜:2恒温培养箱;超速低温离心机;净化工作台;illipre超纯水系统;sp-10Avp液相色谱仪(日本岛津公司);Uv-VIS 检测 工程第三方检测合同工程防雷检测合同植筋拉拔检测方案传感器技术课后答案检测机构通用要求培训 器;数据采集和使用的色谱工作站;凯氏振荡器;手术器械及细胞培养瓶等。黄暗青霉菌(Peniilliu itrenigru Dierkx,PV)(中科院微生物所);IT标准品和胶原酶?(美国Siga公司);最低必需培养基(E)和胎牛血清(美国GIB公司);胰蛋白酶(美国ARES公司);其余试剂均为国产分析纯。 1 2 实验动物 雌性istar大鼠，体重80,120g(哈尔滨市兽医所);观察和检疫1周。出生1,3d istar乳鼠(哈尔滨医科大学附属医院实验动物中心)。 1 3 心肌细胞原代培养 新生istar乳鼠，无菌取心肌，清洗并剪碎，0 1,胰蛋白酶消化5in后弃去，加入10l 1g,l的胶原酶?，37?下消化30,40in，500r,in离心5in，含20,胎牛血清的基础培养液制成细胞悬液，37?，5,2温箱内培养。心肌细胞和成纤维细胞贴壁的不同，采用差速贴壁分离法，并在前3d的培养液中加入0 1l/L 5-溴脱氧核苷酸，以抑制成纤维细胞的增殖。 1 4 黄绿青霉素致离体心肌细胞损伤的电镜观察 IT连续倍比稀释成25，2 5μl/L剂量组，按常量分别加入已长成单层的心肌细胞中，设立细胞对照组。24h后将细胞刮下，2 5,戊二醛固定，常规电镜检查。 1 5 黄绿青霉素致大鼠心肌组织的毒性观察 黄绿青霉素的生物合成〔1〕，并高效液相色谱法检测〔6〕。istar大鼠随机分为2组，每组7只，分笼喂养。A组对照组，饲以普通饲料;B组15g,(kg?d)IT，并随体重而。8周后处死动物，剪取心肌组织，10,甲醛固定，常规病理学检测。 2 结果 2 1 IT对心肌细胞超微结构的 培养的心肌细胞，体积， 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 面光滑，胞质内有肌丝散在分布，Z线清晰，质膜下游离核蛋白体，线粒体发达，嵴可见。2 5μl/L剂量组，肌细胞为不规则形，细胞核内高密度的染色质边集核膜下，核周Z线结构清晰，肌丝，胞质内脂滴颗粒，线粒体嵴清晰，相邻细胞以脂膜紧贴，未见连接结构，线粒体空泡变性。25μl/L剂量组，未见完整的肌细胞结构，疑为肌细胞的胞质内有的脂滴颗粒，细胞功能状态不佳，肌细 胞轮廓不清，胞质内线粒体高密度团块状，嵴微细结构不，见图1,3。 图1 电镜下培养心肌细胞(略) 图2 电镜下2 5μl/L IT的心肌细胞(略) 图3 电镜下25μl/L IT的心肌细胞(略) 2 2 黄绿青霉素对实验动物体重及脏体比值的 实验开始时，实验组与对照组体重，差异无统计学意义(P,0 05)。IT后，实验组体重无，对照组体重增长(P 0 01)。实验组大鼠 的心、肝、肾脏与体重的比值均高于对照组，差异有统计学意义(P 0 01)。 2 3 黄绿青 霉素对大鼠心肌组织结构的 光镜下，对照组心肌纤维排列规整，无异常。实验组大鼠心室 肌均病变，病变呈灶状或条索状分布，涉及范围，有淋巴细胞和单核细胞浸润，间质水肿，心肌细胞呈颗粒变性，肌浆凝聚，肌原纤维凝集、崩解，心肌细胞空泡变性，见图4，5。 图4 IT组心室肌病变(HE染色，×40)(略) 图5 IT组心室肌(HE染色，×200)(略) 3 黄绿青霉素是黄绿青霉、黄暗青霉、瘿青霉、垫状青霉、毒青霉等青霉菌的次级毒性代谢 物，由α-吡喃酮色基、多烯和氢呋喃环3组成〔1〕，吡喃酮-多烯结构中的共轭多烯系统是 与三磷酸腺苷酶(ATP)的组分，可与线粒体ATP酶β亚基相，使其活性受抑，己证实IT是 线粒体可溶性ATP酶的强效抑制剂，可抑制牛心肌和大鼠肝脏线粒体中，ADP刺激的呼吸作 用;ATP驱动的氧化辅酶?还原琥珀酸盐;及牛心肌线粒体亚中，ATP驱动的辅酶?转氢酶 和ATP酶活性〔7〕。IT对线粒体的损伤而对多器官、多系统产生毒性作用，其主要靶器官为呼吸系统和循环系统，可引起实验动物鼠、猫、狗、和蛙等性麻痹，全身僵直，低温，呼吸，直至死亡。本显示，IT可致大鼠心肌变性和坏死，呈灶状散在分布，涉及面，有炎性细胞浸润，心肌细胞呈空泡样变，间质水肿，横纹消失。应属于吞噬阶段的较早病变，与本实验的急性期特点相符合，表明病变尚发展中。 【参考文献】 〔1〕 Uen Y.itreviridin fr peniilliu itre-viride Biurge,ytxins,,.Asterda xfrd Ne Yrk: Elsevier Sientifi Publishing pany,1974:291-300. 〔2〕 Uen Y,Uen I.Islatin and aute txiity f itreviridin,a neurtxi ytxin f peniilliu itre-viride Biurge,J,.Japan J Exp ed,1972,42 (2): 91-105. 〔3〕 rrissey RE,Vesnder RF.Teratgeni ptential f the ytxin,itreviridin,in rats,J,.Fd he Txil,1986,24 (12): 1315-1320. 〔4〕 杨建伯，杨秋慧.克病病因,J,.地方病学杂志，2002，19(5):350-355. 〔5〕 Vieta ?,Savarin A,Papa G,et al.In vitr inhibitry ativity f itreviridin against H1V-1 and an HIV-assiated pprtunist: andida albians,J,.J hether,1996,8 (5): 351-357. 〔6〕 Rbert DS,Judith IG,dette LS.Liquid hratgraphi ethd fr deterinatin itreviridin in rn and rie,J,.J Ass f Anal he,1988,71(4):721-724. 〔7〕 Linnett PE,ithell AD,sseltn D,et.al.itreviridin,a speifi inhibitr f the ithndrial adensine triphsphatase,J,.Bihe J,1978,170:503-510.