首页 硫化孕烯醇酮对前边缘皮层内侧区诱发兴奋性突触传递的作用和机制

硫化孕烯醇酮对前边缘皮层内侧区诱发兴奋性突触传递的作用和机制

举报
开通vip

硫化孕烯醇酮对前边缘皮层内侧区诱发兴奋性突触传递的作用和机制硫化孕烯醇酮对前边缘皮层内侧区诱发兴奋性突触传递的作用和机制 学校代石儿,,,,, 学 号,,,,,,,,, 后旦大学 博士学位论文硫化孕烯醇酮对前边缘皮层内侧区诱发兴奋 性突触传递的作用和机制 院 系 卜海医学院 神经牛物学 专 业 姓 孙建礼 名 指导教师 郑平教授 完成日期 ,,,,年,月,,日 资助本课题得到以下基金的资助上海市教委曙光计划,,,(,,,,,,,,;国家自然科学基金和教育部跨世纪人才基金,,,(,,,,,,,,,;第四批复旦大学研究生创新基金优秀『尊士学位论文培育资助项目。中文摘要 硫化孕...

硫化孕烯醇酮对前边缘皮层内侧区诱发兴奋性突触传递的作用和机制
硫化孕烯醇酮对前边缘皮层内侧区诱发兴奋性突触传递的作用和机制 学校代石儿,,,,, 学 号,,,,,,,,, 后旦大学 博士学位论文硫化孕烯醇酮对前边缘皮层内侧区诱发兴奋 性突触传递的作用和机制 院 系 卜海医学院 神经牛物学 专 业 姓 孙建礼 名 指导教师 郑平教授 完成日期 ,,,,年,月,,日 资助本课题得到以下基金的资助上海市教委曙光 计划 项目进度计划表范例计划下载计划下载计划下载课程教学计划下载 ,,,(,,,,,,,,;国家自然科学基金和教育部跨世纪人才基金,,,(,,,,,,,,,;第四批复旦大学研究生创新基金优秀『尊士学位论文培育资助项目。中文摘要 硫化孕烯醇酮对前边缘皮层内侧区诱发兴奋性突触传递 的作用和机制 硫化孕烯醇酮是脑内含量最为丰富一种神经饼体。大量的实验表明硫化 孕烯醇酮对认知功能具有明显影响,但机制还不清楚。前边缘皮层内侧区作 为认知功能的核心脑区,其锥体细胞兴奋性突触传递通路是前边缘皮层内侧 区完成生理功能的重要环节和基础,因此,它很可能受到硫化孕烯醇酮的调 节,但此假说还需验证。本实验采用全细胞膜片钳技术,并结合电刺激和药 理学方法,研究了硫化孕烯醇酮对兴奋性突触传递的作用和机制。结果表明 硫化孕烯醇酮可以显著抑制兴奋性突触后电流(,,,,)。作用起效时间为, ,,,,作用最低浓度为, ,,,,作用随着浓度的增加而增加。为了阐明硫化孕 烯醇酮对,,,,的作用部位,我们研究了硫化孕烯醇酮(,?,)对自发微 小兴奋性突触后电流的幅度和频率的作用、对外源性施加,,,,引起的 ,,,,电流的作用、对双脉冲增强(,,,)的作用、对多巴胺和,(羟色胺引 起的自发兴奋性突触后电流频率增加的作用。结果表明硫化孕烯醇酮对自发 微小兴奋性突触后电流的幅度及对外源性施加,,,,引起的,,,,电流 均无明显作用,但可明显影响,,,及抑制多巴胺和,一羟色胺诱发的突触后 电流频率的增加,提示硫化孕烯醇酮抑制,,,,的部位可能在突触前,而 不在突触后。有趣的是,尽管我们观察到硫化孕烯醇酮对电刺激、多巴胺和 ,一羟色胺诱发的三种突触前谷氨酸释放均有抑制作用,但硫化孕烯醇酮对自 发微小兴奋性突触后电流的频率没有影响,提示硫化孕烯醇酮的作用是选择 性抑制突触前诱发谷氨酸的释放,而对突触前自发性谷氨酸释放无作用。为 了阐明硫化孕烯醇酮抑制突触前诱发谷氨酸释放作用的机制,我们研究了不 同工具药对硫化孕烯醇酮作用的影响。结果表明蛋白激酶,抑制剂,,, 和,,—;,,,可以增强,,,,也可以取消硫化孕烯醇酮对,,,的作用。硫 化孕??纪梢砸种频鞍准っ福良ざ粒疲铮颍螅耄欤椋钅浚善鸬淖苑?孕朔苄酝?触后电流频率的增加。,,蛋白抑制剂,—,,,,,,,,,,,,,,(,,,)可以取消 硫化孕烯醇酮对,,,的作用。,,受体拈抗剂,,,,,,,,和,,受体拮抗剂 ,,,,,,,,,单独使用可分别部分阻断硫化孕烯醇酮(,,(,)对,,,的增 强作用,但如果联合使用,,„以取消硫化孕烯醇酮对,,,的作用。以上实验 结果表明硫化孕烯醇酮通过激活,,和,,,,受体激活,,蛋白,然后通过抑 制蛋白激酶,抑制突触前诱发谷氨酸的释放,从而抑制了前边缘皮层兴奇性 突触传递。关键词 硫化孕烯醇酮 前边缘皮层 全细胞膜片钳兴奋性突触传递 谷氨酸释放蛋白激酶, ,,蛋白,,受体,,受体中图分类号,,,,,,英文摘要,,, ,,,,;, ,,, ,,;,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,, ,,,,,, ,,;,,,,,,, ,,,,,,,; ,,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,; ;,,,,;,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,(,,,,,),, ,,, ,, ,,, ,,,, ,,, ,,,,,,, ,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,(,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,;,,, ,,,,;, ,, ;,,,,,,,,,,,, ,,, ,,;,,,,,, ,, ,,, ;,,,, ,,,(,,,,,,,,,;,,,,, ,, ,,, ,,, ,,,, ,,,,, ,,,,,, ,,, ;,,,,,,,,,,,, ,,, ,,;,,,,,,, ,,,,,,,;,,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,, ;,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,; ;,,,, ,, ;,,;,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,;,, ,,,;,,,,(,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,, ,,,, ,,,,;, ,, ,,,, ,,;,,,,,,,,,,,,,,; ,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,, ,,,, ,, ,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,( ,,, ,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,;, ,,, ,,, ,,;,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,;,,,,,,, ,,,,,,,; ,,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,, ;,,,, ,, ,,, ,,,,, ,(,, ,, ,,,,,,,,,,,; ;,,,,, ,,,,, ,,,,,—;,,, ,,,;,,;,,,, ,,,, ,,,;,,; ,,,,,,,, ,,,,,,,,,;,,,,,;,, ,,,,,,, ,, ,,,;,,(,, ,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,—,,,,,, ,,;,,,,,,, ,,,,,,,,,,,; ;,,,,,,,(,,,,);,,, ,,,,;, ,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,;,,, ,, ;,,;,,,,,,,,, ,, , ,,, ,,, ,,;,,,,,, ,,,, ,, ,,;,,,,, ,,;,,;,,,,,,,,,,;,,, ,,,, ;,,,,, ,,,,,, ,,,, ,,, ,,,,;, ,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,, ,, , ,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,, ,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,( ,, ,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,,,,, ,,,,;,,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,;, ,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,, ,,, ,,,?,,,;, ,, ,,,,,,,,, ,,;,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,;;,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,, ,,,, ,,,,,, ;,,,,,,,,,, ,,,,,,—,,,,, ,,;,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,, ,,;,,,,, ,, ,,, ,,,?,,,;, ,, ,,,,,,,,,,, ,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,; ;,,,,,,,(,, ,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,, ,, ,,,,;,, ,, ,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,?,, ,;, ,, ,,,,,,,,, ,,;,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,; ;,,,,,,,,,,, ,,,,,,,;,,,,, ,,,,,;,, ,,, ,,,,,,,,,,,, ,,;,,,,,,,,,(,,,),,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,;,,,,, ,, ,,, ,,,?,,,;, ,, ,,,,,,,,,,, ,,;,,,,,,, ,,,,,,,,,,,;;,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,;,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,, ,, ,,,,,,,,,,;,,, ,,, ,,,,,,,,,,,; ,,,;,,,,( ,,?, ,,,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,, ,,,;,,,; ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,; ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,, ,,,,;, ,, ,,, ,,,?,,,;, ,,,,,,,,,,,,, ,,;,,,,,,, ,,,,,,,,,,,; ;,,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,;,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,; ,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,;,,,,,,(,, ,,,;,,,,, ,,,,,;,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,, ,,,,;, ,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,;,,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,;, ,, ,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,, ,,, ,,,;,,,, ,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,(,, ,,,,, ,,,, ,,, ,,,,,,, ,,,,,, , ,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,;,,,, ,,,,,;,, ,,, ,,, ;,,;,,,, ,,, ,,,,;, ,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,, ,,,;,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,, ,,,,,, , ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,, ,,;,,,,,,, ,,, ,,,?,,,;, ,, ,,,,,,,,,,, ,,;,,,,,,, ,,,,,,,,,,,; ;,,,,,,,;,,, ,,,,;,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,—,,,,,,,,,,,,,,,,,,);,,;,,,, ,,, ,,,,;, ,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,;,,, ,, ,,;,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,, ,,, , , ,,;,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,, ,,, ,,,,;, ,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,,;,,,, ,,,,,,,, ,,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,;, ,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,, ,,, ,,, ;,,;,,,,(,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,;,,,,,,, ,, , ,,,,,, ,, ,;,,,,,,,, ,,,,,,,,,,; ,,,,,,一,,,,,,;,,,,,, ,,,,,一,,,,,,,, ,,;,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,, ,;,,,,,, ,,,,,( ,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,—,,,,,, ,,,, ,,, ,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,, ,,,,,, , ,, ,,, ,,,,,,,,; ;,,;,;,, ,,,,,,,(,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,, ,,, ,;,,,,,,,, ,, ,, ,,,,,,, ,, ,;,,,,,,,, ,,,,,,,,,,;,,,,,,一,,,,,,;,,,,,, ,,, ,,一,,,,,,,, ,,;,,,,,,(,,, ,,,,,:,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,;,,,,,,,,; ;,,,,,;,,,,,,,;,,, ,,,;,,,;,,,,;,,;,,,,,,, ,,,,,,,; ,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,, ,,,,,,,;,,,,,,, ,,,,,, ,;,, ,,,,,,,;,,,,,,,,,,, ,,;,,,,,;,,,,,,,?,,,,,,;,,,,, ,正文 刖『 舀 神经甾体是近年发现的由神经组织合成的一类甾体化合物【, ,。大量的实验表明,神经甾体可以通过经典的核受体训节基因的表达,也可通过细胞膜离子通道及各种膜受体渊节突触传递,并参与各种脑功能的调节。神经甾体和多利,精神疾病,神经退行性疾病如癫痫„,,,,,一,、精神分裂型,,,,羽、抑郁症, ,,、焦虑症,,,,,,”】以及神经损伤和保护等密切相关【,,,,”。因此,神经甾体很有可能成为腩内新的一类信号分子引,引起广泛研究兴趣,显示出重要的理论和实际意义。 硫化孕烯醇酮(,,,,,)是脑内含量最为丰富一种神经甾体【,,,。,,,,,在脑内的作用相当广泛,它对多个脑区如皮层口,…,,,,,,、海马,,,,,,,、小脑„,,,、下丘脑,,,,,,】和杏仁核【,,?,,,,川等都有作用。目前,,,,,,在海马的作用研究得比较深入,已有的实验表明硫化孕烯醇酮对认知功能具有明显影响【,,…,,,:对突触传递研究表明,,,,,,可以增加自发和诱发的突触前谷氨酸释放【,,?”?,,,;,,,,,可以抑制,,,,受体的功能?,,,,也可抑制,,,,受体的功能〔“,,,,,但能增强,,,,受体的功能阻?,,,。,,,,,在前边缘皮层的作用也受到重视阻,,(,,…“,,因为其作用可能是神经蹦体影响认知及参与精神疾病的重要机制,但目前对,,,,,在前边缘皮层的作用机制尚待深入研究。 已知,,,,,在前边缘皮层的作用主要是对突触传递作用的研究。很多研究表明,,,,,在前边缘皮层可通过改变,,,,,受体的功能来调节抑制性突触传递【,,…,,】;还有研究表明,,,,,在前边缘皮层可增加乙酰胆碱和去甲肾上腺素的释放?,„,,〕,但,,,,,对兴奋性突触传递的作用研究的比较少。 兴奋性突触传递是额叶皮层信号传导的主要通路,是前边缘皮层完成功能的重要环节和基础。前边缘皮层在细胞组成一卜主要包括锥体细胞和巾间神经元。锥体细胞大多是传出性神经元,它通过兴奋性突触传递接受来自其它脑区神经元的信号传入,然后通过轴突再将信号传出到其它脑区的神经元。中间神经元大多是局部神经元,它通过兴奋性突触传递接受来自其它脑区神经元的信号传入,然后通过,,,,介导的抑制性突 触传递调节附近锥体细胞的活动。因此,研究,,,,,对前边缘皮层锥体细胞兴奋性突触传递的作用对阐明,,,,,影响认知和参与精神疾病的机制具有重要意义。 为了研究,,,,,对兴奋性突触传递的作用,本实验采用电刺激方法诱发兴奋性突触传递,用全细胞膜片钳技术记录兴奋性突触电流,观察,,,,,对兴奋性突触电流的作用。在此基础上,为了确定,,,,,的作用部位,我们研究了硫化孕??纪,,,)对白发微小兴奋性突触后电流的幅度和频率的作用、对外性施加,,,,引起的,,,,电流、对双脉冲增强(,,,)、对多巴胺和,一羟色胺引起的白发兴奋性突触后电流频率增加的作用。并观察了不同,具药对硫化孕烯醇酮作用的影响,以阐明硫化孕烯醇酮的作用机制。本研究对阐明神经甾体在前边缘皮层对锥体细胞兴奋性突触传递的作用和机制,对最终阐明神经甾体影响认知和参与精神疾病的机制,以及神经甾体的临床应用具有重要的意义。 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 与方法(一)溶液的配制,人工脑脊液配制 人工脑脊液分为两部分:成份,:,,,, ,,, ,,,,,, , ,,,,,,,。, ,,,,,,,。, ,,,,,,;,,, ,,札,,,,,,,,,,, ,,; 成份?:,,,,,,, ,(,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,渗透压为,,, ,,,,。成分,与成分,,分别配成,,倍浓缩液(,,可混合,否则产生浑浊),置一,,,,低温保存。实验前取出融化,分别稀释,然后混合定容到,,,, ,,,通持混合气(,,,,:,,,,,。)后,,为,(,。,电极内液配制 电极内液成份:,,,,;,,,,, ,,, ,?,,,,,。(,,:, , ,,,,,,, , ,(, ,,,,,,,, ,,,,,,(,。, ,,,,,,(,,。,(, ,,,,,,,,,, ,, ,,。,,值用,,,调至,(,,渗透压为,,, ,,,,,用,,(, ,,,,一次性滤菌器过滤后分装在,(, ,,离心管中,置一,, ,;低温冰箱保存备用。 (二)脑片制备 脑片的制备按常规方法进行。制各标本前先做好以下准备工作:将盛有脑脊液的烧杯埋入碎冰中,持续通混合气(,,,,。,,,;,。)。将切脑片的刀片在酒精中浸泡,以除去其表面的油污,然后安装在切片机上。待脑脊液冷却,, ,,,后 (温度约, ,,),将雄性,,天的,,,,,,, ,,,,,,大鼠(复旦大学放射医学研究所动物房)用水合氯醛(,,, ,,,,,,,(,()腹腔麻醉。待麻醉适度后,迅速断头、剪开颅骨取出全脑,置于备好的脑脊液中静置, ,,,。将冷却后的脑取出放在预先冷却过的冰台上,用刀片将左右脑从中间切不,取一侧脑,切割出含有前边缘皮层(,,,,,,,,; ;,,,,,)的脑组织块(图一,),将嘴侧向上粘在切片机载物台上,加入上述,。,脑脊液,持续通气,开振动切片机(,,,;, ,,,、,,,,,,德国),切成厚度约,,, ,,【,的脑片,移入,, ,,已通混合气的人工脑脊液中,稳定孵育,,以上备用。 (三)微电极拉制 微电极选用长度, ,,外径,(, ,,,的硬质玻璃毛坯管(,, ,,,中科院科达公司,上海)。采用微电极拉制仪(,,一,,,,,〔,,,,,,日本),两步拉制,第一步为粗拉,将玻璃管尖端直径拉成,,,—,,,?,然后再拉一次,使玻璃管在中段熔断成两根电极,断开处直径约为, , ,左右。每次实验都用当天拉制的新微电极,每根微电极只用一次。 (四)全细胞记录 为能够在记录前就可鉴别细胞的形态,我们建立了可视脑片膜片钳记录方法 (图,,)。具体操作如下:,脑片放置 用吸管小心将已孵育好的脑片放入记录槽内,用毛笔将脑片位置调整适当,用铂 框呢绒小网将脑片压好。人工脑脊液持续灌流(室温,通混合气),灌流速度,—, ,,,,,,。,电极充灌和加压 用连有细塑料管的注射器将电极内液充入,轻弹电极排除气泡,用注射器给电极适量正压,将电极放入标本浴槽,此时电极的阻抗…般为, , ,,。,定位和细胞选取 将正置显微镜低倍镜的镜头浸入灌流液中,选准所要记录脑片的位置,然后换成高倍镜。将高倍镜头浸入液体,适当调节焦距就可通过,,,摄象机在,,监视器屏幕上看到放大的细胞图象。为使细胞图象更清晰,用红外光代替普通光,其,,,(,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,;, ;,,,,,;,)图象在黑自,,监视器屏幕上会更有立体感。而且通过,,,不但能看清脑片表而的细胞,而且还能看清脑片表面下一定深度不同聚焦平面的细胞,从而能选取状态更好的细胞进行记录。锥体细胞的判断 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 为细胞胞体呈锥体形,且有明显的顶端树突(图一,)。状态好的细胞表而光滑,形体饱满,轮廓分明,折光性好。,千兆欧封接 选取前边缘皮层,—,,层状态较好的锥体细胞进行封接。封接时,膜片钳放大器处于电压钳状态。将充有正压的微电极放入灌流槽,可先在低倍镜下把电极尖端放在正中,再在显微镜的监视下使电极尖端接触脑表面。然后换成高倍镜,使电极尖端置于高倍镜『,中,并调节电极与镜头直到能同时看到脑片表面与电极尖端。此时可在监视器帮助下,继续涮节电极与镜头,使电极尖端逐渐接近所选的细胞,叮明显看到电极内的正压在电极尖端将脑片组织吹开,直到将所选细胞表面吹光滑,并看到在细胞膜表面吹开一凹陷,放开正压,再给以小的负压,吸数秒钟,同时观察阻抗,此时会发现微电极阻抗在逐渐增加,直至电极尖端与细胞表面形成, ,,以上的封接阻抗,表明封接成功。,吸破及全细胞记录 封接成功后,将膜片钳放大器由电压钳状态转换成电流钳状态,以记录膜电位和动作电位。未,吸破前膜片钳放大器仪表上的数值应为, ,,左右。然后给以突然的吸力(,,一,,, ;,,。,),此时如果放大器仪表上的电压值由, ,,左右突然变成静息电位值,则表明细胞膜已吸破而形成全细胞方式。实验选取静息电位在一,, ,,以上的神经元,然后转换至电流钳力,式,用连续叠加电流刺激细胞直至动作电位出现。动作电位幅值大于,, ,,,并出现串发放,表明细胞状态良好。然后转到电压钳方式,保持电位在 ,, ,,,记录白发兴奋性突触后电流 (,,,,,,)。在记录过程巾,每,秒给一,, ,,的电压脉冲刺激,以监视串联电阻(,,)的改变,没有作电阻补偿,但串联阻抗变动范嗣超过,,,的细胞不记入统计结果。,,,,,,的记录与,,,,,,的记录相似,只是灌流液中必须加入,(,咖的河豚毒素(,,,)阻断电压依赖性钠通道,加入,,州的,,;,,,,,,,阻断,,,,。受体。在每次实验中,待记录稳定后,再作进一步的实验处理。电压和电流记录系统由,,,,,,;, ,,,,,放大器、,,,,,,,, ,,,,模数,数模转化接口和计算机组成。计算机系统记录用的软件是,,,,,, ,(,(,,,,,美国)。 (五),,,,的电刺激诱发 记录电刺激诱发的,,,,时,使用日本光电的刺激器(,,,,, ,,,,,,,,,一,,,,,日本)和隔离器(,,,,, ,,,,,, ,,一,,,,,,本),用绝缘钨丝制作的双电极,放置于目的细胞(边缘脑区, ,,层锥体细胞)的顶树突方向距离目的细胞,,一,,微米(图,)。灌流脑脊液中加入,,州的,,;,,,,,,,阻断,,,,。受体。单刺激频率为,(,赫兹,刺激强度为引起最大幅度,,,,的,,,以下,通常为,,, ,,, ,,。记录,,,时,使用刺激频率为,(,赫兹,间隔为,,毫秒的适当强度的双脉冲。 计算机————』羔笪皇堡—卜 (六)突触后给药系统,,,一,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,;,,,,的建立,连接 压力装置————————卜控制面板(,—,,) 控制面板 控制面板 ~:竺兰竺 (微量加样器 塑料管 ,,)——————————,微量加样器 塑料管 控制面板(,,开机 计算机和控制面板,注入溶液: 用注射器注入所用药物,软件使用: 进入系统后,可以看到以上主菜单: ,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,;,,,,, ,,,,,, ,,,, ,(,,,,,,, ;,,,,,,,,,,,, ,( ,,,,,,,,,,,,,,, ;,,,, ,,,,,,,, ,(,,,, , ,,, ,,,,,,, ,,,, ,(,,,,,,,,,,, , ,,, ,,?,,,;, ,(,,;,,, ,,,,,, ,,, ,,?,,,;, ,(,,, , ,,, ,,,,,,, ,(,,,, 选择第,,,项设置,,,和,,,参数,包括激活电压、气压大小、时间等;再选择第,项调入,,,和,,,文件;最后选择第,项运行。,(结束 实验结束后气压,关机,并对给药管道进行冲洗。 (七)仪器和试剂,仪器 振动切片机(,,,,, ,,,,,,,,德国),微电极拉制仪(,,一,,,,,,,,,,,, 日本),,,,,一,,,,放大器(,,,,公司,美国),恩微镜(,,,,,,,,日本),,,, (,,,,美国),监视器(,,,,,,,,,,日本),刺激器(,,,,, ,,,,,, ,,,一,,,,,口本),隔离器(,,,,, ,,,,,, ,, ,,,,,日本),蠕动泵(,,,一,,一,型,国产),恒温磁力搅拌器(,,—,型,国产)。,试剂和给药 ,,;,,,,,,,,,,,一,,,,,,,,,一,一,,,,,一,一,,,,,,,,,,,,,,,(,)?,,,,,,,,,,州,,,),,一,一,,,,,,,?,,,,,,,,,,,,,,,; ,;,,(,,一,),,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,—,,,,,,,,, ,(,一;,;,,; ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ( ,,—;,,,, ) , ,,,,,,,,,, ,—,,,,,,,,,,,,,,(,,,),(,),,,,,,,,,(士)一,,,,,,,一,一,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,一,,,,,,,; ,;,, ,,,,,,,〔(土),,,,〕,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,—,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,(,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,(,,,,,),(,)一,,,,,;,,,(,,一,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,; ,;,, ,,,,,, ,,,,, ,,,,,;,,,,,,,等为,,,,,公司产品;,,,,;,,,,,,(,,,,,)为,,,公司产品;,,,为秦皇岛水产研究所生产;其余药品(,,)为均为国产。 药物配成所需浓度后通过灌流给药,进药速度约,,, ,,,,,,,灌流过程中持续通混合气。多巴胺和,一羟色胺用前避光现配,其它药物配成, ,,,倍浓缩贮备液,用时按所需浓度加到灌流液中。 (八)统计方法 数据用,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,(,,,,,,,,,,,,美国),,, ,,,,(, ,,;,,,,,,,,,,,日本),,,,,,,,,,(,,,,,, ,;,,,,,,,;,美围),,,,,,,,,,(,和,,,,,,(,,;,,;,, ,,,,(,,,,,美幽)等软件进行分析。求出六个连续的,,,,幅度的平均值。,,,是第二个,,,,的幅度和第一个,,,,的幅度相比的增加百分率〔(,,,,,一,,,,,),,,,,, , ,,,,】。选择有快速上升桐和缓慢衰减相的,,,,,,和,,,,,,进行测量。测量的主要参数有,,,,,,和,,,,,,幅度,发生间隔和上升时间。一般,,,,,,和,,,,,,对照和给药统计数大于,,,,,,,,,,和,,,,,,幅度和频率变化用, ,检验,其余用;检验。数据以均数?标准误表示,,,,(,,时,认为有显著性差异。 实验结果 实验采用全细胞膜片钳方法,记录大鼠前边缘皮层,—,,层锥体细胞的电活动。所记录到的锥体细胞静息电位均在一,, ,,以,(多数在,, ,,左右),其动作电位的幅度均大于,, ,,(多数在,,, ,,以卜,),且没有自发性电活动。在所记录的细胞中,动作电位的发放模式有规则发放模式(,,,,,,, ,,,,,,,,,,)和内在爆发模式(,,,,, ,,,; ,,,,,,,,,,,)两种(图,)。,,的特征足动作电位无爆发式发放,动作电位的发放间隔逐步延长,每一个动作电位后都有一后超极化后电位(,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,)。,,的特征是动作电位的发放在开始时有一个“串”发放,动作电位后常跟随去极化后电位(,,,,,,,【,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,)。这些与其它实验室的研究结果一致,表明所记录的细胞比较健康。在此基础上,我们用电压钳方式记录诱发和自发兴奋性突触后电流。 记录兴奋性突触后电流(,,,,)时,细胞电位钳制在一,, ,,,细胞外液含有,,蛳的,,;,,,,,,,阻断,,卧。受体介导的电流,, ,,,,的,,“阻断,,,,受体介导的电流。电刺激前边缘皮层,—,,层锥体细胞可以诱发出幅度随刺激强度的增加而增加的,,,,,改变钳制电位,可见其翻转电位在, ,,左右(图,),说明其为,,,,〔”,。,,,,可以被,,,,受体拮抗剂,,,,(,,州)完全阻断,但,,,,受体拮抗剂,,,,,(,, ,,)则没有作用(图,),说明在此条件下,,,,,是由谷氨酸释放所引起并由,,,,谷氨酸受体介导。在此基础上,记录了,,,,的时程,可以看出,, ,,,以,,;,,,,,,,基本稳定(图,)。然后,我们研究了神经带体硫化孕烯醇酮对前边缘皮层,—,,层锥体细胞,,,,的作用及机制一硫化孕烯醇酮对,,,,的作用 由于硫化孕烯醇酮(,,,,,)是由二甲亚砜(,,,,)配制,所以我们首先研究了,,,,对,,,,的影,向,结果表明相同浓度的,,,,对,,,,没有影响。接着我们研究了硫化孕烯醇酮对,,,,的作用。如图,一,,,,,,的幅度显著地被,,,硫化孕烯醇酮所抑制。多个细胞重复统计表明,给药,,一,, ,,, ,,,,幅度与对照相比被抑制,,(,,?,(,,,(,,,,,,,(,,,图,一;),给药前,,,,幅度的绝对值为,,(,,?,(,, ,,,给药,,一, , ,,, ,,,, ,晤度的绝对值为,,(,,?,(,, ,,,二者具有显著的统计学差异(,,,,,,,(,,)。作用的时间过程研究表明,给药, ,,,,后硫化孕烯醇酮开始对,,,,产生抑制作用(,,,,,,,(,,),而且其抑制作用持续到实验结束,脑脊液灌流冲洗,, ,,,,,,,,的幅度不能恢复 (图,一,)。硫化孕烯醇酮对,,,,作用的浓度依赖性的研究表明硫化孕烯醇酮对,,,,抑制作用的浓度范围为,(,—,,洲,浓度为,州时有显著的抑制作用,随省浓度的升高其抑制作用也逐渐增加,浓度为大于,, ,,时开始出现 ,,作用平台(图,,)。 我们也研究了硫化孕烯醇酮的类似物对,,,,的作用,结果表明,,,,的幅度可以显著地被, ,,,孕烯醇酮和孕酮所抑制(图,,)。给,删孕烯醇酮前,,,,幅度的绝对值为,,(,,?,(,, ,,,给药,,一,, ,, , ,,,,幅度的绝列值为,,(,,?,(,, ,,,二者具有显著性差异(,,,,,,,(,,)。给,州孕酮前,,,,幅度的绝对值为,,(,,?,(,, ,,,给药,,—,, ,,, ,,,,幅度的绝对值为,,(,,?,(,, ,,,二者具有显著性差异(,,,,,,,(,,)。统计表明加入,州孕烯醇酮和孕酮,,一,, ,,, ,,,,的幅度相对正常对照,分别为,,(,,?,(,,,(,,,,,(,(,,,图,,一,)和,,(,,?,(,,,(,,,,,(,(,,,图,,,,,)。二硫化孕烯醇酮抑制,,,,的作用部位 硫化孕烯醇酮对,,,,的抑制作用可能是改变了突触前神经递质的释放量,也可能改变了突触后受体对谷氨酸的反应性,或者二者同时被改变。为了说明硫化孕烯醇酮对,,,,的作用部位,我们分别从突触后和突触前两个方面进行了研究。 (一)硫化孕烯醇酮对突触后,?,,,受体无明显作用,硫化孕烯醇酮对微小兴奋性突触后电流的幅度没有作用 微小兴奋性突触后电流(,,,,,,,,, ,,;,,,,,,, ,,,,,,,,,,,; ;,,,,,,,,,,,,,,)是在无突触前刺激的条件下,在细胞外液中加入,,,和,,;,,,,,,,分别阻断白发动作电位引起的神经递质分泌和抑制性神经递质引起的突触后电流,而得到的由突触前神经末梢囊胞自发释放谷氨酸引起的微小兴奋性突触后电流。,,,,,,的特点是单个,,,,,在大多数情况下是由突触前单个囊胞释放神经递质引起的反应,因此,,,,,,,的频率可以反映突触前囊胞释放的频率【,,】,,,,,,,的幅度可以反映突触后受体的敏感性,这些指标已被广泛用于突触前递质释放量和突触后受体敏感性的研究中.
本文档为【硫化孕烯醇酮对前边缘皮层内侧区诱发兴奋性突触传递的作用和机制】,请使用软件OFFICE或WPS软件打开。作品中的文字与图均可以修改和编辑, 图片更改请在作品中右键图片并更换,文字修改请直接点击文字进行修改,也可以新增和删除文档中的内容。
该文档来自用户分享,如有侵权行为请发邮件ishare@vip.sina.com联系网站客服,我们会及时删除。
[版权声明] 本站所有资料为用户分享产生,若发现您的权利被侵害,请联系客服邮件isharekefu@iask.cn,我们尽快处理。
本作品所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用。
网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽..)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
下载需要: 免费 已有0 人下载
最新资料
资料动态
专题动态
is_562397
暂无简介~
格式:doc
大小:39KB
软件:Word
页数:13
分类:
上传时间:2017-12-03
浏览量:15