非特异性酯酶染色[指导]非特异性酯酶染色[指导]
非特异性酯酶染色检查的标准操作程序(SOP)
实验室名称 项 目 编 号 制定日期
非特异性酯酶染色检查 细胞室 **** ****年**月**日 【目的】
指导非特异性酯酶染色检查。
【该SOP变动程序】
本标准操作程序的改动可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字:专业主管、质控主管、科主任。 【染色原理】
作用于短链脂肪酸的酶,称为“非特异性酯酶”。此酶将乙酸α,萘酚水解,产生萘酚,萘酚再与重氮盐偶联,形成不溶性的有色沉淀物,定位于酶活性存在处。
【用途...
非特异性酯酶染色[指导]
非特异性酯酶染色检查的标准操作程序(SOP)
实验室名称 项 目 编 号 制定日期
非特异性酯酶染色检查 细胞室 **** ****年**月**日 【目的】
指导非特异性酯酶染色检查。
【该SOP变动程序】
本标准操作程序的改动可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字:专业主管、质控主管、科主任。 【染色原理】
作用于短链脂肪酸的酶,称为“非特异性酯酶”。此酶将乙酸α,萘酚水解,产生萘酚,萘酚再与重氮盐偶联,形成不溶性的有色沉淀物,定位于酶活性存在处。
【用途】
急性白血病的鉴别,急性单核白血病阳性,亦称“单核细胞酯酶”。
【试剂配置】
1)固定液,10,甲醛生理盐水。
2) 0.05mol/L磷酸缓冲液
0.067mol/L磷酸氢二钠 44ml
0.067mol/L磷酸二氢钾 12ml
3)作用液
0.05mol/L磷酸缓冲液 40ml
1%乙酸α,萘酯(以丙酮做溶剂)0.4ml振荡。溶解后加蒸馏水0.4ml
坚牢蓝B,40mgrj溶解,过滤
4)1%甲绿水溶液。
【染色步骤】
1(固定:新鲜血或骨髓涂片,置10%甲醛生理盐水中10分钟。
2(水洗:自来水冲洗5分钟。
3(孵育:放入作用液1小时。
4(水洗:自来水冲洗5分钟。
5(复染:1%甲绿染5分钟。
6(水洗:晾干,镜检。
【对照标本】
染色步骤同上,作用液中减去乙酸α,萘酚。 【结果判断】阳性反应为棕黑色片块状沉淀,定位于胞浆中。计数方法如下:
0 胞浆呈原色。
+ 胞浆呈棕灰色,无颗粒。
++ 胞浆呈棕黑色,云絮状。
+++ 胞浆呈黑棕色,云絮状。
++++ 胞浆呈深黑色,云絮状。
【临床意义】
在中性PH值,用乙酸α,萘酚做底物时,单核细胞呈阳性反应,其强度随细胞发育成熟而逐渐增加。巨噬细胞、巨核细胞、血小板与淋巴细胞也偶见,其他血细胞则呈阴性或弱阳性反应。
【注意事项】
1.涂片宜新鲜,不超过两天为宜。
2.重氮盐的选择,以坚牢蓝B,坚牢蓝RR和坚牢蓝黑B重氮盐为好,使酶反应产物呈颗粒状,定位清楚。
操作人员 部门主管 质量负责人 姓名 王烈 日期 04年07月15日
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