铜蓝蛋白(CP)检测试剂盒(胺比色法)
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铜蓝蛋白(CP)检测试剂盒(胺比色法) 简介:
铜蓝蛋白(Ceruloplasmin,CP)又称为亚铁氧化酶或铜蓝蛋白氧化酶,是存在于肝脏、肾脏、血清等中的α2-糖蛋白,每个CP分子含有6-8个铜原子,固呈蓝色。CP具有铁氧化还原酶活性,能使Fe2+氧化为Fe3+。CP酶活性并非与一,可不Fe3+、联苯胺、二甲基二苯胺、联大茴香胺等底物反应,可据此检测CP活性。
Leagene铜蓝蛋白(CP)检测试剂盒(胺比色法)其检测原理是待测样品在弱酸条件下,CP催化胺底物,生成淡棕黄色产物,终止反应后生成紫红色溶液,通过分光光度计检测540处吸光度值,根据公式可计算出CP活性。该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
组成:
编号 TE0321 Storage 名称 50T
试剂(A): CP Assay buffer 50ml 4?
试剂(B): 胺基质液 10ml 4? 避光
试剂(C): CP终止液 250ml RT
使用说明
书
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1份
自备材料:
1、 蒸馏水
2、 比色杯
3、 分光光度计
操作步骤(仅供参考):
1、 准备样品:
?血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备,可以直接用于本试剂盒的测
定,尿液通常也可以直接用于测定,-70?冻存,用于CP的检测。
?细胞或组织样品:取恰当细胞或组织进行匀浆,低速离心取上清,-70?冻存,用于
CP的检测。
,高活性样品:如果样品中含有较高活性的CP,可以使用CP Assay buffer稀释。
?(选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度,以便于后续计 算单位蛋白重量组织或细胞内的CP含量。
2、 CP检测:按照下
表
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设置测定管?、测定管?,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免
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产生气泡。如果样品中的酶活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
测定管?(5min管) 测定管?(15min管)
血清、匀浆液等 0.05ml 0.05ml
CP Assay buffer 0.75ml 0.75ml
水浴,平衡温度。
胺基质液(提前预热至30?) 0.2ml 0.2ml
准确孵育。 准确孵育。
CP终止液 5.0ml(立即混匀,取出) 5.0ml(立即混匀,取出)
3、 分光光度计540nm处检测吸光度值,1.0cm光径,蒸馏水调零,读取各管吸光度值。
一般应数小时内检测完毕。
计算:
CP国际活力单位的定义:在最适pH和底物浓度下,1min能催化1μmol底物所需的CP酶量为一个国际活力单位。其计算公式如下:
CP活力(IU/L)=(-)×6×1000/(10×0.05×9.46)=(-)×1.268×1000 AAAA15min15min15min15min式中:A=15min管的吸光度值 15min
A=5min管的吸光度值 5min
6=反应液总体积
10=孵育时间差值
0.05=样品用量(1ml)
9.46=吸光系数
注意事项
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:
1、 待测样品一般采用血清,4?可稳定3天,-20?可稳定1个月。 2、 用含有柠檬酸、EDTA抗凝血对本法测定有一定干扰注意。
3、 实验全过程注意控制温度和pH值。
4、 加入CP终止液后,应立即混匀以终止酶促反应。
5、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期:12个月有效。
浙公网安备 33021202002483