杜仲单侧输尿管梗阻大鼠肾间质α平滑肌肌动蛋白纤维化的影响

杜仲单侧输尿管梗阻大鼠肾间质α平滑肌肌动蛋白纤维化的影响 发生改变，发生破裂，促进结石的排出。菟丝子、枸杞子、金樱子补益肾气，增强输尿管蠕动，从而推动结石下移。石苇、车前子、金钱草,滑石、冬葵子、瞿麦、牵牛子清热利湿通淋，可使尿量增加，从而对结石起到冲刷作用。 本实验光镜的结果显示，化瘀补肾下石中、高剂量组，肾小管病变明显减轻，肾小管内紫蓝色草酸钙结晶少见，分布局限。提示化瘀补肾下石颗粒能降低肾组织中草酸和钙的含量，有效抑制草酸钙结石的形成，减轻肾组织的病变，和排石颗粒组比较作用更强，其机制可能是该配方中某些物质抑制草酸在肠道内吸收，抑制羟乙酸和乙醛酸向草酸的转化，从而使草酸形成减少。近年研究发现草酸溶液可以引起肾上皮细胞膜小叶自内向外磷脂酰丝氨酸结构的重排，这种细胞膜 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 面特性的改变可以促进草酸钙结晶的黏附【,】，草酸钙结晶附着的细胞膜区域富含磷脂酰丝氨酸、唾液酸和粘多糖(如透明质酸)，通过酶方法移除唾液酸或透明质酸从而破坏该区域可以明显减少结晶的黏附【,】。通过光镜观察结果表明经化瘀补肾下石颗粒治疗后大鼠肾小管上皮细胞破坏不明显，腔内渗出物及沉积物与模型组相比明显减轻，表明化瘀补肾下石颗粒能使肾组织细胞器结构稳定，有保护肾组织细胞的作用。其机制可能是该配方中某些物质阻止肾上皮细胞膜表面特性的改变，通过酶方法移除唾液酸或透明质酸而减少结晶的黏附。 本实验血清生化尿生化指标提示化瘀补肾下石法能显著降低肾结石大鼠血清;,,，、尿酸及肾组织草酸，增加肾结石大鼠尿量、尿,,,，与尿尿酸的排泄含量，提高血,,,，尿,矿，含量，并能改善大鼠的肾功能。高血钙可引起高钙尿，易形成含钙的尿石，血清钙的含量模型组最高， 证明 住所证明下载场所使用证明下载诊断证明下载住所证明下载爱问住所证明下载爱问 造模成功，化瘀补肾下石中、高剂量组最低，说明其具有降低血钙浓度起到防治结石的作用。化瘀补肾下石中、高剂量组血清,;,明显低于模型组，这一结果说明，模型组肾功能受损，另一方面说明化瘀补肾下石法具有改善肾小球排泄作用，能有效保护肾功能，提高肾小球滤过率，防止氮质血症发生。镁离子是抑制结石形成的物质，本实验也发现血镁、尿镁与肾结石发病呈负相关。其机制可能是镁能与小肠和尿中的草酸盐结合生成比草酸钙更易溶解的镁一草酸盐复合物，增加草酸钙的溶解度，降低尿中草酸钙饱和度和增加尿柠檬酸盐的排泄，起到抑制草酸钙结晶生长和集聚的作用。血镁含量化瘀补肾下石组最高，从而起到防治结石的功效。实验结果还表明化瘀补肾下石法具有明显增加大鼠尿量的作用，其利尿作用存在剂量依赖性，提示本方通过减少草酸钙结晶在肾脏的沉积，从而发挥防治尿路结石的功效。总之化瘀补肾下石法可以降低肾组织草酸含量，保护肾组织，改善肾功能，降低血钙浓度，增加镁离子的含量，增加肾结石大鼠尿量，从而抑制结石形成，其作用机制是综合而复杂的，可能与其减少结石形成的危险因素，增加尿中的结石抑制物，促进肾小管上皮细胞的修复，利尿，增强肾盂输尿管的蠕动等有关。其整体疗效优于排石颗粒，其疗效机理是综合的、全面的，具体的作用机制有待于进一步深入研究。慢性毒理实验表明，化瘀补肾下石颗粒安全可靠，无毒副作用。 参考文献略。 ,,,,杜仲对单侧输尿管梗阻大鼠肾问质,耳滑肌肌动蛋白纤维化的影响 宋恩峰 丁庆余 刘蒙 武汉大学人民医院 各种慢性肾脏疾病，随着病情的进展，最终都将导致肾小球硬化及肾小管问质纤维化，从而进展为终末期肾脏疾病(,,,,)。过去一直认为肾功能衰竭是由于肾小球病变所致，然而近年来大量研究表明，在各种原因导致的慢性肾脏疾病进展过程中，,,,,与肾小管间质纤维化的关系较与肾小球损伤的关系更为重要【,】。如何延缓肾纤维化的进程，保护肾功能，已经成为治 疗肾纤维化的关键问题。 中药杜仲是是我国名贵的滋补中药材，在中药古典《神农本草经》、《本草纲目》中就被列为药之上品。近年来。国内外许多学者对杜仲的化学成分和药理作用进行了大量研究，发现杜仲具有调节血压、降低血糖、调节血脂、抗菌、抗病毒、抑制肿瘤细胞生长等药理作用，以及延缓衰老、美白养颜、滋阴补肾、强壮筋骨等功 ,,,效。其是否具有抗肾间质纤维化的作用仍未明了。目前尚未见杜仲对单侧输尿管结扎(,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,;,,,,，,,,)大鼠,,,,、;,,,,,和,,影响的报道。 因此，本课题旨在观察中药杜仲对,,,大鼠肾脏病变的保护作用并探讨其作用机制。具体的说，本实验观察,,,大鼠肾脏,,,,、,,,,,,和,,表达，血液生化指标及肾脏病理学的变化，探讨,,,,、,,,,,和,,在纤维化进程中的作用:同时给予中药杜仲干预治疗，探讨其是否通过影响上述指标表达而发挥治疗作用材料与方法,(实验动物清洁级,,雄性大鼠,,只(武汉大学人民医院动物中心提供)，体重,,,,,,,,。温度(,,士,)?，相对湿度为 (,,士,),，定时目光灯照射,,,,,，房间保持通风、恒温、安静，定期更换垫料，清洗笼具。,(动物模型的建立与分组建立单侧输尿管结扎(,,,)诱导肾间质纤维化大鼠模型，方法参照文献报道【,】:,,,水合氯醛,(,,,,,,,,腹腔注射麻醉大鼠，取右侧卧位，背部左肋下备皮，常规消毒，选左侧背部肋下,(, ;,为切口，打开腹腔，游离左肾及左侧输尿管，将左侧输尿管用组织钳托起，取中上段，用止血钳夹住，在两端用丝线结扎后剪断左侧输尿管，然后逐层缝合;假手术组打开腹腔后即缝合。随机分为,组:模型组、假手术组、厄贝沙坦组和杜仲组。每组各,只，组闻大鼠体重无统计学差异。手术前,,开始给药，假手术组、模型组均给予等量生理盐水灌胃;厄贝沙坦组给予厄贝沙坦,, ,,?,,—,(,,,、杜仲组给予杜仲, ,(,,(,,,(,(用药量相当于成人每天每公斤体重的,,倍)灌胃。,(标本的收集术后第,周脱髓处死所有大鼠，,,,水合氯醛以,(,,,,,,,,腹腔注射麻醉大鼠，从颈总动脉采血，离心分离血清，用于测定血生化指标;剖取左侧肾脏，剥离包膜，用,,,中性甲醛溶液固定，石蜡包埋切片，以,,,,的石蜡切片，常规行,,和,,,,,,染色，其他切片用于免疫组化分析,‘,(肾组织病理光镜检查取左侧肾组织，用,,,中性甲醛溶液固定，石蜡包埋切片，以,,,的石蜡切片行,,、,,,,,,染色。双盲法观察肾皮质问质变化情况。肾小管间质损害程度按,,,,,,,方法进行半定量分级:,级:正常:，级:肾小管上皮细胞轻度萎缩、变性，坏死轻，呈灶性分布，少量散在炎性细胞浸润，纤维组织增生成小灶状、少量分布。病变范围,,,,;，，级:肾小管上皮细胞中度萎缩、变性，坏死轻，炎性细胞浸润，纤维组织中度增生，病变范围,,,,,,,;?级:肾小管上皮细胞萎缩、交性和坏死重，呈片分布，大量弥漫或聚集成灶的炎性细胞浸润，纤维组织增生呈束状、多灶或网状成片，?病变范围,,,,,观察连续不重叠的,,个高倍皮质视野，综合进行评定。光镜下观察肾脏组织皮质区肾小管及间质的结构及变化。切片在,,，,,(,,,,高清晰彩色病理图象分析软件上，每张切片随机选取,个高倍视野，测定一定面积内阳性信号面积和阳性信号平均灰度值，阳性信号指数(,，(),阳性信号面积×阳性信号平均灰度,测定面积。 ‘,(免疫组织化学染色及结果分析免疫组织化学染色使用,,法，实验中每次染色时均同时以,,,液替代一抗作阴 性对照。镜下观察结果，肾实质及间质细胞胞浆内棕褐色颗粒为阳性。,(统计学处理以均数,, 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 差(,士,)表示，用,,,,,,(,统计软件进行统计学分析，计数资料采用卡方检验，多组计量资料间比较采用单因素方差分析，以,,,(,,为统计学差异的标准。结果,(大鼠血尿素氮及肌酐水平的变化造模后,,,组大鼠血尿素氮及肌酐均明显升高，与假手术组相比，差异均有统计学意义(,,,(,,);两治疗组相比，上述指标差异无显著性，无统计学意义(,,,(,,)。见表,。 表,各组大鼠,;,、,,,的变化注:与正常对照组比，?,,,(,,;两治疗组相比，,,,,(,,,(肾脏病理观察结果,(,肾脏肉眼观察结果假手术组肾脏大小形态正常，颜色暗红，,,,组结扎侧肾脏肿大，颜色变浅，有囊性感，内含混浊尿液，肾实质变薄。,(,。肾组织,,和,,,,,,染色光镜观察结果光镜下假手术组肾小球及肾小管间质正常，模型组肾小管上皮细胞弥漫空泡变性，多数肾小管扩张、萎缩，间质多灶状单核细胞浸润和纤维化。而厄贝沙坦组和杜仲组相仿，间质内炎细胞则呈小灶性浸润，少许上皮细胞肿胀，少部分肾小管轻度扩张，肾间质未见明显纤维化。,,,,,,染色见假手术组肾脏的胶原染色主要位于肾小球基膜、,,,,,,囊、系膜区和肾小管的毛细血管周围，而肾小管周围间质部分则比较狭窄;,,,组可见肾间质大量胶原纤维增生，间质胶原纤维呈蓝色染色，间质纤维化呈灶状分布，肾小球病变不明显，偶见肾小球局灶性节段性硬化;治疗组上述改变均有所减轻。各组‘,,:,，管间质病理分级见表,， 表,各组。肾小管间质的病理改变(,),(肾组织免疫组织化学分析,,,,、,(,,,和,,的表达分布假手术组大鼠肾小管上皮细胞胞浆、肾小球脏层,二皮细胞和内皮细胞、间质血管壁有少量表达，染色为颗粒状，着色稀疏;,,,组肾小管上皮细胞胞浆中表达明显增多，呈不均匀颗粒状，且与局部炎细胞浸润、间质增宽以及肾小管损伤程度一致，肾小球表达不明显;两治疗组表达均较,,,组明显降低，但仍较假手术组明显。,,,组,,,,、仅(,,,和,,免疫组化,,值较假手术组明显上调(,,,(,,)，提示,,,,、,,,,,和,,在,,,大鼠肾小管上皮中表达明显增强;两治疗组,,值均较,,,组降低(,,,(,,)，但仍高于假手术组(,,,(,,);两治疗组间比较，无显著性差异(,,,(,,)。提示杜仲和厄贝沙坦均可抑制,,,,、;,,,,,和,,在,,,大鼠肾组织中蛋白表达的上调;然而杜仲的作用不如厄贝沙坦明显，但二者亦无显著性差异。见表,表,各组大鼠,,,,,,,,、;,,,,,和,,的,，值变化(,士,) ,,,组别 例数 ,,,, ,,,,, 刚 注:与正 常对照假手术组 , ,(, ,士,(,, ,(,,,士,(, , ,(,,:,,,(,, 组比，,,,组 , ,(,,士,(,,, ,(,,,,,(,,” ,(,,士,(,,” ?,,,(,,厄贝沙坦组 , ,(,,士,(,,,, ,(,,,,,,(,,,, ,,,,士,(,,,, ;与,,,杜仲组 , ,(,,士，(,,,, ,(,,士,(,,,, ,(,,士,(,,?? 组比，,,,,(,,讨论 (肾间质纤维化(,,,,, ,,,,,,,,,;,,,,,,,, ,,,,,,,,)是各种原因所致的肾脏疾病慢性进展，最终导致肾功能衰竭的共同机制，其主要病理基础是细胞外基质(,,,,,;,,,,,,,,,,,，,,,)代谢失衡，在间质异常积聚。目前研究认为其发生机理可能如下, , ,,，一方面，间质炎细胞浸润和各种细胞因子释放，成纤维细胞激活和肾小管上 皮细胞表型转化，生成肌成纤维细胞(,,,,,,,,,,,,,，,,)，,,具有强大的增殖、分泌能力，可产生过多的,,,成分;另一方面，调控,,,代谢的基质降解酶系统(,,,,厂,，,,,系统和,,,,,，系统)在各种细胞因子、细胞等因素作用下发生功能紊乱，使,,,降解减少。单侧输尿管梗阻动物模型是研究单纯性肾间质慢性炎症和肾间质纤维化的理想模型。有学者发现，与对照组相比，,,,大鼠梗阻侧肾组织,,,, ,,,,随着,,,(,而显著上调，继之出现,, ,,,,明显上升，,,,,,,,,显著增加,霹叠。本实验免疫组化的结果显示:假手术组肾小管上皮细胞、肾间质细胞有较弱,,,,表达，其余各组大鼠的肾间质中均有不同程度的表达，表现为黄褐色颗粒状沉积，尤其在模型组。术后,周，,,,组、厄贝沙坦组与假手术组相比较，,,,,、,,,,,和,,表达呈显著性增强(,,,(,,)，,,,,、,,,,,和,,在厄贝沙坦组的表达显著减弱于模型组(,,,(,,)。厄贝沙坦是血管紧张素，，(,,,，，)受体拮抗剂，它通过竞争性与其受体结合，阻断,,, ，，所致的外周血管收缩、交感神经兴奋和压力感受器敏感性增加从而降低系统血压，在全身降压的同时选择性扩张出球小动脉，降低肾小球内压力，改善肾功能。,,,，对于肾脏的保护作用无论在动物模型还是在人类肾脏疾病中都已得到肯定。大量研究显示,,,，在降低血压、减少尿蛋白、改善肾小球和小管间质损伤以及保护肾功能上具有相同的效果嘲。 杜仲的主要功效成分有木脂素类、环烯醚萜类、苯丙素类、黄酮类、多糖类、杜仲扩真菌蛋白，此外杜仲还含有丰富的营养成分有氨基酸、脂肪酸、维生素、微量元素等。杜仲具有调节血压、降低血糖、调节血脂、抗菌、抗病毒、抑制肿瘤细胞生长等药理作用，以及延缓衰老、美白养颜、滋阴补肾、强壮筋骨等功效。我国名贵的滋补中药材，在中药古典《神农本草经》、《本草纲目》中就被列为药之上品阎。本实验也证明可抑制,,,,、,,,,,和,,在,,,大鼠肾皮质中表达的上调。提示杜仲可能通过抑制,,,,、,,,,,和,,在,,,大鼠肾小管上皮表达的上调，从而延缓肾小管损伤及间质纤维化的进展。其机理可能如下，一方面，可通过对,,,,、,,,,,和,,表达的下调减少间质炎细胞浸润和各种细胞因子释放，成纤维细胞激活和肾小管上皮细胞表型转化，生成肌成纤维细胞，并产生过多的,,,成分;另一方面，通过对,,,(,表达的增强，上调,,,代谢的基质降解酶系统(,,,,,,，,,,系统和,,,,,，系统)，在各种细胞因子、细胞等因素作用下使,,,降解。总之，杜仲抗肾纤维化的治疗作用是值得肯定和芯俊,纯赏种疲茫裕牵啤?幔樱停梁停疲蔚谋泶铮佣种葡宋慕埂,牵淙非蟹肿踊粕杏写诹俅步徊窖芯俊?参考文献略。