强碱性尿液中假性蛋白的鉴定

强碱性尿液中假性蛋白的鉴定 ?498?山西医药杂志2003年10月第32卷第5期ShanxiMedJ,October2003,Vol32,No.5 结核分枝杆菌的检验与分型 山西省临床检验中心(030012)戎建荣 山西医科大学第一医院王淑峰 结核杆菌感染率高,患病率高,耐药率高,病死率也高. 自20世纪8O年代以来,结核杆菌引起的感染明显回升.因 此提高结核菌阳性率的 检测 工程第三方检测合同工程防雷检测合同植筋拉拔检测方案传感器技术课后答案检测机构通用要求培训 ,可为结核病的早期诊断,治疗 和预防提供可靠依据.结核分枝杆菌的临床检验与分型综 述如下. 1涂片法 对结核病早期诊断起着重要作用.涂片法要求涂抹面 积为涂膜厚薄要均匀.采用萋尼染色抗酸染色,要求每个涂 片至少要检测300个油镜视野.金胺石炭酸染色法荧光染 色至少要有检测30个视野,此方法比抗酸染色法阳性检出 率高,但特异性不如抗酸染色法.涂片法的结果评价及报告 见表1. 衰1抗酸菌涂片评价及报告抗酸菌数量 2分离培养法 由于涂片法存在假阴性的结果,而且不能鉴别结合菌 的存活情况,可以分离培养法为金 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 . 结核菌的培养方法主要有以下几种:?以鸡蛋为基础 的培养基,常用罗氏培养基.?以琼脂为基础的培养基:米 氏7H系列琼脂培养基可用于药物敏感试验.?选择性培养 选择性培养基L—J— 基:可以与非选择性培养基联合使用, Grugt含有青霉素,奈丁酸,Mycobactosel,培养基含有放线 酮,林可霉紊,綦啶酸,Mitchison选择性培养基7HllS含有 羧苄西林,多粘菌素B,TMP和两性霉素B.?液体培养基: 米氏7H9和吐温一白蛋白一肉汤培养基常用于保存菌株, 药敏试验和其他体外实验.如鉴定试验和增茵培养等. 3快速结核分枝杆菌药敏试验 快速结核分枝杆菌药敏试验(micobacteriumgrowth inhibitortube,MGIT)是在结核杆菌培养基中加入异菸肼, 利福平等药物以及荧光指示剂.荧光在有氧时淬灭,如果细 菌存活进行代谢而耗氧又复发荧光.在365紫外线灯下观 察有无荧光而判断敏感或耐药.试验需要仅4,5h.这是因 为将荧虫酶的基因导入结核杆菌的嗜菌体,嗜菌体只侵入 活的结核菌而发出荧光.将菌体与一定浓度药物作用后,如 茵体存活将感染嗜茵体,可在荧光显微镜下观察到荧光,即 为耐药;无荧光者为敏感菌. 4利用RFLP技术进行结核菌分型 采用(restrictionfragmentlengthpolymorphism, RFLP)技术,利用结核分枝杆菌插入序列(insertion sequence,IS)IS6100中的片段为探针,可以在结核杆菌的 DNA水平进行鉴定和分型,有利于流行病学调查和结核病 的爆发流行调查,普查社区中的结核病的传播及MDR菌 株的传播等.IS6100只存在于结核分枝杆菌复合基因组 中,以PVU—I切割并以245BP探针杂交,可以出现8,23 条带,可用于流行病学 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 . 4.1菌株;结核分枝杆菌标准菌株为H37RV (ATCC327294)和减毒结核分枝杆菌H37RA (ATCC35835).测定菌株经改良锣氏培养基培养,并鉴定为 结核分枝杆菌. 4.2染色体DNA的提取和纯化:灭活的结核菌培养物以 溶菌酶SDS和蛋白酶K消化过夜,酚/氯仿/异丙醇(25;24: 1),重复抽提后,无水乙醇沉淀,自然干燥,重复悬浮于TE 中,于紫外分光光度仪上测量其Az.和A:..的值以确定DNA 的含量及纯度. 4.3Southern转印和杂交:分离纯化的DNA2腿经PvU 1消化后,以EMBDEN方法分离DNA片段,并合成探针, 以荧光素标记的DNTP随机引物试剂盒进行标记,分离的 DNA片段仅毛细管转印到尼龙薄膜上,于60?以变性的 245DP探针杂交过夜.杂交后在同样温度下洗涤探测杂交 信号. 4.4DNA指纹分析:统汁各株IS6100指纹的拷贝数,比 较相同拷贝数的带型分布. (收稿日期:2003—04—29) 作者简介:戎建荣,男,1963年3月生,主管技师,山西省临 床检验中心,030012 强碱性尿液中假性蛋白的鉴定 山西省人民医院(030012)杨秀峰苏小妹 尿液检验中,会遇到镜检正常而蛋白检测高,应考虑假 阳性蛋白,现将临床所遇3例报告如下. 1资料与方法 1.1典型病例:例1,男性,50岁,为门诊正常体检者随机 尿液检测;蛋白卅,镜检:有大量非晶形磷酸盐结晶.例2:男 性,48岁,为住院病人,蛋白++,WBC偶见.例3:女性,40 岁,为住院病人,蛋白+,RIM:偶见,少量非晶形磷酸盐结 晶.3例尿液标本蛋白均高,而镜检基本正常. 1.2检测方法:?滴加几滴冰醋酸,使尿液变成弱酸性,再 做干化学检测.?用湿化学法测蛋白:用磺柳酸法检测蛋 西垦药志2003年10月第32卷第5期ShanxiMedJ.October2003,Vol32,No.5 白.?测白蛋白,微球蛋白定量.?除外尿液被季胺盐类化 合物及某些防腐剂污染. 2结果 2.13例患者检验结果:见表1.尿液标本均未被季胺盐类 化合物及某些防腐剂污染. 表1尿液检测结果 方法 病例滴加磺柳 冰醋酸法酸法 例1一 例2一 例3一 白蛋白定量p2微球蛋白定量 mg/Lmg/L 9 12 14 1.6 1.8 1.7 3讨论 在尿液检验中,蛋白很高,但镜检未见异常或偶然见到 ?499? 红细胞(RBC),WBC和部分盐类,遇到这种情况,首先要观 察pH值,如果pH为强碱性>8,就要考虑假阳性蛋白,做进 一 步鉴定确诊.尿液干化学检测是根据指示剂的蛋白质误 差原理,膜块区含有酸碱指示剂澳酚盐(pH阈3.O,4.6)枸 橼酸缓冲系统及表面活性剂,在pH3.2时,澳酚蓝产生阴 离子,与带阳离子的蛋白质(白蛋白)复合物或结合,呈现颜 色反应,在强碱性尿中(pH>8)可产生假阳性结果,因为在 碱性环境中,澳酚蓝指示剂本身显示蓝色,导致干化学检测 时出现假阳性结果. (收稿日期:2003—03—12) 作者简介:杨秀峰,男,1970年1月生,技师,山西省人民医 院,030012 药品微生物限度检查的探讨 运城市药品检验所(044000)文玉辉 微生物限度检查是保障药品使用安全的重要工作.随 着人们对药品认识的提高,药品微生物限度检查越来越受 到人们的普遍关注,如何能准确地反映药品受污染的程度, 保证人民大众用药安全,是摆在药学工作者面前的一个重 要课 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 . 1正确认识被污染的药品中微生物的特点 活体易变性:菌细胞在药品中处于不稳定状态,可随时 间延长死亡,也可在适宜条件下增生.当保存条件稳定时, 其污染量在一定时间内处于动态平衡,总体污染状况可以 在标准化的条件下予以正确评估. 分布不匀:除产品在生产前期污染外,通常是局部的, 一 批产品中不同瓶(盒)中污染的状态会出现差异,其污染 量特别是致病菌通常是少量的.正确的检验有赖于合格的 抽样法. 多数处于受损伤状态,药品中污染的微生物受到原料 处理,加工等过程的影响,或者药品本身对微生物的抑杀作 用使其受到一定程度的损伤.这些受伤的微生物用一般的 方法检验,往往会出现假阴性,或计数偏低的结果. 生态环境多样复杂,污染菌的来源多样,种类多样,加 上药品种类繁多,剂型成分复杂,同一种菌在不同的药剂中 所测得的结果各不相同. 2必须保持检验样品的原污染状态 要保证检验结果正确可靠,在检验过程中必须保持检 验样品的原污染状态.防止再污染,防止再繁殖或死亡. 2.1操作环境无菌:?无菌室面积10m左右,高度?2.4 m.其洁净度要达到10000级(沉降菌/皿?3个,浮游菌? 100个/m),操作台的洁净度要达到100级(沉降菌/皿?1 个,浮游菌?5个/m).室内温度18,26?,湿度:40, 65,因此,无菌室位置应放在二层楼以上,远离污染源.? 无菌室陈设尽量简单,且物品不得带出.实验前紫外灯3O min杀菌.消毒液擦拭实验台.?非检验人员不得入内,检 验人员按规定进入无菌室,且在实验完成前,不得离开无菌 室.整个操作过程,操作台上点燃酒精灯. 2.2实验用 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 ,皿具必须无菌:?培养基,稀释液每次根 据样品的多少配制,一般在2周内用完.培养基经灭菌后应 进行预培养,以保证培养基的无菌度.?皿具干净无污染: 实验用的天平,手术剪及玻璃器皿,必须按规定消毒,灭菌. 尤其玻璃器皿要清洗内外壁不挂水珠.一定要把洗涤剂清 洗干净,否则影响检验结果. 2.3人员素质:做好微生物限度检验,检验人员的职业品 德和业务素质至关重要.?检验人员要树立全心全意为人 民健康服务的思想.检验结果既要对病人负责,又要对企业 负责.?对技术精益求精:微生物限度检查要求检验人员既 有微生物学知识,又有药学知识#既有无菌操作技能,又有 分析操作能力,而且操作还要有一定的速度. 3目前现状和改进建议 我国按剂型制订微生物限度标准.同一剂型各品种的 组成成分差异较大,一个标准不能反映微生物污染的复杂 性及多样性,也不能反映管理水平.按品种制定微生物限度 标准,克服上述弊端,有利于提高产品的微生物质量.应投 入大量的人力,物力,有组织有步骤研究以品种制订微生物 限度标准的工作. 药品中的污染的微生物处于损伤状态,而我国规定稀 释剂采用0.9灭菌氯化钠溶液,0.9氯化钠溶液有抑菌 作用,应尽快采用能保护受损伤微生物的营养液作稀释剂. 供试品取样,应把两个包装的供试品全部混合再取1O g或10mL,检验结果更科学更准确. (收稿日期:2003—04—16) 作者简介:文玉辉,女,1964年3月生,主管药师,运城市药 品检验所.044000