海南椰子遗传多样性的研究（可编辑）

海南椰子遗传多样性的研究（可编辑） 海南椰子遗传多样性的研究 海南大学 硕士学位论文 海南椰子遗传多样性研究 姓名:柳晓磊 申请学位级别:硕士 专业:作物遗传育种 指导教师:汤华 20080501海南椰子遗传多样性研究 摘 要 椰子?删澹阳.为棕榈科椰子属植物,是热带果树种类中分布和 栽培面积最广的果树种类之一。目前关于海南本地高种椰子资源遗传多样 性、遗 传背景及其育种价值方面的研究结果报道尚属空白,严重影响了该地区椰子 资源 的收集评价和品种选育工作。本课题应用分子标记技术,首次系统地研究 了海南省个椰子栽培品种的亲缘关系和遗传多样性。主要研究结果如下: .对椰子反应体系进行了优化,确立了最适宜的体系:在反应 体系中,孑、引物和的最适浓度分别为.?,、.肛/、./; 聚合酶的最佳使用量为,模板应加入,引物最佳退火温 度比每对引物值较小者小.?。在参数优化的基础上,应用标记分析该反 应体系对个海南不同地区高种椰子样品进行分析,不同样品摘要间 谱带多态性丰富,说明该优化体系可靠,适合应用于椰子遗传多样性分析。 .分子标记多态性好、稳定性高,可用于椰子属种质资源的遗传多样性 研究。选取的对引物用于扩增,结果有对引物扩增出有效多态性片 段条,平均多态性百分率为.%,每对引物扩增出的带数.条不等, 平均为.条,每个位点的多态信息量变化于...之间, 平均为.。份 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 之间遗传相似系数变化范围...,说明海南椰子 栽培品种之间存在丰富的遗传多样性。聚类分析结果表明,个椰子栽 培品种分为四个类群和两个亚群。 .利用的方法,从分子水平上所得到的关于椰子栽培品种问的亲缘关 系的研究结果,与形态学研究的分类结果并不完全吻合。 关键词:椰子;;遗传多样性 . 础刀“谚朋.?刀“咖朋 锄 ,.’ . : 旷, .,锄. ’ , ./ , ?%.?。, 孑,.岬/ .曲 .~? 锄,仔肿 %觚 研 啪 .印 . ,. 甜 ,? . , 锄, 仔,锄 舯饥 耻 严。呐矗班. 埘 锄 . , 印 . 撕舶 .印 百舶 瓶...州 伍 .. . 舶 . 撕 曲 衔. 黟. 订 铲 . 露 叩百. “谚朋.;; 、:海南大学学位论文原创性声明和使用授权说明 原创性声明 本人郑重声明: 所呈交的学位论文,是本人在导师的指导卜.,独立进行研究 作所取 得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不含任何其他个人或集体 已经发表或撰写 过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以 明确方式标明。 本声明的法律结果由本人承担。 论文作者签名: 日期:冲舌月,阳 学位论文版权使用授权说明 本人完全了解海南大学关于收集、保存、使用学位论文的 规定 关于下班后关闭电源的规定党章中关于入党时间的规定公务员考核规定下载规定办法文件下载宁波关于闷顶的规定 ,即:学校有权保留并向 国家有关部门或机构送交论文的复印什和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权海南大 学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫 描等复制手段保存和汇编本学位论文。本人在导师指导下完成的论文成果,知识产权归属海 南大学。 保密论文在解密后遵守此规定。 疡绛 论文作者签名: 导师签名: 日期:娜释 日期:撕舻占月多日 本人已经认真阅读“高校学位论文全文数据库发布章程”,同意将本人的学位论 文提交“高校学位论文全文数据库”中全文发布,并可按“章程”中规定享受相关 权益。回童途塞逞銮丘进豆:旦坐生旦生;旦三三生筮查。 物筝 导师签名: 醐:栉石月哆日海南椰子遗传多样性研究 第章文献综述 .椰子的研究进展 椰子伽以“澹旭.属棕榈科椰子属椰子种单子叶植物。主要分布范 围为赤道附近北纬度到南纬度、海平面以上、 米以下的区域范围内 甜口正.,是典型的热带木本油料和食品能源作物,也是热带沿海生 态防护林建设和园林绿化的重要植物,在全世界个国家和地区广泛种植刘 立云等,。 ..椰子的主要用途及利用价值 椰子可谓全身是宝,椰子的综合利用也相当充分。椰子是一种绿色健康食品, 一般发育个月嫩果椰子水便可直接饮用,椰子水营养丰富,含维生素、维生 素、激素、糖分及各种氨基酸,是人们喜爱的清?饮料;并可治胃炎、腹泻、 呕吐,有利尿、防体内脱水等功效;椰子水可发酵成酒、醋,可用作组织培养剂, 也可用于生产椰纤果,用途广泛。椰子肉营养丰富,可当水果生食,香甜可口, 也可制成椰片、椰子饼等。椰肉主要用于加工成椰干,再深加工成椰子油和椰麸。 椰子油是制皂等工业原料,是肥皂、洗涤剂、牙膏等产品的发泡剂;椰子油可精 炼成植物油供食用,具有提高人体免疫力、防止动脉硬化等保健功能,是重要的 保健食品。另外,椰子油也可用于生产高级化妆品。椰子副产品用途十分广泛。 椰衣中果皮可加工成椰子纤维,做绳缆、扫把、地毯等;深加工后可做成椰 棉纤维薄挚、沙发垫、体育用垫和汽车座垫等。椰糠椰衣粉吸水能力强,是 很好的盆栽基质,其含钾丰富是优质有机肥源;工业中用其制作绝热板、地板、 花砖、纸浆、活性炭、炭砖以及醋酸、甲醇、糖醛、木素等。椰子壳质地坚硬, 冷热均不变形,不仅可生产椰雕、乐器、碗、勺等各种工艺品,还可烧制椰壳碳, 制造优质活性炭。椰子树干质地坚硬,花纹美观,是很好的木材来源,也可用来 制作家具和手工艺品。我国椰子加工业主要集中在海南,加工企业多家,已 成为海南的重要产业。椰子深加工技术和设备处于国际领先水平,且企业产品在 国内外已有一定销售渠道和市场。然而,由于椰子种植业明显滞后加工业的发展, 我国每年需从越南、印度尼西亚等国家进口多亿个椰子果董志国等,。 ..椰子育种现状 ...椰子常规育种方法 选择育种选择育种包括纯系选择育种、群体混合育种、无性系选择 育种等,即选择产量高、抗逆性强的单株母树或种群的椰子成熟果保温、保湿、 催芽,以培育高产后代。此法育种周期长,后代稳定性差,现在多与其它育种 方 法结合使用。海南大学届硕士研究生毕业论文 杂交育种杂交育种包括纯系杂交育种、集团育种、单株后代育种、回交 育种等,是椰子丰产栽培的第一步。一般选择矮种椰子作为母本、高种椰子作为 父本。技术上需要注意的是,高种椰子先开雄花,后开雌花,而矮种椰子雌雄花 期相同。此法属于有性育种。由于选择的亲本植株已有很高的产量和很好的抗逆 性,其后代性状也较稳定,故被世界各国所采用,且已培育出很多有名的品种。 如法国设在科特迪瓦的油料油脂研究所用西非高种与马来矮种椰子杂交育成的 杂交种第一代马哇,表现出生长快、生势旺盛、树干大小中等、早熟、植后. 年开花结果、产量高等特征,已在个国家推广种植;由中国热带农业科学院 椰子研究所用海南高种与马来矮种椰子杂交培育出的杂种第一代文椰,表 现出生长快、树干粗壮、早熟、植后.年开花结果等特征,产量比较高,比马 哇果实大,较抗风、抗寒。印度尼西亚培育的.杂种,年单株产果达 个;科特迪瓦培育的.杂种,年单株产果达个。印度马哈拉施特拉邦 西椰子研究站经过试验,从个椰子栽培品种中选出了个栽培品种和 个高种与矮种的杂交品种,这几个品种具有产油量高的特性,现已在印度广泛 推广。目前杂交育种是世界各国较普通采用的椰子育种方法。 ...生物技术育种 椰子传统的育种方法所需时问长、空间大、不确定性高,且可供选择的基因 库有限。为了克服这些缺陷,生物技术在椰子育种中扮演着越来越重要的角色。 目前常用且有成功报道的生物技术育种方法有椰子组织培养法和胚培养法。 组织培养法世纪年代以来,随着组织培养的发展,植物基因工程、 体细胞工程及单倍体育种在种质资源创新和新品种选育中的地位越来越重要。组 织培养的关键是培养基的配方,是否成功在于诱导激素量的控制。椰子组织培养 一般以花序和叶片作外植体诱导愈伤组织,再由不定胚在特定的培养基上获得再 生植株。另外也有利用花药培养形成不定胚、从原生植体形成愈伤组织的报导。 等首次报道可通过以椰子未成熟花序为外植体,经体细胞胚胎 途径实现植株再生;等再次研究经间接体细胞胚胎途径得到的 植株再生试管苗,但这种方法生产的试管苗不稳定,重复性不强。此外, 、等利用椰子成熟合子胚的胚芽组织作外植体进行培养, 实现植株再生。但迄今为止,椰子组织培养技术仍不能够达到体外无性繁殖的目 的。 胚培养法胚培养法比组织培养法成功。国际植物遗传资源研究/椰子遗 传资源协作网/于年月召开第二届椰子离体培养国际 讨论会,报道了椰子离体胚培养技术。利用该技术可简化种质资源的采集和保存 工作。胚培养的方法是取出成熟椰子果内的圆柱状胚,通过液体培养基使其肥大, 海南椰子遗传多样性研究 从胚上和幼根原基长出芽,下部形成吸器,再将出芽胚在固体培养基上培养,待 茎、叶和第一、二次根出现后,出芽胚即长成完全的幼植株。菲律宾利用这一技 术育种获得成功,并已在大田推广种植。斯里兰卡也在这方面的研究利用上取得 了较大进展。这一技术可以有效地收集、交流和保存遗传资源,并可加速抗病虫、 耐水分胁迫品种的培育。 ...对我国椰子育种工作的建议 加强种质资源保存目前我国保存的椰子种质资源不多,有些品种数量稀 少。首先,必须多收集国内不同变种及不同生态区的种质资源;其次,加强与国 外的种质资源交换。我国的椰子种植区地处热带北缘,属于热带季风气候,经常 有寒流与台风,经长期选择,海南高种已具备抗寒、抗风特性。因此,可有条件 地与其他国家进行种质资源交换,尽量收集保存多种椰子类型,为育种工作准备 丰富的材料。 加快文椰杂交种的推广步伐中国热带农业科学院椰子研究所培育 的文椰杂交种,具有投产早、产量高、抗风、抗寒性状好等优点,但该种 未得到推广。主要原因有:一是农民对该杂交种特性了解不够,种植热情不高; 二是生产杂交种苗成本较高,限制了杂交种的推广。目前可行的 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 有:在海南 东海岸各市县建立多个文椰丰产示范园,使椰子生产区的农民了解 种的优势;在各产区建立多个黄矮母本制种园, 培训 焊锡培训资料ppt免费下载焊接培训教程 ppt 下载特设培训下载班长管理培训下载培训时间表下载 当地农民的杂交制种技术及 相关的育苗技术,让农民自己生产杂交种苗,最大限度地降低种苗生产成本。 加强新的杂交组合研究可以考虑用国外引进的新品种与我国的海南高种 杂交,以便寻找更优良的杂交组合,作为技术储备。另外,随着人民生活水平的 提高,对椰子鲜果的需求越来越大,因此,可以考虑培育适合做鲜果饮用的椰子 杂交种,如泰国香水×海南高种、泰国香水×马来红矮等。 适当推广一些矮种椰子矮种椰子更适合做椰子鲜果用,销路更好。因此, 可以在海南适当发展一些矮种椰子,如泰国香水椰子、马来红矮等。 加强胚培养小苗移栽研究为了方便与其他国家进行种质资源交换,必须 掌握椰子试管苗的移栽技术,以便于国外种质资源的引进。 ..椰子遗传多样性的研究 椰子种质资源主要有野生种和栽培种,栽培品种中又可分为高种、矮种和杂 交种。椰子的种质资源收集包括本地资源收集和引进国外资源。国内外都非常重 视椰子种质资源的收集和保存。全球有个椰子研究机构,其中印度、斯里兰 卡、菲律宾、越南和中国等国的研究机构较有影响。最大的椰子种质资源库是印 度中央植物园作物研究所,该所收集和保存了份椰子品种资源, 这些品种资源分别来自南亚、东南亚、加勒比群岛、印度洋群岛、太平洋群岛和海南大学届硕士研究生毕业论文 非洲等国家和地区。中国热带农业科学研究椰子研究所也收集了丰富的椰子种质 资源高和琼等,。目前,有关椰子的引种栽培和分布历史的争议颇多。为 了解椰子的起源历史,美国国家地理学会出资万美金,资助华盛顿大学的生物 学家进行椰子遗传特性的研究。这项工作由华盛顿大学衄 博士和明 尼苏达植物园的研究专家 共同完成,主要通过椰子序列研究,来揭示 各椰子种群之间的历史关系。他们的研究内容包括:椰子的生物亲缘地理和原始 分布;人类活动对椰子种群结构均衡性的影响;野生种可能的地理分布 ..。 而在以往对椰子种质资源的收集和评价中,普遍使用了基于农业和形态学分 类的考察标准易小平等,。这些分类标准目前看来已经是一个极其耗时、 低效的评价方式,只能提供简单的品种特征甜以,。当前,应用基 于分析的分子标记方法,如刃以,、‖ 口正,、甜口正,、等在多年生果树种质资源分析中优 势明显。在众多的分子标记手段中,也以其高稳定性和高多态性的特点被国际椰子种质资源网 、?定为在椰子 种群遗传多样性分析中首选的分子标记方法。已被用于全球不同椰子分布区域 包括东南亚、非洲和太平洋地区之间种群遗传多样性分析和评价甜以, ;舀口正,;甜口,.,。但与此相关的研究目前却无任何关 于海南本地高种椰子资源遗传多样性、遗传背景及其育种价值方面的研究结果, 严重影响了该地区椰子资源的收集评价和品种选育工作。 . 分子标记研究进展 遗传标记是生物基因型的易于识别的表现形式,随着人类对基因从现象到本 质的认识,遗传标记逐步从简单的形态标记、细胞学标记和生化标记发展到能直 接反应水平上遗传多态性的分子标记。形态学鉴定方法不仅费时, 而且常常易受外部环境条件的影响。细胞标记需要大量人力和时问培育选择。生 化标记克服了常规的形态学鉴定技术的局限性,但由于这种方法具有组织器官及 发育的特异性,且可标记的位点少,从而限制了该法的应用。这三种标记都是基 因表达的结果,是对基因的间接反映,标记数目有限,多态性较差,易受环境的 影响,不能满足农作物种质资源鉴定和育种工作的进行。分子标记主要是指在 水平上可标识的遗传标记。与上述三种标记相比,分子标记具有以下优越 性:直接以的形式出现,没有上位性效应,不受环境和其他因素的影响: 多态性几乎遍及整个基因组;表现为中性标记;不影响目标性状的表达,与不良 性状无必然连锁;有许多分子标记为共显性;部分分子标记可分析微量和 古化石样品。 海南椰子遗传多样性研究 依据多态性的检测手段,分子标记可分为四大类:第一大类是基于传统的锄杂 交技术的分子标记,主要指.:第二大类是基于反应的分子标记。它又分为二类, 一是使用随机引物沁川进行扩增,主要指随机扩增多态性技术凡心 和单引物扩增反应;另一类标记是采用特定引物或引物对扩增的标记,主要有; ;小卫星;微卫星,又称简单重复序列:等。其中和 属于位点特异的标记方法,其它则属于多位点标记方法,检测的区域均与微卫星序列 有关。第三大类:.技术的结合即脚技术。第四人类是基于单个核苷酸多态性 的标记即卧咿。它们的共同特点是通过分子量大小不同的条带来显示遗传差异, 以条带当作表型性状来进行遗传分析。下面对应用最为广泛的分子标记进行介绍。 ..昏 印,限制性片段长度多态性 标记是世纪年代初发展起来的第一代分子标记技术甜口正,。 它是建立在限制性内切酶和杂交基础上,利用限制性内切酶酶切不同个 体基因组后,与同位素或非同位素标记的探针进行杂交,从而显 示与探针含同源顺序的酶切片段在长度上的差异甜口正,;刘春吉等, ;王罡等,。简单说就是酶切产生的某一特异片段的长 度在个体间的差异。是共显性标记,呈孟德尔遗传,可区分纯合子和杂合 子。非等位的标记不存在上等位效应及其它形式的基因互作,也不受环境 和发育阶段的影响,能直接反映水平的变异;其结果稳定可靠,重复性好, 具有揭示基因组各部分多种类型变异的潜力王罡等,。但分析存在 需要量大、检测方法较为繁琐、周期长、技术要求高、成本昂贵、有一定 的危险性、对多态性检测的灵敏度不高以及所提供的信息量有限等缺点, 这使它的应用受到一定的限制王和勇等,。目前,已应用于解释种 间关系或推断种上的系统发育甜口正,、遗传多样性许东河等, 、品种鉴定及其亲缘关系分析钱惠荣等,、预测杂种优势,甜 以,、基因定位吴玉良等,、分子辅助选择育种万平等,以 及构建连锁群的遗传图谱甜以,等方面。 技术路线为:样本采集基因组的提取酶切?电泳分离酶切 片段一酶切片段的印迹转移一杂交一杂交信号检测数据统计、 处理和系统聚类分析,结合其他证据综合分析其遗传结构。 .. ,随机扩增多态性是 世纪年代初由和同时发展起来的一种新的遗传标记技术 锄甜口正,;甜口正,;,,它是建立在 海南大学届硕士研究生毕业论文 ,聚合酶链式反应基础上,利用人工合成的较短的 随机系列寡聚脱氧核苷酸片段作为引物,对基因组进行扩增而显示出多态 性的图谱锄甜口正,;甜口正,;,;盖树鹏等, 。黜廿分析具有快速、简便、灵敏度高、实验成本低廉等优点,只需痕 迹量的模板就可以进行分析,它可以为研究者快速高效地提供基因组位点 的多态性资料,故这种方法对于大群体的遗传多样性分析更显出其优越性盖 树 鹏等,。分析的另一个重要优点是其引物的通用性强,可以用一套随 机引物来检测各个分类单位的个体。它既不像那样需要预先知道基因组 的部分序列,也不像那样,需要进行同位素杂交和印记。 因此,在短短的几十年中,技术已被广泛应用于遗传图谱的构建严佟明 等,,分子标记的寻找甜口正,,遗传多样性的检测恽锐等, ,种间关系的确定戴思兰等,和种下划分等分类学问题彭建营等, 的研究,以及相关的研究领域中。 分析的主要技术路线为:样本采集一基因组的提取一鼬奸扩 增电泳检测一数据统计、处理和系统聚类分析,结合其他证据综合分析 其遗传结构。 嘶酉是通过对多态性产物 测序的基础上,设计一对新的引物特异地扩增一个在特定位点的片段,一 般在原引物的’与’端延长个碱基,利用两端各个碱基的引物进行 特异扩增。因此,该方法与相比具有如下优点: 由于使用较长的引物和高退火温度,因此具有高稳定性。 有可以将显性标记转化为共显性的标记的可能性。 如果是显性标记,则在检测中可以直接染色,而不需进行电泳检测。克 服了是显性标记和重现性差的缺点。在近几年的抗病基因标记研究中, 许多研究人员将转化为标记,并在转育后代中得到较好的验证。 在各种分子标记检测方法中,以标记序列扩增特征区域较为简 单、可靠、快速,但要制备大量样品。 ..肿 西 ,扩增片段长度多态性是 年由荷兰科学家和发展起来的一种检测多态性的新方法。它 的基本原理是基于技术扩增基因组的限制性片段,先利用两种限制性内 切酶切割目的基因组,形成具有不同酶切末端的限制性内切片段,在所得 的酶切片段上加上双链接头,作为扩增时引物的结合区。的引物序列 包括核心序列、酶切识别序列和选择性碱基。用选择性引物对酶切片段进行 海南椰了遗传多样性研究 扩增后,通过交性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测扩增片段的多态性伊佟明等,; 翁跃进.。是在心和的基础上发展起来的,它是强和黜心 的结合,但不是简单的技术嫁接,而是克服了二者各自的缺点,而集中了二者 的 长处。既具有讧可靠性好、重复性高的特点,同时又具有的高效性、安 全性和方便性的优点,不需要了解基因组信息,且只需少量纯化的基因组 即可对整个基因组酶切片段进行选择性扩增。因此,被认为是一种十 分理想的、有效的、先进的分子标记技术林忠平等,;甜口正,。 标记目前已经广泛应用于遗传多样性和亲缘关系分析刘勇等,; 以,、品种鉴定和指纹图谱构建鲍露等,;伊佟明等,、遗传 图谱构建张晓芬等,、基因定位与克隆甜口,.,、辅助选择育 种蔡健等,、基因表达与调控研究甜口正,等方面。 的技术路线为:样本采集叶基因组的提取限制性酶切连接人 工接头连接片段的预扩增和选择性扩增扩增产物的分离及检测一数据统计、 处理和系统聚类分析,结合其他证据综合分析其遗传结构。 .. ,简单序列重复区间是等 年创建的一种基于的简单重复序列区间扩增多态性分子标记。它是以 技术为基础,利用真核生物基因组中广泛存在的来设计引物即在 的’或’端加锚.个嘌呤或嘧啶碱基,无需预先克隆和测序,从而对位于反 向排列、间隔不太大的重复序列间的基因组片段进行扩增,扩增产物经电 泳分离、染色,根据谱带的有无及相对位置,来分析不同样品间标记的多 态性。由于在真核生物中分布非常普遍,且串联重复的数目是可变的,呈 现高度多态性,因而.可以检测基因组中丰富的遗传变异。同时 技术具有用量少,检测方便安全、费用低廉等优点,且由于引物较长. 个碱基序列和锚定碱基的耙定作用,因此退火温度较高在?左右,保证 了扩增实验的可重复性,具有很好的稳定性和多态性甜以,;甜 口正,;王建波,。但作为一种显性标记部分共显性酣口正, ,多数情况下不能区别一个位点扩增的片段,在解决交配系统、计 算杂合度和父系分析等问题时效果不佳,且不同物种不同,造成引物在筛 选上具有相对的不随机性;同时.扩增时最适反应条件亦需要一定时间 摸索。现已在遗传作图甜口正,、基因定位甜以, 、种质资源鉴定忆甜以,、亲缘关系汪岚等,、遗 传多样性葛永奇等,、分子标记辅助育种杜金昆等,等研究方面 被广泛应用。 海南人学届硕士研究生毕业论文 分析的主要技术路线为:样本采集基因组的提取扩增 ?电泳检测数据统计、处理和系统聚类分析,结合其他证据综合分析其 遗传结构。 .. 单核苷酸多态性百 叩,。研究水平 上的多态性的方法很多,其中最彻底最精确的方法就是直接测定某特定区域 的核 苷酸序列并将其与相关基因组中对应的核苷酸序列进行比较,由此可以检测出单 个核苷酸的差异。这种具有单核苷酸差异引起的遗传多态性特征的区域, 可以作为一种标记,即新近发展起来的单核苷酸多态性标记绑以, :订口正,。因为这种单个核苷酸变异可以是转换也可 以是颠换,理论上讲,即可能是二等位多态性,也可能是三 个或四个等位多态性。但实际上,后两者非常少见,几乎可以忽略。碱基 在大多数基因组中存在较高的频率,在人类基因组中有最丰富的变异,平 多个标 均每就存在一个锄刃口,.,,目前已有 记定位于人类染色体上。作为继和之后的第三代分子标记技术, 与前两代分子标记技术相比,它具有较多优点:数量多,分布广泛;遗传稳定性 高,遗传分析重现性好且准确性高;易于快速且高通量地进行基因型分型。 是一种高度稳定的标记并且经常直接作用于表型的变化,因此是辅助育种和基因 图位克隆的有利工具 鼬甜口正,。目前植物的研究多处于的 发现阶段,随着植物全基因组测序的完成,标记必将成为植物遗传和育种研 究中的理想遗传标记。 用于检测的方法有许多种,最直接的就是利用生物信息学方法从已有 的 中搜寻,常用的分析软件有和 等。 最常用的检测还是依赖实验方法。这些方法的原理可以分为种类型,一 是根据构象的不同寻找;二是基于以及酶切的方法;三是杂交 方法;四是直接进行测序。以构象为基础的方法包括温度梯度凝胶电泳、 变性梯度凝胶电泳、单链构象多态性,以及变性高效液相色谱 技术。基于、酶切的方法最常用的是.和,前者 通过专一识别性限制性内切核酶处理产物,电泳后检测分型,后者利用随 机引物约对基因组进行扩增,寻找特征性条带和分型。杂交的方法包括等 位基因特异寡核苷酸片段分析、基因芯片技术 和毛细血管 电泳等。 .. 印,简单序列重复’,,又称微卫星海南椰子遗传多样性研究 即 甜以,,是一类由?个碱基组成的基序 串联重复而成的序列。它普遍存在于真核生物基因组中乜甜以,。 不同等位基因间的重复数存在丰富的差异,且重复序列两侧多是相对保守的 单拷 贝序列,可以通过此保守序列设计特异引物,对进行扩增,可获得丰富 的等位基因多态性,从而达到遗传多态性分析的目的邹喻苹等,;甜口正, 。标记由于具有呈共显性、在基因组间广泛分布、选择中性、高度可 重复、稳定可靠、多态性丰富、对质量要求低、所需量少、可通过快 速检测等优点甜口正,;唱甜以,,它更适于检测大量群 体,是进行群体遗传结构分析、构建遗传连锁图谱非常有效的工具张增翠等, ;咖甜以,。但标记在结构上最大的特点是两端序列保守,必 须设计与两端保守序列互补的引物进行扩增,因而给标记的利用带来了一 定困难,然而有研究证明周涵韬等,;甜口正,,引物不仅 在同一属内的不同种问能扩增重复序列,而且在同一科不同属的物种甚至是 不同 科之间的物种也能扩增出重复序列。一旦开发出某种物种的标记,就有显 现出该标记的利用价值高志红等,。目前,标记技术己广泛地应用于 遗传连锁图谱的构建甜口正,、基因定位甜口,、品种鉴 定雷天刚等,、种子纯度的检测李汝玉等,及遗传多样性的研究 陈光等,;张赤红等,和亲缘关系的鉴定‖以,、分子辅 助育种岛等方面。 标记的技术路线为:样本采集基因组的提取、纯化及浓度纯度 的检测引物的获取扩增电泳检测数据统计、处理和系统聚类 分析,结合其他证据综合分析其遗传结构。 标记的等位基因变异主要来源于基因组复制时的滑动引起的重复 序列数目的变化,而不是单碱基突变或插入缺失造成的,因而表现出高度的 多态 性。人们以不同植物为材料将与其它分子标记尤其是强、和 进行了比较,结果表明:标记检测的位点多态性水平明显高于标记, 而且重复性优于;和相比,不同的材料结果略有不同刃 口..。最初以其较高的多态性和共显性的特点被广泛用于遗传多样性 研究,随着标记位点在图谱上的丰富,它以多态性高、信息量丰富和 技术的方便性表现出更大的优势。白等认为和具有疆 同样可靠的结果,并可实现自动化操作,所以能够完全取代进行遗传图谱 构建,而标记可作为有益的补充。然而,是一种显性标记,不能获 得相关位点在遗传图谱上的位置信息,如果位点能够定位在和 连锁图谱上,那么将是最有效的分子标记袁力行等,。 海南人学届硕十研究生毕业论文 .本研究课题的目的与意义 椰子属棕榈科椰子属椰子种单子叶植物。目前,研究者主要通过椰子叶片特 征、生长地域、果实大小和形状将世界范围内的椰子品种分为高种和矮种两 种主 要类型:前者生长迅速,树体高大,异花授粉。后者生长较缓慢、以自交为主 甜口正.。矮种椰子类型遗传性状相对较稳定,而高种类型具有种 群的多型性,其不同种类主要来自异花授粉、品种之间的杂交、实生选种和 自然 演化。 椰子在海南地区的种植和栽培已有多年的栽培历史,主要分布在海南 省的文昌、琼海、万宁、陵水、三亚等地区,种植面积约有.万公顷,占我 国椰子种植面积的%高和琼等,。该地区的椰子栽培品种包括从国外引 进的马来红矮、马来绿矮、马来黄矮、马哇、香水椰子和我国唯一鉴定品种 文椰 ,还有本地黄高、本地红高、本地绿高三个主要栽培类型,但与此相关的研 究目前却无任何关于海南本地高种椰子资源遗传多样性、遗传背景及其育种 价值 方面的研究结果,严重影响了该地区椰子资源的收集评价和品种选育工作。 本研究的目的主要是:以椰子样品为试材,对反应体系中各因子的 最佳反应条件进行探索,建立一套适合椰子的技术体系,为应用标记 技术进行椰子种质资源的研究奠定基础。 利用分子标记对海南省种椰子栽培品种进行遗传多样性分析, 通过位点的聚类分析探讨所研究的海南岛上椰子品种的遗传背景和亲缘关 系,从分子水平研究椰子的遗传分类,同时对以往从形态学、细胞学、孢粉学、 同工酶等方面研究椰子亲缘演化关系的结果和已知椰子种质资源的系谱进 行验 证,为该地区椰子种质资源的保存和利用提供分子水平上的理论依据。 海南椰子遗传多样性研究 第章材料与方法 .材料 ..植物材料 本实验所用的种栽培椰子品种的健康植株嫩叶分别采自中国热带农业科 学院椰子研究所、兴隆植物园表。其中.为植物园鉴定单株,. 为产区种植园中随机选择的单株。 表本研究所用的品种 垒垒缝垒竺曼曼璺璺殳里璺望墨堕堕塾垫墅匦堕 采集地点 代号 名称 文吕,椰子研究所 马来红矮篁以“棚 盯. 文昌,椰子研究所 马来黄矮?删掘憎厶毗柚 本地绿高?疗群琚口“ 文吕,椰子研究所 马米绿矮?删塘朋厶盯. % 文昌,椰子研究所 文昌,椰子研究所 文椰?刀“堀埘眦”” 吗哇.?一“舱朋 .盯.”” 文吕,椰了研究所 文昌,椰子研究所 本地黄高甜删腧,口; 本地红高?删澹,口 文昌,椰子研究所 文昌,椰子研究所 香水椰子?删居,口.札?.?、 本地绿商伽疗“舱 兴降植物同 本地红高?,“屉口 兴隆植物园 ..供试试剂与配制 . /嘶.溶液 称取.砀碱三羟甲基氨甲基烷 溶于约 .,定容至。 中,加适量盐酸,调至 .几溶液.称取..乙二胺甲乙酸二钠 .溶于约 中,加热使之完全溶解,也可先加一些加 。 速溶解,冷却后加 .,定容至 /调至 . 溶液 称取 ./ ,溶解于约 中,定 容至。 、 .×提取缓冲液 量取配制好的母液: .溶液.、 ./ 充分溶解 溶液.、 .,混匀后加入. 可加热,定容至。 碱、.冰醋酸,加约 ×电极缓冲液 称取 。 溶解后,加./ 混匀,定容至 按体积比配制氯仿:异戊醇:。 中,搅拌过 咖溴化乙锭称取溴化乙锭溶于 夜,常温避光保存。 上样缓冲液.%溴酚蓝,%蔗糖溶液称取溴酚蓝,溶解于海南大学届硕:卜研究 生毕业论文 中,室温过夜,待完全溶解后加蔗糖,并加溶解,最后定 容至,滴入约为?/溶液调至蓝色。 溶液 将 / 胰酶溶解于肛无菌中,加 入 / / .溶液 .“, 溶液,于? 水浴中保温,缓慢冷却至室温,分装成若干小份保存于一?。 加入 至完全溶解,定容至 称取 / ,在?冰箱中保存。 %聚丙烯酞胺原胶液称取尿素.、丙稀酞胺.和甲叉双丙稀酞 ×缓冲液于烧杯中,加水至,充分搅拌使其完 胺.,并量 全溶解,后定容至,在?冰箱中保存。 ~其它主要试剂还有: 、’ 、 均购自上海生物工程有限公 和× 司,一购自北京鼎国生物技术有限责任公司。 .试验方法 ..基因组提取法 .取叶片.于液氮中研磨,转人离心管中。 、. .加预热至?的提取缓冲液. ..,. 。.,.%,%.疏基乙醇,混匀。 .在?水浴锅内反应.分钟,不时小心摇动离心管。 .取出离心管,待冷至室温后?,加入等体积氯仿:异醇:,小心 摇动试管分钟,至有机相由无色绿色?黑色深绿色。 .室温下耋?,脚离心分钟,用剪去头部的吸头将上清转移 另一离心管中,若上清仍为绿色应重复上一步骤。 .加/体积异丙醇,小心混匀,用玻璃钩移出絮状。浸于%乙醇中 小时,中途用%乙醇漂洗一次。 .将吹干,加入适量..于?水浴中分钟,以溶解。 ,混匀;在?下,温育小时。 .冷至室温后,加入“咖 .再用等体积酚:氯仿:异戊醇::和氯仿:异戊醇:各抽 提一次,室温下,脚离心分钟,在上清液中加入/体积的 .,倍体积无水乙醇沉淀。 .钩出絮状,放入. 管中,用%乙醇洗涤一次,短暂离 心,使贴壁,倒去乙醇,吹干沉淀。 .每管加入适量...缓冲液,充分溶解沉淀。 海南椰子遗传多样性研究 .. 的质量检测 用.%琼脂糖凝胶电泳检测所提的完整性;用紫外分光光度计测定 咖和啪的吸光度,即值,计算所提的浓度咖 及估测的纯度。 .. .扩增 所用引物的序列参照相关文献报道甜口正,;甜以, ,由上海生物工程公司进行合成表。扩增在.?蹦 ;~?, 仪上进行。扩增程序为:?, ;?, ;?, ;?, 。反应体积皿。体系建立 过程中,分别对孑、、聚合酶、引物浓度、退火温度、模板 浓度等设置不同的浓度梯度,每个处理重复三次,以确定最佳反应体系。 表 引物及其序列 . 垒坠里至;墨墨壑兰 壁巳堡篁璺璺望哇璺竺婪曼坠垫塾婴璺垡望 引物 重复序列 序列 片断大小 参考文献 财 圳蚰皇 璺姊脚壁 墼蚋一一 髑柑 ’几 】瑚’????‘ ,不‘ ’’ ,从。 . ? ,从, .“ ?’ ’~从’ .? “’ ’ 了叼啪’ ?:’ 『:’ ?, . ?从?’ 屯厂,了??’ . 洲?‘ ??』蛆?’ ?’ . ? 砥峨陋陋??屺攀 ’ ’ ? .?汀~ : . 从:从。 . ’?从?’ ” ’’ ?’邢’ ’不’’ ’:广。 :’ . ? 戌?’不’ ’ . , 咀’ . ’ “:?汀口’ ” 省』町 :.’ ’:’ ’’ 海南大学届硕士研究生毕业论文 觚’ .. . 。。 ,:?’? ?:丁?’?他 。 , ’:?’ ,:?不?’’ 色砒。 ’觚 :?’ ’?’叫 吞? ?不 】厂?????’ .??’ 他 . ? ?’’?汀册?汀‘ 越,畎 ?了?:’ ’吼?矗【划 . ” .’ ..’ 砒 . ’ :’ ?从.’ , ?, ’砒 . ?, . ‘ ’?’.可’ . 抽 ’ ?’ 砒 ???汀觚’ . ,?加,?《’ ’芦【? , 一. ’’ ..电泳检测 反映体系优化时所得产物在含有./的%琼脂糖凝 胶上电泳,在?凝胶成像系统上观察、拍照和分析;遗传多样性分析所 得扩增产物经%聚丙烯酰胺凝胶电泳,硝酸银染色,照相。实验操作如下: 胶板处理戴手套操作 .短胶板预处理:用洗洁精洗净,自来水冲洗干净,表面呈现光滑状,再用粗 滤纸轻擦,晾干。用脱脂棉沾取%乙醇沿水平和垂直两个方向涂抹胶板, 晾干。用脱脂棉沾取反硅化液仔细涂抹胶板。放置?分钟后,再用脱脂 棉沾取%乙醇沿水平和垂直两个方向涂抹胶板,用粗滤纸轻擦,晾干。 .长胶板预处理:用洗洁精洗净,自来水冲洗干净,表面呈现水珠状,再用粗 滤纸轻擦,晾干。用脱脂棉沾取%乙醇沿水平和垂直两个方向涂抹胶板, 晾干。用脱脂棉沾取硅化液仔细涂抹胶板。放置?分钟后,再用脱脂棉 沾取%乙醇沿水平和垂直两个方向涂抹胶板,粗滤纸轻擦,晾干。 所需溶液: .%乙醇一.%冰乙酸混合液:取. %乙醇,. 冰乙酸,制成 混合溶液。 海南椰子遗传多样性研究 .反硅化液 %乙醇一.%冰乙酸 :取反硅化液加入到 混合液中,混合均匀。 。 .硅化液鲫: 灌胶步骤戴手套操作 .短胶板在下,放置胶条,再放上长胶板。先用夹子对称地夹好两块胶板,再 用胶带纸从底部至两侧粘贴好两块胶板。 .取 丙烯酰胺一一尿素混合溶液%,.×,。 于烧 %过硫酸铵于烧杯中并迅速搅动混匀。加入 .加入“ 杯中并迅速搅动混匀。 .缓慢把胶液灌入胶板中,检查是否有渗漏。待胶液充满整个胶板时,放平胶 板,将鲨鱼齿梳子平端插入胶液顶部适当的距离。 电泳步骤戴手套操作 .待丙烯酰胺溶液聚合完全,将鲨鱼齿形梳子取出,用自来水冲洗凝胶顶部并 洗净梳子。注意:在这一步骤中,一定要检查胶液是否完全聚合大约需要 ?小时。如果使用常规梳子,应不取出梳子。 .将胶模下端放置于电泳槽下槽,使短胶板向内。 .调整上槽使上槽顶端恰于胶板相平齐。 .在上、下槽中注入适量的电泳缓冲液约升,并检查上槽是否渗漏电泳缓 冲液。注意:一般夏天使用.×,冬天使用×。 .用吸管吸入电泳缓冲液,吹打加样孔以驱除加样孔内的气泡。 .连上电源线,使上槽接负极,下槽接正极。打开电源,调整电压至伏, .瓦,预电泳分钟。断开电源,用吸管吹打加样孔以清洗加样孔内析 出的尿素。将梳子齿端插入凝胶顶端,使齿尖恰好与胶面相贴或稍微进入胶 面。 .按照样品体积:上样缓冲液体积.:,混合,在?下加热变性 分钟,然后迅速放置于冰上。 .吸取?样品依次加入加样孔。加完一个样品后,在上槽缓冲液吹打吸 头?次,然后加另一个样品。 .当所有的样品加样完毕后,接通电源,调整电压至伏,.瓦,电 泳?分钟。凝胶电泳在恒定功率下进行。 .电泳所需时『自通过监测指示剂溴酚蓝、二甲苯蓝的迁移情况进行估计。 .电泳完毕后,断开电源,把胶板从电泳槽内取出,并在下槽边缘控干残留的 缓冲液。倒掉所有缓冲液。海南人学届硕十研究生毕业论文 .将反硅化的胶板短胶板置于上面,移去胶条,用钢勺的一端小心地将两 层胶板撬开,揭开硅化胶板长胶板,则凝胶仍紧紧地附着在反硅化胶板 短胶板上。 银染步骤中性法 .凝胶浸入固定液,轻摇分钟以上或置摇床上摇,分钟以上,印为 ,或静置过夜。 .用.升双蒸水轻洗两次,每次时间为分钟,即来回振荡次。 .凝胶转入染色液中轻摇分钟以上或置摇床上摇,印为,摇分钟 以上。 .用双蒸水...升浸沈胶板?秒钟,让双蒸水来回振荡三次即可洗 去凝胶表面的银,留下上的银,迅速取出转入预冷的显色液中。 .胶板转入预冷的显色液中,轻摇至带出现,清晰可见。 .将胶板转至步骤的终止固定液中,轻摇?分钟,终止显色反应。 .用自来水冲洗分钟,在空气中晾干,即可读出结果。 .用完后的短胶板反硅化板放在一个装有%溶液的塑料托盘中浸 泡,洗脱凝胶。长胶板硅化板置于室内架子上?干,待用。 所需溶液: .终止固定液:.升%冰乙酸,取 冰乙酸,加 双蒸水制成。 %甲醛混匀。也 .染色液:.克硝酸银,加.升双蒸水溶解,加. 可以用这三者的用量分别为:,,. .预冷的显色液在电泳开始时配制,固定完毕时,置.?冷冻至??: 克无水,加.升双蒸水溶解先加双蒸水,后加无水, 冰浴,待染色快结束时,即用前再加. %甲醛和“ 咖硫 代硫酸钠。或按照下列比例配制:,,., .终止溶液上样缓冲液: ,%甲酰胺,.%溴酚蓝,.% 二甲苯蓝,或只加入.%二甲苯蓝。 .%溶液:称取克,加入蒸馏水至 配制而成。 银染步骤碱性法 .凝胶浸入固定液,轻摇固定两次,每次时间为分钟。或置摇床上摇,叩 为。 .用.升双蒸水轻洗一次,时间为分钟。 .凝胶转入染色液中轻摇一次,时间为分钟以上或置摇床上摇,印为。 .用双蒸水漂洗,来回摇荡次,摇至带出现,清晰可见。分钟左右, 轻摇后静置 海南椰子遗传多样性研究 .凝胶放入终止液,轻摇一次,时间为分钟,以便终止显色反应,。 .用自来水冲洗分钟,在空气中晾干,即可读出结果。 .用完后的短胶板反硅化板放在一个装有%溶液的塑料托盘中浸 泡,洗脱凝胶。长胶板硅化板置于室内架子上?干,待用。 所需溶液: .固定液:%乙醇和.%冰乙酸组成。取%乙醇 或无水乙醇 ,. 冰乙酸,加. 双蒸水或加. 双蒸水,制成 .升溶液。 .染色液:.%硝酸银组成。称取.克硝酸银,加入.升双蒸水溶解制成。 .显色液:.%和.%甲醛组成。称取.克,加入 甲醛, 再加入.升双蒸水制成。 .终止液:.%无水碳酸钠组成。称取.克无水碳酸钠,加入.升双蒸 水。 .上样缓冲液: ,%甲酰胺,.%溴酚蓝,.%二甲苯蓝,或 只加入.%二甲苯蓝。 ..数据分析 在特定的位点上,测定每一个供试材料的等位基因组成。将重复性好 且清晰的条带以二进位制进行 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 ,在相同位置有带记为,无带记为构建所 有引物扩增结果数据库,矩阵。每一个位点的多态性信息量按 公式一?计算,其中表示位点的基因频率。然后根据和的 方法计算相似系数,建立相似矩阵,采用程序,以非 加权数据分析法生成系统树。 第章结果与分析 . 反应体系的建立和优化 以椰子样品、、为模板,选用引物研究反应体系中的 孑对扩增结果的影响;以扩增条带多,且带谱清晰的样品图为 模板,选用引物研究、聚合酶、引物浓度、退火温度、模 板浓度等成分对扩增结果的影响。 .. 浓度对反应的影响 孑影响聚合酶的活性、扩增的真实性及产物的特异性等反应 的诸多方面,孑浓度偏低,可能无扩增条带或扩增条带少;矿浓度过高, 常出现非特异性扩增、片状拖带或涂抹带的现象。试验采用的个矿浓度为 海南大学届顼?研究生毕业论文 , 几, ?和 和 ,由图可见,当矿浓度在 时均有扩增产物:浓度为 脚时,扩增条带较少:尹 浓度为 扎时,在供试个样品中扩增带谱均清晰且稳定:矿浓度为 ,时,个样品扩增结果均较弱.扩增条带减少。 图 浓度对反应的影响 ?舰 眦衄 脏 ., ;,嘶。 ?,。泔,,.分别代表,,;浓度? 。:,, ?晰 ,,, ?四?矿: . , 儿 图椰子反应体系不同组分对扩增结果的影响 圩肫嘣?“ 砌讲讯 叩?‖啪 . . , :火温度?, ,儿.引物, ,, , .. . . 模板 ?,?,?,. 口?聚台酶度?矾日 .: , , . ?,, ?:?, , ,却?酬“册盯仙 ?,?,?,?,? 皿 , , , , ,眦:曲 , : ,目.血 ,. 浓度对反应的影响 实验所采用的种不同的浓度, , 和.咖/均获得 ,时 扩增产物图:?,其中 几时扩增山带少且亮度弱: 扩增谱带清晰稳定; 和 ,时扩增带较多但亮度较弱。结果表明:反 应体系中采用.,的效果较好。海南椰子遗传多样性研究 .引物浓度对反应的影响 , 和 由图:.可见,试验巾引物浓度为, 岫。儿时均有扩 增产物,但差异较大。引物浓度 岬。儿扩增谱带比较清晰稳定:其他三种浓 度扩增结果都较差,可能足因为引物浓度太低,扩增条带少,引物浓度过高易 形 成引物二聚体。 ..退火温度对反应的影响 退火温度的高低与扩增特异性有极其显著的相关性,而退火温度主要 取决于引物的值、引物与模板的配对程度等因素。在此研究中,退火温度设 定为?,?,?和?。如图:一所示,在?,?和?扩增 的条带数目均较少,效果较差;?时,带谱清晰稳定。因所用为特异性引物, 在退火温度较高或较低时,引物都不能很好的结合,所以扩增结果较差。放确 定 退火温度为?,比此对引物值低?。为验证结论的可靠性,从设计的 对引物中的随机选取对引物、、和,其退火 温度分别设为?、?、?和?进行检测,由如图可见扩增谱带 清晰且具有区别性片段。 『瓤麓 暑《蕊黪盛 一藤羹 圈:不同引物对在分析中的试验结果 【?呲啊恤锄 培: , &..止口;.分别代表,,引物:,... :.叮,,?,,?:.,?,? , .. 聚合酶浓度对反应的影响 铀聚台酶的活性和用量是反应中最为重要的影响因子之一。在 , , , , 。如图 止反应体系没的个聚合酶浓度 : .可见,个处理均有扩增产物,但在 和 时谱带数目较少且清 晰度较差; 时谱带亮且清晰; 和 时谱带数量多且模糊,可能是酶 量较大出现非特异性扩增。因此确定聚合酶适宜用量为/皿。海南太学?届 碗?研究?牛论文 ..模扳对反应的影响 本试验设定的个模板量,,丑均有扩增结果。由罔: .可见,当模扳量在时,扩增出的条带较弱;而取量在时有较好 的结果;当取量在时扩增条带反而减少,可能是模板变性不彻底, 引物与过早耗尽等因桑造成的。虽然有报道称反应对模板浓度不敏 感,但本研究认为模板浓度对扩增结果存在一定程度上的影响。 ., 反应体系的应用 以上述所确定的各组分条件,用引物对在海南不同地区收集的高种 椰子样品进行标记分析,分析结果表明:扩增谱带清晰且具有区别性片段 图,表明优化的椰子扩增的反应体系稳定可靠,可应用丁椰子分 图: 多样品的分析结果 :.东骤揪徽紫留麟麓:”州 骶 ‘ :肼‰啪,,。? .椰子遗传结构的分析 ..引物筛选及多态性分析 利用选用的对引物对个椰了品种进行扩增,有对引物扩 增出清晰稳定的条带图,其余对引物在某些供试品种中不能有效的启动 基因组或扩增质量差,无法进行统计分析。对引物统计分析结果表明: 对引物对份材料共扩增出条带,其中条带具有多盘性,平均多态 性百分率为 %。不同引物扩增的带数差异较大,从条到条小等,’均 之间,平均 为条。每个位点的多态信息量变化于 为 表。说明所用微卫星标记在椰子遗传资源中具有较高的多惫性,适 合于对其遗传多样性结构和水平进行检测。海南椰了遗传多样性研 。 出,别厶”/?一?““一吧。叫?。“?二。一:.?.一 扩增。册盯删 ;妇。 .? 十目椰品种。 .:? 砷“删??耐艏?一?。盯? 表 扩增结果统计 “慧? ::兰鬈 碧 ;嚣:篓 鬻器;器徽 嚣黑? 。。?】 呻 。? ? 町 呻 ? 。。? 吣 ?” 十均 】 ..聚娄分析 根据对引物扩增数据,以相似系数采用法进行聚类得到不 同椰子品种之问的系统进化荚系树。在所有的供试材料中相似系数最大的是 文椰 和吗哇,为 ;相似系数晟小的是源于文昌地区的本地红 ,二者虽名称相同但进化关系 高和辫隆地区的本地红高”,为 较远。同时,以 为闽值可将这份供试材料分为四大类群,第一类群为海南大 学届硕士研究生毕业论文 马来红矮,第二类群包括马来黄矮、本地绿高、马来绿矮、 文椰、吗哇、本地黄高、香水椰子、本地绿高, 第三类群为源于文昌地区的本地红高,第四类群为源于兴隆地区的本地红 高。在第二类群中,以.水平值又可以分为两个亚群,第一亚群包括 马来黄矮、本地绿高、马来绿矮、文椰、吗哇、 香水椰子,其中文椰与吗畦的材料来源最相似,相似 系数最大;第二亚群包括本地黄高、本地绿高图。从系统进化 关系树的结果来看,红色类型椰子与其它颜色类型椰子之间的进化关系较