小鼠睾丸组织培养时间及温度对精子生成影响的观察

小鼠睾丸组织培养时间及温度对精子生成影响的观察 1998 年 9 月南 京 医 科 大 学 学 报 407 第 18 卷第 5 期A C TA U N IV ER S ITA T IS M ED IC IN A L IS N A N J IN G 小鼠睾丸组织培养时间及温度 对精子生成影响的观察 1 周亚东 林 敏 王燕熔周作民 沙家豪 (南京医科大学江苏省生殖医学重点实验室, 南京 210029; 1 )宁夏医学院组织胚胎学教研室, 宁夏 750000 摘 要 为建立小鼠睾丸组织短期培养 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 , 对成年小鼠睾丸组织进行培养。 结果显示: 在 34?条件下培养 24 小时, 小鼠睾丸组织各级生精细胞和间质细胞发育正常。培养 48 小时, 曲精小 管基底部细胞发生增殖。培养 72 小时, 曲精小管基底层增殖的细胞向管腔面迁移。在 37?条件下, 生精上皮细胞发生脱落和崩解。 结果提示, 本研究建立的小鼠睾丸组织短期培养方法能有效减少 曲精小管微环境的改变, 为进一步建立睾丸组织长期的培养方法奠定基础。 关键词 精子生成; 睾丸; 组织培养; 小鼠 中图号 11321R 生精过程是一个十分复杂的细胞增殖和取成年小鼠睾丸置无菌培养液中洗涤数分化过程。在精子发生的过程中, 精原细胞经 , 将睾丸切成 3, 4 块, 并放置在覆有薄层 次 有丝分裂增殖形成精母细胞, 精母细胞经减 纤维纸的镍网上, 将载有组织的镍网放入小 数分裂形成精子细胞, 精子细胞经一系列形 平皿内, 加入培养液至组织块顶部, 分别置 1 态的变化, 最终形成精子。在精子的发生过 34?和 37?的 培 养 箱 中, 培 养 时 间 为CO 2 程 中 和 精 子 的 形 成 过 程 中, 曲 精 小 管 中 的24、48 和 72 小时。按常规方法制备培养组织 细胞和间质中的 细胞对上述 Se r to li L eyd ig 的石蜡切片, 并用光镜观察。 2, 3 过程具有重要的调节作用。为了尽可能保 2 结 果持这些因素对精子发生和形成的影响, 建立睾 丸组织的体外培养方法是十分必要的。 本研究 211 在 34?条件下培养的睾丸组织 试图初步建立小鼠睾丸组织短期培养, 为今后 睾丸组织培养 24 小时后, 与未经培养的 进一步建立长期的培养方法奠定基础。 对照组比较, 曲精小管内的各级生精细胞, 包 括精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、 材料和方法1 精子细胞和精子等, 发育无异常改变。曲精小 111 培养液的配制 管中 细胞和睾丸间质中 细胞 Se r to li L eyd ig 每 100 培 养 液 中 含 16 , 0m l DM EMg ( )发育正常 图 1。 睾丸组织经 48 小时培养 0124 10016 , 3 , 谷 氨 酰 胺 36 F g N aH CO g 后, 在曲精小管的基底部细胞发生增殖。增殖 , 胰岛素 50 , 青霉素 115 万单位, 链霉 m g m g细胞的细胞核较小, 染色深, 细胞排列密集, 素 115 万单位, 714。pH 紧贴于基膜。 曲精小管其它各层细胞与正常 112 方法()对照相同 图 2。 睾丸组织经 72 小时培养, 1998 年 9 月 南 京 医 科 大 学 学 报408 第 18 卷第 5 期 212 在 37?条件下培养的睾丸组织 , 增殖的细胞形态和分布相细胞发生增殖 睾丸组织经 24 小时培养后, 与正常对照 于 34?培养的睾丸组织, 但原有的曲精小 ( )比较, 各级细胞排列层次发生紊乱, 在细胞之 上皮细胞发生大量的脱落 图 5。 睾丸组 间出现较大的腔隙, 一些细胞发生脱落, 但 经 72 小时培养后, 整个曲精小管除精原细 ()细胞和 细胞正常 图 4。睾丸 分布在基底部之外, 其它各层细胞崩解、脱 Se r to li L eyd ig () 组织经 48 小时培养后, 在曲精小管的基底部 或形成一些细胞碎片 图 6。 () 小鼠睾丸组织经 34?培养 24 小时, 生精细胞和间质细胞发育正常 , ×250 图 1H E 图 2 () 小鼠睾丸组织经 34?培养 48 小时, 曲精小管基底部细胞增殖 , ×250H E 图 3 () 小鼠睾丸组织经 34?培养 72 小时, 曲精小管基底层增殖的细胞向管腔迁移 , ×160H E 图 4 () 小鼠睾丸组织经 37?培养 24 小时, 生精细胞排列紊乱 , ×160H E 图 5 () 小鼠睾丸组织经 37?培养 48 小时, 曲精小管基底细胞发生增殖, 游离细胞发生脱落 , ×160H E 图 6 () 小鼠睾丸组织经 37?培养 72 小时, 除精原细胞分布在基底部, 其它各层细胞崩解, 脱落 , ×160H E 学研究领域中如能建立一个睾丸组织培养 3 讨 论法, 并使精原细胞能通过有丝分裂和减数 精子发生是一个复杂的细胞增殖和分化裂形成精子细胞, 则对进一步研究精子发 过程, 精原细胞的有丝分裂、精母细胞的减数 的过程及研究环境因素对精子发生的影响 分裂和精子细胞的形态变化均是在曲精小管 着十分重要的意义。 但目前由于对曲精小 4 5 的微环境中进行的。 1995 年 报道, D ym 微环境成分了解不是很清楚, 影响生精细 从大鼠睾丸曲精小管中纯化 型精原细胞, A 体外培养。 纯度达 95% ; 经体外培养, 24 小时内细胞死 亡率达 40% , 48 小时内细胞死亡率达 80% , 为减小曲精小管微环境的改变, 我们 在失去曲精小管微环境后, 精原细胞随即开 用小鼠睾丸组织块进行培养。在 34?条件 始发生凋亡。 同样任何因素影响到微环境的 经 24 小时培养后, 各级生精细胞与对照组 较未见明显改变; 经 48 小时培养后, 曲精 5 期周亚东, 等: 小鼠睾丸组织培养时间及温度对精子生成影响的观察409 3ed. B lackw e ll Sc ien t if ic P ub lica t io n s, 1989. 50 们认为, 用睾丸组织进行培养中的 细 Se r to li 2 , , , .M ague re sse BB W o lff J M o re ra AM e t a l 胞发育正常, 其构成的血睾屏障能较有效地 21 F ib ro b la st g row th fac to r recep to r typ e ex2 减小曲精小管微环境的改变, 并在 细L eyd ig p re ssio n du r ing ra t te st icu la r deve lopm en t and 胞 和 细 胞 的 作 用 下, 让 精 原 细 胞 增 Se r to li . it s regu la t io n in cu ltu red Se r to li ce llsE n2 殖。 通常组织培养温度采用 37?, 但本研究 () do c r ino l, 1994, 135 6: 2404 观察在 37?培养下精原细胞虽也一度增殖, 3 M a illa rd N , W o lczynk si S, A rgy ru iy A , e t a l. 但后续各级生精细胞出现排列紊乱及脱落, 22S tero ido gen sis in th e tw o en r ich edL eyd ig ce ll 不如 34?下培养好, 其原因是: 正常睾丸在 : pop u la t io n s o f h um an te st isev idence fo r a po s2 阴囊中受蔓状静脉丛对血流温度的调节, 温 it ive co n t ro l by sem infe ro u s tubu le s sec re ted ( )() . , 1994; 33 3: 187fac to r sA rch A nd ro l 度要比腹腔体温低 3?左右, 故 34?成为睾 , . 4 Go nza le s GF D e l V a lle LA du lt ra t sem in ife r2 丸组织培养特定的合适温度, 也说明睾丸组 30 o u s tubu le s sec re te a f rac t io n g rea te r th an 织培养除尽可能保持曲精小管微环境外, 培 KD a regu la te sp e rm a to gene sis. H um R ep ro d, 养温度的选择也是重要的。 本研究建立了睾 () 1995, 10 6: 1435 丸组织短期培养方法, 为进一步完成小鼠睾 , , , . 5 D ym M J ia M C D iram i Ge t a lE xp re ssio n 丸组织长期的培养方法奠定基础。 2o f cK it recep to r and it s p ho sp ho ry la t io n in im 2 . ,m a tu re ra t typ e A sp e rm a to go n iaB io l R ep ro d 参 考 文 献 ()1995, 52: 8 1997204220 收稿 1 , . 2.M a r t in J B a r ry ER e ssen t ia l R ep ro duct io n Effe c ts o f T is s ue C u ltu ring T im e a nd Tem p e ra tu re o n S p e rm a to g e ne s is in M o us e Te s t is , , , Zho u Y ado n gL in M in W an g Y an ro n ge t a l , K ey L a bora tory of J ia n g su R ep rod u c t ion M ed ic in eN a nj in g M ed ica l , 210029U n iv e rs ity N a nj in g . 24 A bstra c t U sin g th e m e tho d o f t issu e cu ltu re m o u se te ste s w e re cu ltu redA f te r 34?, .ho u r s o f cu ltu re a t deve lopm en t o f sp e rm a to cy te s an d L eyd ig ce lls w e re a ll no rm a l 48 , A f te r ho u r ssp e rm a to cy te s n ea r th e b a sem en t m em b ran e o f sem in ife ro u s tu b u le s w e re . 72 , p ro life ra tedA f te r ho u r sp ro life ra ted sp e rm a to cy te s m o ved tow a rd s th e lum en o f sem i2 ?, . . 37n ife ro u s tu b u le sW h en cu ltu red a t sp e rm a to cy te b ecam e n ec ro sed an d ex fo lia tedT h ere su lt s in d ica ted th a t sho r t t im e t issu e cu ltu re co u ld effec t ive ly redu ce th e ch an ge o f m ic ro . en v iro nm en t o f sem in ife ro u s tu b u le sT h e re su e t m ay b e u sefu l in lo n g t im e te st is t issu e cu l2 .tu re ; ; ; Key word s sp e rm a to gen e siste st ist issu e cu ltu rem o u se