[word格式] 不同地衣芽孢杆菌对美国短毛黑貂肠道宿主性的鉴定

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[word格式] 不同地衣芽孢杆菌对美国短毛黑貂肠道宿主性的鉴定不同地衣芽孢杆菌对美国短毛黑貂肠道宿主性的鉴定一 2O一中国饲料添加剂2007年第1O期(总第64期) 不同地衣芽孢杆菌对关国短毛黑貂肠道宿主,I生的鉴定郝永任楚杰张大伟宿英德 (1.山东省科学院生物研究所,山东济南250014;2.济南大吉饲料有限公司) 摘要:为了筛选可应用于毛皮动物饲养的芽孢益生茵菌株,本研究以饲喂标准日粮的美国短毛黑貂为试验动物,以一次性饲喂不同的地衣芽孢茵剂为试验组,通过定时收集试验动物的粪便,测定芽孢数量,对T一1,T一2,T一3和T一4等四株地衣芽孢杆菌进行宿主性的筛选,研究结果表明,饲喂T一3菌剂48小时后,粪便样品中仍可检测出较多数量的芽孢, 而且排出的芽孢总数与饲喂芽孢总数的比值约为1.6,表明此菌株在宿主肠道内萌发率较高,芽孢和菌丝体均可吸附在宿主肠道内壁,是用于美国短毛黑貂饲养的理想的益生茵菌株. 关键词:地衣芽孢杆菌;美国;短毛黑貂;鉴定;宿主肠道毛皮动物在我国的养殖管理日渐规范 ,提高毛皮质量和疾病的有效防治工作是其饲养管理的重点.芽孢杆菌在自然界中广泛存在于土壤, 空气和水中,而且数量丰富.芽孢菌剂作为益生菌或肠道竞争抑制剂,除了可以改善,调整肠道的菌群外,还可抑制有害细菌在肠道内膜的吸附和定殖uJ,饲喂动物日粮中添加一定比例的芽孢菌剂,还可明显降低料肉比.3J.目前,芽孢菌剂在人和动物肠道疾病的防治中均取得了较好疗效,最新的研究结果还在国际上首次提出了芽孢杆菌也属于动物肠道微生态环境组成的新理论引. 研究结果表明,宿主性强的菌株,有利于其在宿主肠道的吸附和萌发,对肠道有害菌的抑制作用就越明显l5J.但由于试验条件的限制,目前难以对毛皮动物肠道微生态环境进行直接的测定试验,对使用的益生菌菌株的作用效果,无法进行有效的预测和判断,本研究通过在美国短毛黑貂的日粮中添加不同的微生态菌剂,并对其粪便中细菌组成的变化进行分析测定,为毛皮动物专用微生态菌剂的筛选提供依据. 1材料和方法 1.1试验动物本试验采用l3周龄美国短毛黑貂,共分5 组,每组3只. 1.2饲喂方法对照组饲喂标准日粮,试验1—4组,分别在饲喂标准日粮的基础上添加不同的地衣芽孢杆菌菌剂,菌株编号分别为T一1,T一2,T一3和T 一 4,芽孢菌剂由济南大吉饲料有限公司提供,菌剂芽孢含量均为20×10CFU/克,饲喂量为1 克,一次性饲喂. 1.3试验方法 1.3.1检测样品的采集饲喂芽孢菌剂后,每4小时分别收集各组所有粪便样品,样品用1000mL生理盐水悬浮,匀浆后备用.样品共收集至饲喂芽孢菌剂后48小时. 1.3.2芽孢数量的测定取匀浆后样品5mL,75%热处理20分钟, 震荡摇匀后,取1mL,用生理盐出稀释一定倍数,LB培养基平板涂布100uL,37?培养36小郝永任,等:不同地衣芽孢杆菌对美国短毛黑貂肠道宿主性的鉴定一 2l一时后进行菌落计数. 样品芽孢数量(10.CFU)=菌落数×稀释倍数×10×1000/10 2结果与讨论 2.1美国短毛黑貂粪便样品中芽孢数量的测定结果(图1) 图1试验组粪便样品的芽孢数量的测定结果 ?:T一1;-:T一2;?:T一3;?:T一4. (注:对照组收集样品的芽孢测定数量均少于10’cru) 2.2芽孢总数的测定结果将所有试验组样品测定的芽孢数量进行累积, 得到的芽孢总数的结果见表1,以测定的芽孢总数与饲喂芽孢总数的比值作为判断芽孢在宿主肠道内萌发生长的指标,计算结果如图2所示. 表1试验组芽孢总数的计算结果组另UT一1T一2T一3T一4 芽孢总数(10.CFU/组)61.8377.6796.2O76.53 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 O.8 O.6 0.4 0.2 O.O T-1T-2T_3T’4 .’ 图2试验组芽孢测定总数与添加饲喂总数的比值 2.3结果讨论本研究结果显示:4个试验菌株在美国短毛黑貂肠道内的生活状态具有较大的差异,T一1 菌剂试验组,在饲喂2O小时后,即将饲喂的芽孢基本排出体外,而且数量与饲喂数量差异不大, 表明T一1菌株宿主动物肠道内的萌发率较低, 而且在肠道内的滞留时间短;T一2菌剂试验组虽然也在宿主体内的滞留时间较短,但芽孢在宿主肠道内的萌发率较高;T一4菌株虽然在体内的滞留时间较长,但饲喂2O小时内,也将大多数的芽孢排出体外,表明T一4菌株的菌丝体在肠道内具有一定的吸附位点,而芽孢则无吸附位点,没有萌发的芽孢很快被排出体外;T一3菌剂试验组的测定结果表明,不但其芽孢在宿主肠道内的萌发率较高,而且芽孢和菌丝体在肠道内均具有一定的吸附位点,饲喂后48小时,仍未全部排出. 多种动物饲喂芽孢益生菌的试验结果表明, 芽孢只有在宿主动物肠道内萌发后,才可进行增殖,肠道内壁吸附和外泌消化酶等多项生理活动,因此选育宿主性强的芽孢菌株,才能有效的改善宿主肠道内的微生态环境,抑制有害菌在体内的滞留和繁殖,促进消化吸收J. 虽然,由于试验条件的限制,本研究直接对美国短毛黑貂肠道内的微生态环境进行直接的测定和分析,但通过定时对其排出粪便的样品进行分析,也可有效地对试验菌株的宿主性进行判断,经本研究的初步筛选结果表明,地衣芽孢杆菌T一4制备的益生菌剂,可以在美国短毛黑貂的日粮中添加饲喂. 参考文献 [1]Fuller,R.Probioticsinmailandanimals.JApplBac— teriol,199l,66:365—378. [2]MstherRAandRichardML.Propagationbysporulation intheguineapigsymbiontMetabacteriumpolyspora. ProcNadAeadSci,1998,95:10218,10223. [3]张大伟,郝永任,楚杰,等.益生茵地衣芽孢制剂的作用轵理及应用研究[J].山东饲料,2004,(10):27—28. [4]SimonMCeta1.TheintestinallifecycleofBacillus subtilisandcloserelatives.JBacteriol,2006,188(7): 2692—27oo. [5]SimonMCeta1.Bacillusprobioties:sporegermination inthegaltrointestinaltract.AppliedandEnvironmental Microbiology,2002,68(5):2344—2352. [6]李健雄,田兴山.动物微生态制剂的研究及应用进展[J].广东畜牧兽医科技,2004,29(4):15一l7.

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