联合应用抑制口腔产臭细菌产生挥发性硫化物的体外研究

联合应用抑制口腔产臭细菌产生挥发性硫化物的体外研究 ??短篇论著??茶多酚与维生素联合应用抑制口腔产臭细菌产生挥发性硫化物的体外研究张微云 叶玮 【摘要】 目的 通过观察茶多酚与维生素混合溶液对口腔产臭细菌产生挥发性硫化物的抑制作用评价茶多酚与维生素联合应用治疗口源性口臭的应用前景。方法 选取具核梭杆菌、牙龈卟啉单胞菌以及口臭患者唾液全细菌为实验菌建立挥发性硫化物产生模型配制纯茶多酚溶液、茶多酚与维生素浓度比例等于?号药品组、?号药品组、?号药品组的不同比例混合溶液分别与种口腔产臭细菌作用使用硫化物检测仪测量厌氧培养和后各组样品产生数值。阴性对照为不加药品的菌液阳性对照为加入畅浓度氯己定溶液的菌液。结果 药品与牙龈卟啉单胞菌培养后纯茶多酚组产生数值较阴性对照显著降低畅茶多酚维生素混合的组样品产生数值较阴性对照显著降低畅。药品与牙龈卟啉单胞菌培养后纯茶多酚组、茶多酚维生素混合组产生数值显著低于阴性对照组畅并且茶多酚维生素混合的组产生数值显著低于纯茶多酚组畅。药品与患者唾液细菌培养后纯茶多酚组和号药品组产生数值较阴性对照组显著降低畅而号药品组和号药品组产生数值与阴性对照组相比有统计学差异畅。结论 与纯茶多酚溶液相比茶多酚维生素混合溶液对牙龈卟啉单胞菌和口臭患者唾液细菌产的抑制效果更为显著提示茶多酚与维生素对口腔产臭菌的抑制存在一定的增效协同作用。【关键词】 抗坏血酸 口臭 硫化物挥发性 茶多酚 致臭菌 口臭指从口腔或其他充满空气的空腔所散发出的臭气是一种严重影响人们社会交往和身心健康的常见疾病。研究表明口臭气体的主要成分是挥发性硫化物可通过多种途径产生但约源于口腔目前已知口腔内至少有多种微生物在代谢过程中能产生硫化氢、甲基硫醇等。在口臭治疗方面主要的方法包括抑制产臭细菌产生的能力、将转化为无臭物质或减少产臭细菌的数量。以往研究发现多种中药的有效成分对口腔产臭细菌有良好的抑制作用包括茶多酚、黄芩、丹酚酸、厚朴酚等其中以茶多酚的相关研究较为丰富。更有研究显示茶多酚与聚壳糖、维生素类物质等其他活性成分联合应用能更有效地抑制幽门螺旋杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌等消化道常驻菌唱然而有关茶多酚与其他成分联合应用抑制口腔产臭细菌的研究则鲜见报道。本研究选用茶多酚与维生素按照不同比例配制成混合溶液通过体外实验观察其抑制口腔产臭细菌产生的效果了解茶多酚与维生素联合应用于口源性口臭治疗的应用前景。一、材料与方法畅细菌来源具核梭杆菌牙龈卟啉单胞菌由上海市口腔医学研究所微生物实验室提供。采集临床口臭患者非进食状态下的唾液全细菌标本份患者无全身系统疾病个月内未服用抗生素经检测晨起口腔内值为正常值应且经临床医师鼻测法检查明确诊断有口臭。畅药品、试剂和设备茶多酚由杭州禾田生物技术有限公司提供含量为维生素由上海新兴化工试剂研究所提供含量畅氯己定粉剂由益康药业河南郑州提供。实验试剂包括厌氧菌液体培养基和厌氧菌血琼脂培养基。实验仪器主要有专性厌氧细菌培养箱英国公司、便携式硫化物检测仪美国公司。畅细菌培养将冻干保存的牙龈卟啉单胞菌与具核梭杆菌复苏专性厌氧培养经生化鉴定后分别接种于琼脂培养基上挑取一接种环的细菌转接于液体培养基中专性厌氧培养活化、增菌菌液浓度调整至。口臭患者唾液标本获得后内于振荡器上振荡混匀接种于厌氧菌液体培养基中专性厌氧培养活化、增菌菌液浓度调整至。唱作者单位 上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔预防儿童科上海市口腔医学研究所上海市口腔医学重点实验室通讯作者叶玮畅 畅实验试剂配制根据茶多酚对牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌最小抑菌浓度实验的结果称取茶多酚粉剂加蒸馏水配????中华临床 医师杂志电子版年月第卷第期 制为浓度为畅的溶液记为号药品。在上述茶多酚溶液中按照茶多酚与维生素浓度比例为?、?、?配制成种不同比例的混合溶液依次记为号药品。畅挥发性硫化物的测定在含有厌氧液体培养基试管内加入μ已调整浓度的标准菌菌液或口臭患者唾液细菌菌液再分别加入μ的号药品阴性对照为不加药品的菌液阳性对照为加入畅浓度氯己定溶液的菌液。每组配制份样品用硅胶塞封闭试管口放入厌氧培养箱在?专性厌氧条件下培养。根据预实验的结果时细菌无明显产气开始产气产气达到高峰之后产气水平稳定因此于厌氧培养和后取出号药品组、阴性对照组和阳性对照组的试管每组重复份样品振荡器振荡以使试管内气体混匀试管硅胶塞上插入根穿刺用粗针头一根用于平衡试管内外压强另一根与便携式硫化物检测仪的乳胶进气管连接采集试管顶空 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 下的测量峰值。畅统计学分析各药品组的数据用均数?标准差珋?表示组间比较采用畅软件进行单因素方差分析畅为差异有统计学意义。二、结果畅药品作用后各组产生比较药品与牙龈卟啉单胞菌培养后纯茶多酚组产生数值较阴性对照低有统计学差异畅阳性对照组、茶多酚维生素混合的组产生数值较阴性对照降低有统计学差异畅。药品与具核梭杆菌培养后纯茶多酚组、茶多酚维生素混合组产生数值与阴性对照相比无统计学差异畅仅阳性对照组产生数值较阴性对照明显降低畅。而各组药品和口臭患者唾液细菌培养后产生数值与阴性对照相比均无明显差异畅。见表。畅药品作用后各组产生比较各组药品与牙龈卟啉单胞菌培养后产生数值较阴性对照降低有统计学差异畅而且茶多酚维生素混合的组产生数值与纯茶多酚组相比有显著性差异畅。药品与具核梭杆菌培养后与阴性对照组相比阳性对照组、纯茶多酚组、茶多酚维生素混合组产生数值降低畅。药品与患者唾液细菌培养后与阴性对照组相比阳性对照组、纯茶多酚组和号药品组产生数值降低畅号药品组和号药品组产生数值显著降低有统计学差异畅。见表。表 药品作用后各组样品细菌产数值的比较珋?菌种牙龈卟啉单胞菌具核梭杆菌患者唾液细菌阴性对照组? ? ?阳性对照组? ? ?号药品组? ? ?号药品组? ? ?号药品组? ? ?号药品组? ? ? 注与阴性对照组相比畅畅表 药品作用后各组样品细菌产数值的比较珋?菌种牙龈卟啉单胞菌具核梭杆菌患者唾液细菌阴性对照组? ??阳性对照组? ??号药品组? ??号药品组? ??号药品组? ??号药品组? ?? 注与阴性对照组相比畅畅与号药品纯茶多酚组相比畅 三、讨论国外学者运用质谱法和气相色谱法分析得出口源性口臭气味的主要成分为包括硫化氢、甲硫醇和二甲基硫等其形成是口腔内的唱厌氧菌分解含硫氨基酸的结果这些氨基酸底物来自龈沟液、血液、脱落上皮细胞、唾液或食物残屑等。其中牙龈卟啉单胞菌、具核梭杆菌能分解蛋氨酸和半胱氨酸或血清蛋白而生成大量的被认为是口腔主要致臭菌本实验也选用这两种标准菌和口臭患者的唾液细菌来建立体外产气模型。检测含量是临床诊断口臭的主要手段之一包括气相色谱仪法和硫化物检测仪法。????中华临床医师杂志电子版年月第卷第期 其中硫化物检测仪操作简便检测出的口腔中数值与鼻闻法的臭味指数得分具有良好的相关一致性因此在临床口臭诊断中得到广泛应用。本实验的结果显示与纯茶多酚溶液相比茶多酚维生素混合溶液对牙龈卟啉单胞菌和口臭患者唾液细菌产能力的抑制效果更为显著并且抑制作用接近临床常用的口臭治疗药物氯己定提示茶多酚与维生素对口腔产臭菌的抑制存在一定的增效协同作用。茶多酚具有较强的抗菌消炎作用可抑制口腔中多种细菌的生长。目前研究认为其抑制细菌生长的机制主要为凝固蛋白质能与菌体蛋白质结合而导致 细菌死亡。此外茶多酚中的类黄酮中的苯基能与臭气中的唱结合酚基能与臭气中的唱、唱等基团发生反应儿茶素则能与臭气发生酯化或酯交换对臭气物质进行吸附、吸收和溶解。但茶多酚自身容易被氧化而使药理功效降低故不少学者着力于研究茶多酚与其他活性成分联合应用以增强其稳定性或抑菌性。研究证实有机酸类能表现出对茶多酚抗氧化的增效作用聚壳糖、食盐能增强茶多酚的抑菌活性维生素类物质特别是维生素、维生素等天然抗氧化剂能同时增强茶多酚的抗氧化性和抑菌性唱。可见维生素类物质是与茶多酚联合应用的良好选择。维生素是抗坏血酸生物活性的化合物的通称具有良好的水溶性相比脂溶性的维生素更适合于口腔制剂的应用。维生素在氧化还原代谢反应中起调节作用是强有力的抗氧化剂可以保护其他抗氧化剂以获得药物制剂的长期有效性。有研究报道在抑制幽门螺旋杆菌和抑制沙门氏菌实验中联合使用茶多酚和维生素具有增效协同作用能取得更好的抑菌效果。国外学者在口臭体外孵育模型中加入葡萄糖后可以使值降低到畅臭味及水平明显下降而氧化唱还原电势则明显上升。在孵育结束时对臭味产物水平的分析发现加葡萄糖组明显低于未加葡萄糖组。说明葡萄糖可以刺激发酵和造成酸性明显抑制臭味的形成以及导致各种和臭味的产生有关的关键参数的改变。许多临床研究也证实了酸性可抑制或减少口臭中性或碱性则有利于口臭的产生。因此本研究采用维生素来造成酸性环境达到抑制臭味形成的目的。在实际应用中茶多酚易被氧化成为茶黄素、茶红素、茶褐素等深色素滞留在体内或口腔表面不易去除且茶多酚味苦涩口感欠佳。结合本实验结果可以考虑在口源性口臭的治疗中通过联合应用茶多酚与维生素在降低茶多酚浓度尽量减少其副作用的同时保证药品对口腔产臭细菌能有效抑制。但其具体的作用机理两者最佳浓度的配比及临床应用效果还需进一步研究。参 考 文 献 唱唱 唐明肖晓蓉章锦才等茶多酚对牙周主要致病菌的抗菌活性研究重庆医学唱畅 王琳杨小竺胡德渝黄芩与茶多酚除口臭的实验研究牙体牙髓牙周病学杂志唱畅 朱彩莲李鸣宇种中药提取物对种牙周可疑致病菌的体外抑菌实验上海口腔医学唱畅 肖波屈慧鸽黄清荣等茶多酚与维生素混合抑制幽门螺杆菌的研究茶叶科学唱畅 张嫚黄红兵周光宏等天然防腐剂在冷却牛肉保鲜中的应用食品与发酵工业唱畅 唱 唱 金人海朱敏茶与化学化学教育唱畅 张玲周正科袁林颖等茶叶对龋齿和口臭的预防机理福建茶叶畅 王莹茶多酚的抗氧化和抑菌活性及其增效剂生物学杂志唱畅 唐裕芳张妙玲冯波等茶多酚的抑菌活性研究浙江林学院学报唱畅 陈玉香刘阳周道玮茶多酚对豆油及猪油的抗氧化作用食品科学唱畅 龙秀李国基耿予欢茶多酚对干果类食品抗氧化作用的研究现代食品科技唱畅 邢淑婕刘开华茶多酚与维生素联合抑制牛肉干沙门氏菌研究食品科技唱畅 唱收稿日期唱唱本文编辑梁雷 张微云叶玮茶多酚与维生素联合应用抑制口腔产臭细菌产生挥发性硫化物的体外研究中华临床医师杂志电子版唱????中华临床医师杂志电子版年月第卷第期