清感九味丸微生物限度检查的方法验证

清感九味丸微生物限度检查的方法验证 2008年1月第1期中国民族医药杂志31 分钟,滤过,蒸干,残渣加甲醇lml使溶解,作为供试品溶 液.照薄层色谱法(《中国药典》一部附录)试验,吸取上述 溶液10td,点于以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层 板上,以石油醚(30,60?)一丙酮(9:1)为展开剂,展开,取 图3薄层色谱1t1(10%硫酸乙醇溶液显色) 1.倒心盾翅藤药材(景洪市) 2.倒心盾翅藤药材(勐海县) 图4薄层色谱图(紫外光灯365m) 3.倒心盾翅藤药材(勐腊县) 4.倒心盾翅藤药材(勐海县) 出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,于105~C加热至斑点显 色清晰,薄层色谱显2个紫红色斑点,置紫外光灯(365nm) 下检视,斑点显淡黄色荧光.图3,图4. 5小结 实验结果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明,倒心盾翅藤的显微特征为皮层薄壁细 胞中含有大型草酸钙簇晶,韧皮部薄壁细胞含大量的草酸 钙小簇晶,木薄壁细胞中散有方晶.髓部薄壁细胞较大,多 破碎,有大小不一的簇晶和菊糖.化学成分预试表明含有 萜类,糖类.上述特征可作为倒心盾翅藤质量 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 制定的 参考依据. 参考文献 [1]伍睿,叶其,陈能煜,等.倒心盾翅藤的化学成分的研究 [J].天然产物研究与开发,2000,13(1):14—16. [2]高万山,刘松明.中药材理化鉴别手册[M].南京:南京 大学出版社,1993,22. 2006年1O月22日收稿 清感九味丸微生物限度检查的方法验证 内蒙古鸟兰察布市第三医院(012000)陈建启 内蒙古药品检验所(010020)刘炳茹谢梅娟 摘要:目的:通过微生物限度检查的方法验证,建立清感九味丸微生物限度检查方法.方法:采 用常规法,培养基稀释法, 离心一薄膜过滤法对其进行加茵回收并计算回收率.结果:确立了清感九味丸的微生物限度 检查方法.结论:清感九味丸 细菌数计数可采用离心一薄膜过滤法,霉菌和酵母茵计数及控制茵检查可采用常规法. 关键词:清感九味丸;微生物限度检查;方法验证 中图分类号:R291.2文献标识码:B文章编号:1006—6810{2008)01—0031—03 清感九味丸处方中含有制草乌,诃子,漏芦花,胡黄连, 翻白草等9味药材.有消”黏”,解热,止咳作用.用于瘟疫 热症,感冒咳嗽,咽喉疼痛….从处方和作用看,该药可能 具有抑菌活性,那么对有抑菌作用的蒙成药按常规法做微 生物限度检查,药品中污染的微生物生长可能被抑制,就会 影响试验结果的可靠性,所以必须采用适当的方法,消除抑 菌活性后,微生物限度检查结果才能反映出药品真实的污 染情况.要判断检查方法的正确性和可行性,必须对所采 用的检验方法进行方法验证.我们对清感九味丸微生物限 度检查按文献的规定,进行了方法验证,确立了该品种的 微生物限度检查方法. 1试验 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 及仪器 1.1培养基:营养琼脂培养基,玫瑰红钠琼脂培养基,胆盐 乳糖培养基,营养肉汤培养基,改良马丁培养基,MUG培养基. 1.2试验菌株:金黄色葡萄球菌[cMcc(B)26003],枯草芽 孢菌[CMCC(B)63501],大肠埃希菌[cMcc(B)44102],白色 念珠菌[CMCC(F)98001],黑曲霉[CMCC(F)98003]. 上述培养基和菌株均由中国药品生物制品检定所提供. 1.3供试品:由内蒙古库伦蒙药厂提供. 1.4仪器:HIT一20O0集菌仪,反复使用集菌培养器,低速 电动离心机. 2试验部分 2.1菌液制备:取经3O,35?培养18,24小时的大肠埃 希菌,金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌肉汤培养物和23, 28?培养24,48小时的白色念珠菌改良马丁培养物,用0. 9%无菌氯化钠溶液制成每lml含菌数为50,lOOefu的菌 悬液;取经23,28?培养1周的黑曲霉斜面培养物,加3, 5mlO.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱,吸出孢子悬液至无 菌试管内,用0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml含孢子数为 50,lOOefu的孢子悬液. 2.2供试液制备:称取供试品lOg,加pH7.0无菌氯化钠一 蛋白胨缓冲液至lOOml,作为1:10的供试液. 32中国民族医药杂志2燃卑!月第1期 2.3细菌,霉菌酵母菌计数方法的验证 2.3.1药典常规法,取lml供试液洼皿,分别加入五株试 验菌,测定回收率. 2.3.2培养基稀释法,取0.2ml供试液注皿,分别加入五 株试验菌,测定回收率. 2.3.3离心一薄膜过滤法,取10In[供试液以500转/分离 心5分钟.取上清液lml加入薄膜过滤器中,冲洗,在最后 一 次冲洗液中加入试验菌,抽干后取出滤膜,落面朝上贴于 培养基平板上培养,测定回收率. 2.3.4回收率测定:试验组:常规法和培养基稀释法取规 定量供试液和50,100cfu试验菌注腿,行制备2个平皿, 按平皿法测定其菌数;离心一薄膜过滤法,取规定量供试液 过滤,冲洗,在最后一次冲洗液中加人50.100efu试验菌, 过滤,按薄膜过滤法测定其菌数.菌液组:取与试验组相同 的50,100du试验菌注皿,平行制备2个平皿,按平皿法测 定其菌数.供试品对照组:常规法和培养基稀释法取规定 量供试液注皿,平行制备2个平皿,按平皿法测定供试品本 底茵数;离心一薄膜过滤法,取规定量供试液过滤,冲洗,致 薄膜过滤法测定供试品本底菌数 2.3.5回收率计算:回收率应不低于70%. 回收率=[(试验组平均菌落数,供试品对照组平均菌 落数)?菌液组平均菌落数]×100% 2.3.6试验结果:见表l,2,3. 表1常规法测定5株试验菌的回收率 试回收率(%) 大肠金黄色枯草自色黑曲霉菌 数埃希菌葡萄球菌芽孢轩荫念珠芮……, 试验次数 回收率(%) 大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢秆菌 表3离心一薄膜过滤法测定3株试验菌的回收率 (每膜冲洗300mlplY/.0无菌氯化钠一蛋臼胨缓冲液,分3次冲洗) 23.7结果判断:从表1可以看出,本品对大肠埃希菌,白 色念珠菌和黑曲霉无抑菌活性,回收率不低于70%;对金 黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌有抑菌活性,心收率低于 70%,改用培养基稀释法对大肠埃希菌,金黄色葡萄蹦菌和 枯草芽孢杆菌重新验证.从表2可以看出,金黄色葡萄球 菌,枯草芽孢杆菌回收率仍低于70%,说明培养基稀释落 (0.2nfl/~1].)尚不能消除其抑菌活性.改用离心一薄膜过滤 法对大肠埃希菌,金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌再次验 证,从表3可以看出,采用离心一薄膜过滤法可消除其抑菌 活性,三种菌回收率低于70%.说明采用离心一薄膜过滤 法(每膜冲洗300mlpH7.0无菌氯化钠一蛋白胨缓冲液,分 3次冲洗)可测定其细菌数,采用药典常规法可测定其霉菌 和酵母菌数. 2.4控制菌检查方法验证 2.4.1大肠埃希菌的验证:试验组:取1:10供试液10ml及 50,100cfu大肠埃希菌加入100ml胆盐乳糖增菌培养基中, 依大肠埃希菌检查法进行检查.阴性菌对照组:取1:10供 试液]0ml及50,100cfu金黄色葡萄球菌加入100ml胆盐乳 糖增菌培养基中,依大肠埃希菌检查法进行检查. 2.4.2大肠菌群的验证:试验组:取1:10供试液Iml,加入 】l胆盐乳糖发酵培养基管中,同时加入50,100eft1大肠 埃希菌,依大肠菌群检查法进行检查.阴性菌对照组:取 1:10供试液1m】,加入10ml胆盐乳糖发酵培养基管中,同时 加入50,100cfu金黄色葡萄球菌,依大肠菌群检查法进行 榆查. 2.4.3试验结果:大肠埃希菌,大肠菌检查方法验证结果 见表4. 表4常规法控制菌验证结果 2.4.4结果判断:从上表可以看出,试验组检出试验菌,阴 性菌对照组未榆出阴性对照菌,说明用常规法即可检出大 肠埃希菌,大肠菌群. 3结论 通过对本品细菌,霉菌及酵母菌计数方法和控制菌检 查方法的验证,确定该品种采用离心薄膜过滤法(每膜冲洗 300mlDH7.0无菌氯化钠一蛋白胨缓冲液,分3次冲洗)测 定其细菌数,采用药典常规法测定其霉菌和酵母菌数;采用 药典常规法检查其控制菌. 4讨论 从文献0可知,制草乌,诃子,黑云香,胡黄连等单昧蒙 药材具有清热,杀”黏”等功能,含有这些蒙药材的蒙成药即 可能具有抑菌作用,通过上述试验可知,消感九味丸对革兰 2008年1月第1期中国民族医药杂志 氏阳性菌的代表菌株金黄色葡萄球菌和药品中常见的污染 菌株枯草芽孢杆菌抑菌作用较强,常规法和培养基稀释汝 回收率都达不到70%,只有用离心一薄膜过滤各代表菌回 收率才达到70%,说明其抑菌作用被消除,做微生物限度 检查时,得到的结果才真实可靠. 参考文献 [1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[s].一部.北京: 化学工业出版社,2005:附录71. [2]中华人民共和国卫生部药典委员会.药品标准?蒙药分 册fM].1998:t41 [3]内蒙古自治区卫生厅.内蒙古蒙药材标准[M].内蒙古 科学技术出版社,1996. 2007年4月18日收稿 蒙药苘麻子和冬葵子的鉴别应用 内蒙古自治区中蒙医医~(oloo2o)张海玉阿拉探巴干 关键词:苘麻子;冬葵子;鉴别 中圈分类号:R291.2文献标识码:A 目前很多市场销售的茼麻子和冬葵子互相代替使用, 这是不对的,应该予以纠正.茼麻子和冬葵子虽然均为锦 葵科植物,但E’ff3来源为不同属,植物形态,果实形态,种子 形态,药性和化学成分,功能与主治均不相同. 1来源 茼麻子(黑玛音一乌热,扫玛然砸等别名)为锦葵科植 物茼麻属植物的种子,冬葵子(萨日木格一占巴,玛宁占巴 等别名)为锦葵科植物名葵属植物的种子. 2植物形态 2.1苘麻:为1年生草本.茎直立有柔毛,高1,2m,叶互 生,圆心形长5—10cm,两面有密星状柔毛,叶柄长3— 12cm,靠近药的一端有节,药萼杯状五裂,花黄色,花瓣倒卵 形,长约10Cl/I,心皮10,15个排列成轮状. 2.2冬葵:为1年生或多年生草本.茎直立,有星状长柔 毛或无毛,高60,90cm.单星状长柔毛或无毛,高6o, 90cm单叶互生,叶柄长1.5,9cm,n-t片肾形至圆形掌状5 , 7浅裂直径4.5,7cm两而被极疏糙状毛或几乎无毛. 基部心形边缘有钝锯齿,花小,从叶月夜间淡红色,小包片 3,,’线形,有细毛,花萼杯状五齿裂,花瓣5倒卵形顶端凹 入,子房1O,11室.见图1. 茼麻子冬葵 图1两种植物形态 文章编号:1006—681O(2008)O1—0033一O1 3果实和种子形态 3.1简麻果实为蒴果半球形,直径2cm左右,分果片(瓣) 】5—2O个,有粗毛,顶端有2长芝.种子各子呈三角状卵形 长约3.5,6cm,宽2.5,4.5cm,厚1,2cm,表面暗褐色,有 白色疏的绒毛,凹陷处有类椭圆形种脐,浅棕色,四周有效 射状细纹,皮坚硬,子叶2片,重叠折曲富油性. 3.2冬葵果实为蒴果扁平圆盘状.由10,11个心皮组成 成熟时心皮彼此分离,并与中轴脱离.种子呈圆肾三角形, 长2—2.5cm,宽1.5—2cm厚呈圆背状1.5cm左右,种脐凹 陷部位很薄,表面黑色或黑褐色. 4药性和化学成分 4,l茼麻子:味甘,涩,性平,效轻,燥浮《金光注释集》:”昧 辛,苦,效轻,糙,燥,浮”.《蒙药学》:”味苦,性平,效糙,轻, 燥,浮.化学成分为种子含脂肪油15%,17%油中含亚油 酸,并含球蛋自,蛋白质水解后得组酸,精氨酸,酪氨酸,赖 氨峻等” 4,2冬葵子:味甘,涩,性凉.效锐,重,燥.化学成分:种 子含中性多糖,酸性多糖,以及肽聚糖等成分. 5功能与主治 5.1苘麻子:燥协日乌系,杀虫,主治协日乌素症,陶 赖,赫如呼,巴木病,浊热,自脉病,疥癣,秃疮.《论 说医典》:”祛皮肤病,协日乌素症”.《蒙药学》:”燥协日乌 素,杀虫”. 5.2冬蒌子:通脉,利尿消种,祛协日,燥脓,止泻,止渴.主 治肾热,膀胱热,尿闭,膀胱结孑于,浮肿,水肿,渴症,疮疡. 《认药白晶箍》:”祛肾热,止泻,止渴,通尿”.《呼羽I必德,-It 亚》:”水,燥疮脓,止渴”. 2006年9月15日收稿