畜禽繁殖与改良教案

2014学年秋季学期第16周总课时：2课程名称畜禽繁殖与改良时间2014年12月1日星期星期一任课教师白绪珍职称中学一级节次第5-6节班级三年级养殖班授课时数2教具安排多煤体教学 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 目第9章动物繁殖新技术第一节胚胎移植技术教学方法提问法、讲授法、练习法教学 内容 财务内部控制制度的内容财务内部控制制度的内容人员招聘与配置的内容项目成本控制的内容消防安全演练内容 目标要求教学内容：=1\*GB2⑴掌握胚胎移植的生理基础和处理程序=2\*GB2⑵掌握胚胎移植的基本原则⑶了解现代动物繁殖新技术重点难点：⑴掌握胚胎移植的生理基础和处理程序⑵了解现代动物繁殖新技术情感目标能力点：培养学生热爱生命、关爱生活的情趣专业素质渗透点：通过讲解“胚胎移植技术”让学生了解生物界基本结构的统一性，使学生初步建立唯物主义进化论意识。【教学过程组织】清点人数（1—2分钟）复习导入：卵巢囊肿有哪几种情况？（1—3分钟）进入新课一、胚胎移植的意义（20分钟）1．充分发挥优良母畜的繁殖潜力缩短优了良母畜的繁殖周期同时可产生更多的后代。2.缩短世代间隔，及早进行后裔测定能通过重复超数排卵，不断移植，使后代总数大大地增加，可及早地对后代进行后裔测定，MOET育种已成为现代育种工作的有力手段。3.增加双胎率在肉牛业和肉羊业中通过胚胎移植增加双胎率。不但提高了供体母畜的繁殖率，同时也提高了受体母畜的繁殖率，从而大大提高了生产效率。4.保存品种资源胚胎长期保存是保存动物品种资源的理想方法。冷冻胚胎和冷冻精液共同构成动物优良性状的基因库。5.防止疾病传播在养猪业中，采用胚胎移植技术代替剖腹取仔的方法可培育无特异病原体（SPE）猪群。6.使不孕母畜获得生育能力对于不能妊娠的母畜，可以根据具体情况专门作为供体或受体，继续发挥其繁殖作用。7.促进基础理论研究胚胎移植技术为动物繁殖生理学、生物化学、遗传学、细胞学、胚胎学、免疫学、动物育种学和进化等学科开辟了新的试验研究途径。8.满足畜牧业现代化的需要胚胎移植可以使优良母畜的繁殖效率接近或达到生物学最高限度，并且能够迅速改进家畜的品质。二、胚胎移植的基本原则（20分钟）（一）胚胎移植前后供体和受体所处环境的同一性1.在分类学上的同属性在分类学上属于同一个种。2.生理上的一致性一般供、受体发情同步差要求在±24h以内。3.解剖部位的一致性胚胎采自供体的输卵管就移到受体的输卵管，采自供体的子宫角就移至受体的子宫角。（二）胚胎发育的期限胚胎采集和移植的期限（胚胎日龄）不能超过发情周期黄体的寿命，（三）胚胎的质量在胚胎移植全部操作过程中，胚胎不应受任何不良因素的影响。（四）供、受体的状况1.生产性能和经济价值供体的生产性能要高于受体，经济价值要大于受体，这样才能体现胚胎移植的优越性。2.全身及生殖器官的生理状况供、受体应健康、营养良好、体质健壮，特别是生殖器官应具有正常生理机能，否则会影响胚胎移植效果。三、胚胎移植技术（28分钟）胚胎移植的过程，在各种家畜基本相同，都是要经过供体、受体的选择，供体超排处理，受体同期发情处理，配种（输精），收集胚胎（采卵）和移植胚胎（移卵）等步骤。（一）供体和受体的选择1.供体的选择（1）生产性能高，经济价值大，具备遗传优势，在育种上有价值。（2）既往繁殖史正常，无遗传缺陷，具有良好的繁殖能力，且分娩顺利。（3）体质健壮，膘情适度。2.受体的选择受体母畜可选用非优良品种个体，但应具有良好的繁殖性能和健康体况，可选择与供体发情周期同步的母畜为受体。（二）药品和器械的准备1.药品FSH、HCG、PGF2；麻醉剂；生盐理水、75%酒精、2%碘酒、青霉素。2.器械10ml和1ml注射器、手术刀、剪子、镊子、止血钳、创布、缝合针、线及手术台；冲胚管、移胚管、显微镜、表面皿、凹玻片、拔胚针等。（三）供体的超数排卵超排技术通常用于单胎家畜，其目的是让优良母畜排出大量卵子，充分发挥其繁殖潜力，是胚胎移植中的一个重要环节。1.超排方法（1）PMSG或FSH超排给供体母畜注射PMSG或FSH，发情开始后12～16h和20～24h各配种（输精）一次，并于第一次配种后静脉注射HCG或LH，以便排出更多卵子。激素的应用时间和剂量因家畜种类不同而有差异。（2）配合应用前列腺素（PG）PG的用法通常是在应用PMSG以后大约48h进行肌注。牛的用量因PG种类而异，PGF2为30mg，15甲基PGF2为2mg,氯前列烯醇为500g；绵羊和山羊的用量为牛的一半。（3）PMSG与抗PMSG配合使用抗PMSG可以消除PMSG的残留作用，明显增加可用胚胎数，提高超排效果。2.超排效果的评判标准超排是胚胎移植中最难控制的一个环节，在实践中只要能使一半以上处理母畜达到满意结果，则认为超排是成功的。随堂练习（3—5分钟）通过对当堂课内容的 总结 初级经济法重点总结下载党员个人总结TXt高中句型全总结.doc高中句型全总结.doc理论力学知识点总结pdf 来了解学生的掌握情况，并对学生有困惑的地方进行再一次的讲解。1．超数排卵的方法有、、2.胚胎移植的意义有、、、、、、、3．胚胎移植的基本原则有、、、小结：采用学生互相提问方式（3—10分钟）如：A学生问：“超数排卵的方法有？由B学生回答等课后作业：（1—2分钟）1.胚胎移植的基本程序是什么？2.在胚胎移植时如何选择供体和受体？3.如何对供供进行超数排卵？板书 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 ：第一节胚胎移植技术一、胚胎移植的意义二、胚胎移植的基本原则（一）胚胎移植前后供体和受体所处环境的同一性（二）胚胎发育的期限（三）胚胎的质量（四）供、受体的状况三、胚胎移植技术（一）供体和受体的选择（二）药品和器械的准备（三）供体的超数排卵教后感：利用多媒体辅助展示教学过程中遇到的抽象问题，多媒体设计直观性，这充分调动了学生的积极性、主动性和创造性，从而更容易地达到了教学目的，使学生在愉快、轻松的环境中获得知识，培养了技能。2014学年秋季学期第16周总课时：4课程名称畜禽繁殖与改良时间2014年12月5星期星期5任课教师白绪珍职称中学一级节次第4-5节班级三年级养殖班授课时数2教具安排多煤体教学题目第九章动物繁殖新技术第一节胚胎移植技术教学方式演示法、讲授法、练习法教学内容目标要求教学内容：=1\*GB2⑴.掌握受体的同期发情处理方法。⑵.掌握采胚方法和移胚方法。重点难点：=1\*GB2⑴受体的同期发情处理=2\*GB2⑵胚胎的采集和移胚情感目标：能力点：掌握胚胎的采集和移植专业素质渗透点：通过讲解“胚胎的移植”的基本知识，让学生了解畜禽体生长的一般规律，使学生建立科学的认识观教学过程组织：清点人数（1—2分钟）复习导入：卵巢囊肿有哪几种情况？（3—5分钟）进入新课（四）、受体的同期发情（20分钟）当前比较理想的同期发情药物是前列腺素及其类似物，其剂量因PG种类和用法不同而异。15-甲基PGF22mg肌注，氯前列烯醇500g肌注。各种家畜实施超排处理的具体方法见本书第5章家畜繁殖技术中的发情控制技术部分。（五）供体的发情鉴定和配种超排处理结束后，要密切观察供体的发情征状，为确保卵子受精，一般在发情8～12h输精一次，以后间隔8～12h再输精一次，并且要加大输精量。（六）胚胎采集在配种或输精后适当时间，从超排供体回收胚胎，准备给受体移植，称胚胎采集或胚胎回收，简称采胚。1.冲胚液和培养液的配制现在多采用杜氏磷酸盐缓冲液（PBS），不但可用于冲洗、采集胚胎，还用于体外培养、冷冻保存和解冻胚胎。冲胚液犊牛血清含量一般为3%（1%～5%），培养液血清含量为20%（1%～50%）。犊牛血清需加热（56℃水浴30min）灭活。2.采胚时间根据配种时间、排卵的大致时间、胚胎的运行速度、胚胎的发育阶段、畜种、胚胎所处部位及采胚方法等因素来确定是适宜的采胚时间。3.采胚方法采胚方法分为手术法和非手术法两种。手术法适用于各种动物，尤其是绵羊、山羊、猪及实验动物；非手术法仅适用于牛、马等大家畜，且只能在胚胎进入子宫后进行。（1）手术法采胚A母畜保定一种方法是用全身或后躯麻醉，母畜进行仰卧保定。另一种方法是用局部麻醉，使母畜站立于六柱栏中保定。两者的保定姿势均为前低后高的方式。B麻醉全身麻醉可用普鲁卡因、酒精等；局部后躯麻醉用普鲁卡因、利多卡因进行腰荐或尾椎硬膜外腔注射，手术部位再以利多卡因作皮肤浸润麻醉。C手术部位母牛可在乳房至脐孔之间的白线上剖腹，切口长约10cm；羊在乳房左侧切口，切口长度4～6cm。D采胚主要包括有输卵管冲胚法、子宫角冲胚法和输卵管—子宫角冲胚法三种。配教材图图9-2、图9-3ES防止手术部粘连的方法①不要用金属器械挟持生殖器官。②所用手套、棉花、纱布等术前要用生理盐水浸湿，以防粘附于生殖器官上。③在生殖器官表面撒涂低浓度肝素液、樟脑油等，以防止其表面附着血或血凝块。④缝合要牢固、紧密，防止术后发生疝症。（2）非手术法采胚由于手术法采胚在生产应用中受到限制，目前在马、牛等大家畜都用采胚管进行非手术法采胚，一般在配种后7（6～8）天进行。供体牛的保定和麻醉同手术法采胚，采胚时先用扩张棒对子宫颈进行扩张（青年牛尤为必要）。采胚管消毒后，将无菌不锈钢导杆插入采胚管内。将采胚管经子宫颈缓慢导入一侧子宫角基部，由助手抽出部分不锈导杆，操作者继续向前推进采胚管，当达到子宫角大弯附近时，助手从进气口注入12～25ml气体。当气囊位置和充气量合适时，抽出全部不锈钢导杆。助手用注射器吸取事先加温至37℃的冲胚液，从采胚管的进水口推进，进入子宫角内，再将冲胚液连同胚抽回注射器内，如此反复冲洗和回收5～6次，将每次回收的冲胚液收入集胚器内，并置于37℃的恒温箱或无菌检胚室内等待检胚。一侧子宫角冲胚结束后，按上边方法再冲洗另一侧子宫角。配教材图9-44.检胚检胚应在20～25℃的无菌操作室内进行。在立体显微镜下，检查收集到的胚胎数，并用一细检胚吸管将胚胎移至新鲜培养液内，在放大40～200倍的复式显微镜下，进行形态学观察，选出适合于移植的正常胚胎。配教材图9-5、图9-6（七）胚胎保存1.常温保存指在常温（15～25℃）下保存胚胎。通常采用含20%犊牛血清的PBS保存液，可保存胚胎4～8h。2.低温保存指在0～10℃的较低温度下保存胚胎的方法。在此温度下，胚胎细胞分裂暂停，新陈代谢速度显著减慢，所以较常温保存的存活时间要长。3.冷冻保存指在干冰（-79℃）和液氮（-196℃）中保存胚胎。其最大优点是胚胎可以长期保存，而对其活力无影响。胚胎冷冻方法有以下几种：（1）逐步降温法这是一种传统方法，本法的优点是解冻后胚胎存活率较高，但操作程序比较复杂。（2）一步细管法即在细管内用非渗透性蔗糖溶液一步脱除抗冻剂（甘油）的方法。其特点是从解冻到移植的全过程简单易行，利于在生产中推广应用。（3）玻璃化法用这种方法冷冻时，胚胎内外液体能同时玻璃化，不会形成冰晶，能较好地保护胚胎。（八）胚胎移植胚胎移植就是将采取的可用胚胎移给受体母畜，亦称卵的移植，简称移卵。1.移胚部位早期胚胎少于8细胞时，一般应移植于输卵管，多于8细胞应移植于子宫角。2.移胚方法与采胚方法相似，也分为手术法与非手术法两种，前者适用于不能进行直肠操作的中小家畜，后者适用于大家畜。（1）手术法移植与采胚方法相似，对母畜进行保定、麻醉。以山羊为例，先在其乳房一侧作一平行于腹中线的切口，暴露输卵管和子宫角，再将胚胎注入输卵管或子宫角。无论是子宫内移植还是输卵管移植，都要避免把空气注入。移植完毕后将输卵管及子宫角送回腹腔，按回收手术中的要求缝合腹壁创口，术后做好移植记录。（2）非手术法移胚非手术法移胚只适用于牛、马等大家畜。与采胚相似，先将母畜保定麻醉后，再移胚。3.影响胚胎移植妊娠率的因素（1）胚胎因素包括胚胎质量、日龄、移植胚胎的数量、提供胚胎的供体、胚胎在体外培养的时间、鲜胚和冻胚等。（2）母体因素包括供、受体发情同期化程度，受体的孕酮水平，受体的营养，子宫、卵巢的生理状况等。（3）其他因素包括自然发情与人工诱导发情，移植器污染程度以及操作者熟练程度等。（3—5分钟）检胚的方法为胚胎保存的方法有、、胚胎移植的部位有手术法移植胚胎的方法有、,非手术法移胚的方法有、影响胚胎移植妊娠率的因素有小结：采用学生互相提问方式（3—10分钟）如：A学生问：“胚胎的保存方法有？由B学生回答……课后作业：(1—2分钟)1、复习本节所讲内容；2、简述胚胎移植的基本过程板书设计:第一节胚胎移植技术（四）受体的同期发情（五）供体的发情鉴定和配种（六）胚胎采集1.冲胚液和培养液的配制2.采胚时间3.采胚方法（1）手术法采胚（2）非手术法采胚4.检胚（七）胚胎保存1.常温保存2.低温保存3.冷冻保存（八）胚胎移植1.移胚部位2.移胚方法3.影响胚胎移植妊娠率的因素（1）胚胎因素（2）母体因素（3）其他因素教后感：本节课采用多媒体辅助教学，完成了本节课的教学目标，课堂中学生合作精神得到了发扬，不足：学生 知识点 高中化学知识点免费下载体育概论知识点下载名人传知识点免费下载线性代数知识点汇总下载高中化学知识点免费下载 的掌握有待加强2014学年秋季学期第17周总课时：6课程名称畜禽繁殖与改良时间2014年12月8星期星期一任课教师白绪珍职称中学一级节次第5-6节班级三年级养殖班授课时数2教具安排多煤体教学题目第九章动物繁殖新技术第二节胚胎生物工程技术教学方式演示法、讲授法、练习法教学内容目标要求教学内容：=1\*GB2⑴.了解体外受精及性别控制技术⑵.关于卵核移植与动物克隆技术(3).动物转基因技术重点难点：=1\*GB2⑴体外受精技术=2\*GB2⑵胚胎分割与嵌合技术情感目标：能力点：培养学生用发展有眼光看待万物思想意识专业素质渗透点：通过讲解“胚胎生物工程技术”的基本知识，让学生了解畜禽养殖前沿技术，使学生建立科学的世界观教学过程组织：清点人数（1—2分钟）复习导入：（3—5分钟）胚胎保存的方法？胚胎移植的方法进入新课一、体外受精技术（20分钟）（一）、体外受精的意义1、充分发挥优良母畜的繁殖力2、评价公畜的繁殖性能3、作为其他相关研究的手段（二）体外受精技术1、精子采集与获能处理（1）精子采集：可采用射出精子或附睾尾精子（2）精子获能：精子可在体内子宫中获能，也可在体外获能2、卵母细胞采集与成熟培养（1）卵母细胞采集将动物物的卵巢取出，用生理盐水冲洗后，放入盛有生理盐水的保温瓶内运回实验室待用，用注射针头抽出卵母细胞（2）卵母细胞成熟培养：将卵母细胞放在培养液中，在温度39℃和5%CO2气相条件下培养24小时左右，当卵母细胞达到成熟时，卵黄周隙排出第一极体。3、精卵体外受精将成熟培养的卵母细胞先用精液洗涤3次，然后放入卵母细胞，再加入获能精子，置于CO2培养箱孵育。4、受精的判定出现下列现象为受精：精子穿入卵内、精子头部膨大、精子头部和尾部在卵细胞质内存在、第二极体的排出、原核的形成和正常的卵裂等现象即确定为受精5、体外受精（早期胚胎）的培养发育二、性别控制技术（一）胚胎性别控制技术1、X、Y精子的分离（1）理论依据（2）分离方法2、改变受精环境3、卵子的无性繁殖（二）、胚胎性别鉴定技术1、细胞学方法（1）胚胎分割（2）羊胚预培养及有丝分裂阻滞（3）制作染色体标本（4）染色及镜检2、生物化学微量分析法3、免疫学方法（1）、细胞毒性分析法（2）、间接免疫荧光法4、分子生物学方法三、卵核称植与动物克隆技术（一）核移植与克隆的意义1、研究细胞核与细胞质的遗传作用2、研究配子发生过程中核的印迹作用3确定动物早期胚胎发育期间核的分化程度4、生产大量克隆动物5、克隆动物技术可为生物药物开发和珍稀动物保护做出重大南献（二）、核移植和动物克隆的原理（三）操作技术1、核移植技术（1）获取胚胎和卵母细胞（2）显微操作（3）电融合（4）培养（5）移植以产生克隆绵羊为例，克隆技术步骤大致如下：将胚盘细胞培养在饲养层上，建立长久的细胞系除去受体卵母细胞的核及含有中期板的少量细胞质从全能细胞系取出1个细胞与去核卵母细胞融合将重建的胚胎移植给临时受体羊，并在7天后鉴定其发育情况将发育成的桑椹胚和囊胚移植给其他绵羊，使其发育到产出羔羊四、胚胎分割技术（一）胚胎分割技术1、胚胎分割的方法（1）对2-16细胞期胚胎，用显微镜操作仪上的玻璃针或刀片，将每个卵裂或两个卵裂球为一组或4个卵裂球为一组进行分割，分别放入一个空透明带内，然后进行移植（2）与上述方法相同，将桑椹胚或早期囊胚一分为二或一分四，将每块细胞团移入一登上空透明带内，然后进行移植2、胚胎分割的程序（1）用促性腺激素促使牛、羊超数排卵（2）通过外科手述取出2、4、8等分裂球的胚胎（3）将秀明带中的卵裂球分离，用吸管吸出（4）将分离的分裂球放入其他动物预先掏空的秀明带中，在每个透明带中放入1—2个卵裂球（5）将分割后的胚胎埋藏于琼脂中，放入羊或其他动物输卵管中培养3-4天（6）将胚胎冲洗出来经鉴定后，再作移植用（二）胚胎嵌合技术1、嵌合体的制作方法（1）早期胚胎聚合法=1\*GB3①采集胚胎=2\*GB3②除去透明带=3\*GB3③胚胎的聚合=4\*GB3④聚合胚胎的培养=5\*GB3⑤嵌合体的移植=6\*GB3⑥嵌合体的鉴定（2）分裂球聚合法（3）囊胚注入法2、嵌合体的标记及鉴定方法五、动物转基因技术（一）外源基因导入的主要方法1、原核显微注射法2、反转录病毒感染胚胎法3、胚胎干细胞法子、精子载体法（二）基因导入的应用前景1、动物育种2、生产动物蛋白六、胚胎干细胞技术（一）、形态与功能特点1、形态学特征2、功能特征（二）胚胎干细胞建系技术要点1、饲养层的制备及分化抑制物的选择2、早期胚胎及PGC的选择和分离3、早期胚胎及PGC的培养和ESC的分离传代4、ESC的鉴定及保存（3—5分钟）1体外受精的意义为2胚胎性别鉴定技术、、、3核移植技术4核移植及动物克隆的意义是。5嵌合体的制作方法论小结：采用学生互相提问方式（3—10分钟）如：A学生问：“体外受精技术包括？由B学生回答……课后作业：(1—2分钟)1、复习本节所讲内容；2、简述胚胎移植的基本过程板书设计:第二节胚胎生物工程技术简介一、体外受精技术（20分钟）（一）、体外受精的意义（二）体外受精技术1、精子采集与获能处理2、卵母细胞采集与成熟培养3、精卵体外受精4、受精的判定5、体外受精（早期胚胎）的培养发育二、性别控制技术（一）胚胎性别控制技术（二）、胚胎性别鉴定技术三、卵核称植与动物克隆技术（一）核移植与克隆的意义（二）、核移植和动物克隆的原理（三）操作技术四、胚胎分割技术（一）胚胎分割技术（二）胚胎嵌合技术五、动物转基因技术（一）外源基因导入的主要方法（二）基因导入的应用前景六、胚胎干细胞技术（一）、形态与功能特点（二）胚胎干细胞建系技术要点教后感：本节课采用讲授法，及讨论法。课前准备也十分充分，让学生充分发挥自己的优势，促进学生学习方式的改变，注意了学生的学习动机、兴趣、习惯、信心等非智力因素的培养不足之处：在教学过程的组织中应该注意时间的把控2014学年秋季学期第17周总课时：8课程名称畜禽繁殖与改良时间2014年12月12星期星期五任课教师白绪珍职称中学一级节次第4-5节班级三年级养殖班授课时数2教具安排多煤体教学题目第九章动物繁殖新技术复习教学方式讲授法、归纳法、练习法教学内容目标要求复习内容：=1\*GB2⑴.胚胎移植的生理基础和处理程序⑵.胚胎移植的基本原则(3).现代动物繁殖新技术重点难点：=1\*GB2⑴胚胎移植的生理基础和处理程序=2\*GB2⑵胚胎移植技术情感目标：能力点：培养学生团结、互助的精神专业素质渗透点：通过讲解“动物繁殖新技术”的基本知识，让学生了解畜禽养殖前沿技术，使学生建立科学的世界观教学过程组织：清点人数（1—2分钟）复习导入：（3—5分钟）卵核移植是指？动物克隆是指？进入复习一、胚胎移植的意义（20分钟）1．充分发挥优良母畜的繁殖潜力2.缩短世代间隔，及早进行后裔测定能3.增加双胎率4.保存品种资源5.防止疾病传播6.使不孕母畜获得生育能力7.促进基础理论研究8.满足畜牧业现代化的需要二、胚胎移植的基本原则（一）胚胎移植前后供体和受体所处环境的同一性1.在分类学上的同属性在分类学上属于同一个种。2.生理上的一致性一般供、受体发情同步差要求在±24h以内。3.解剖部位的一致性胚胎采自供体的输卵管就移到受体的输卵管，采自供体的子宫角就移至受体的子宫角。（二）胚胎发育的期限胚胎采集和移植的期限（胚胎日龄）不能超过发情周期黄体的寿命，（三）胚胎的质量在胚胎移植全部操作过程中，胚胎不应受任何不良因素的影响。（四）供、受体的状况1.生产性能和经济价值2．全身及生殖器官的生理状况三、胚胎移植技术（一）供体和受体的选择1.供体的选择（1）生产性能高，经济价值大，具备遗传优势，在育种上有价值。（2）既往繁殖史正常，无遗传缺陷，具有良好的繁殖能力，且分娩顺利。（3）体质健壮，膘情适度。2.受体的选择受体母畜可选用非优良品种个体，但应具有良好的繁殖性能和健康体况，可选择与供体发情周期同步的母畜为受体。（二）药品和器械的准备1.药品FSH、HCG、PGF2；麻醉剂；生盐理水、75%酒精、2%碘酒、青霉素。2.器械10ml和1ml注射器、手术刀、剪子、镊子、止血钳、创布、缝合针、线及手术台；冲胚管、移胚管、显微镜、表面皿、凹玻片、拔胚针等。（三）供体的超数排卵超排技术通常用于单胎家畜，其目的是让优良母畜排出大量卵子，充分发挥其繁殖潜力，是胚胎移植中的一个重要环节。1.超排方法（1）PMSG或FSH超排给供体母畜注射PMSG或FSH，发情开始后12～16h和20～24h各配种（输精）一次，并于第一次配种后静脉注射HCG或LH，以便排出更多卵子。激素的应用时间和剂量因家畜种类不同而有差异。（2）配合应用前列腺素（PG）PG的用法通常是在应用PMSG以后大约48h进行肌注。牛的用量因PG种类而异，PGF2为30mg，15甲基PGF2为2mg,氯前列烯醇为500g；绵羊和山羊的用量为牛的一半。（3）PMSG与抗PMSG配合使用抗PMSG可以消除PMSG的残留作用，明显增加可用胚胎数，提高超排效果。2.超排效果的评判标准超排是胚胎移植中最难控制的一个环节，在实践中只要能使一半以上处理母畜达到满意结果，则认为超排是成功的。（四）、受体的同期发情（20分钟）当前比较理想的同期发情药物是前列腺素及其类似物，其剂量因PG种类和用法不同而异。15-甲基PGF22mg肌注，氯前列烯醇500g肌注。（五）供体的发情鉴定和配种超排处理结束后，要密切观察供体的发情征状，为确保卵子受精，一般在发情8～12h输精一次，以后间隔8～12h再输精一次，并且要加大输精量。（六）胚胎采集在配种或输精后适当时间，从超排供体回收胚胎，准备给受体移植，称胚胎采集或胚胎回收，简称采胚。1.冲胚液和培养液的配制现在多采用杜氏磷酸盐缓冲液（PBS），不但可用于冲洗、采集胚胎，还用于体外培养、冷冻保存和解冻胚胎。冲胚液犊牛血清含量一般为3%（1%～5%），培养液血清含量为20%（1%～50%）。犊牛血清需加热（56℃水浴30min）灭活。2.采胚时间根据配种时间、排卵的大致时间、胚胎的运行速度、胚胎的发育阶段、畜种、胚胎所处部位及采胚方法等因素来确定是适宜的采胚时间。3.采胚方法采胚方法分为手术法和非手术法两种。手术法适用于各种动物，尤其是绵羊、山羊、猪及实验动物；非手术法仅适用于牛、马等大家畜，且只能在胚胎进入子宫后进行。（1）手术法采胚A母畜保定一种方法是用全身或后躯麻醉，母畜进行仰卧保定。另一种方法是用局部麻醉，使母畜站立于六柱栏中保定。两者的保定姿势均为前低后高的方式。B麻醉全身麻醉可用普鲁卡因、酒精等；局部后躯麻醉用普鲁卡因、利多卡因进行腰荐或尾椎硬膜外腔注射，手术部位再以利多卡因作皮肤浸润麻醉。C手术部位母牛可在乳房至脐孔之间的白线上剖腹，切口长约10cm；羊在乳房左侧切口，切口长度4～6cm。D采胚主要包括有输卵管冲胚法、子宫角冲胚法和输卵管—子宫角冲胚法三种。配教材图图9-2、图9-3ES防止手术部粘连的方法①不要用金属器械挟持生殖器官。②所用手套、棉花、纱布等术前要用生理盐水浸湿，以防粘附于生殖器官上。③在生殖器官表面撒涂低浓度肝素液、樟脑油等，以防止其表面附着血或血凝块。④缝合要牢固、紧密，防止术后发生疝症。（2）非手术法采胚由于手术法采胚在生产应用中受到限制，目前在马、牛等大家畜都用采胚管进行非手术法采胚，一般在配种后7（6～8）天进行。供体牛的保定和麻醉同手术法采胚，采胚时先用扩张棒对子宫颈进行扩张（青年牛尤为必要）。采胚管消毒后，将无菌不锈钢导杆插入采胚管内。将采胚管经子宫颈缓慢导入一侧子宫角基部，由助手抽出部分不锈导杆，操作者继续向前推进采胚管，当达到子宫角大弯附近时，助手从进气口注入12～25ml气体。当气囊位置和充气量合适时，抽出全部不锈钢导杆。助手用注射器吸取事先加温至37℃的冲胚液，从采胚管的进水口推进，进入子宫角内，再将冲胚液连同胚抽回注射器内，如此反复冲洗和回收5～6次，将每次回收的冲胚液收入集胚器内，并置于37℃的恒温箱或无菌检胚室内等待检胚。一侧子宫角冲胚结束后，按上边方法再冲洗另一侧子宫角。配教材图9-44.检胚检胚应在20～25℃的无菌操作室内进行。在立体显微镜下，检查收集到的胚胎数，并用一细检胚吸管将胚胎移至新鲜培养液内，在放大40～200倍的复式显微镜下，进行形态学观察，选出适合于移植的正常胚胎。配教材图9-5、图9-6（七）胚胎保存1.常温保存指在常温（15～25℃）下保存胚胎。通常采用含20%犊牛血清的PBS保存液，可保存胚胎4～8h。2.低温保存指在0～10℃的较低温度下保存胚胎的方法。在此温度下，胚胎细胞分裂暂停，新陈代谢速度显著减慢，所以较常温保存的存活时间要长。3.冷冻保存指在干冰（-79℃）和液氮（-196℃）中保存胚胎。其最大优点是胚胎可以长期保存，而对其活力无影响。胚胎冷冻方法有以下几种：（1）逐步降温法这是一种传统方法，本法的优点是解冻后胚胎存活率较高，但操作程序比较复杂。（2）一步细管法即在细管内用非渗透性蔗糖溶液一步脱除抗冻剂（甘油）的方法。其特点是从解冻到移植的全过程简单易行，利于在生产中推广应用。（3）玻璃化法用这种方法冷冻时，胚胎内外液体能同时玻璃化，不会形成冰晶，能较好地保护胚胎。（八）胚胎移植胚胎移植就是将采取的可用胚胎移给受体母畜，亦称卵的移植，简称移卵。1.移胚部位早期胚胎少于8细胞时，一般应移植于输卵管，多于8细胞应移植于子宫角。2.移胚方法与采胚方法相似，也分为手术法与非手术法两种，前者适用于不能进行直肠操作的中小家畜，后者适用于大家畜。（1）手术法移植与采胚方法相似，对母畜进行保定、麻醉。以山羊为例，先在其乳房一侧作一平行于腹中线的切口，暴露输卵管和子宫角，再将胚胎注入输卵管或子宫角。无论是子宫内移植还是输卵管移植，都要避免把空气注入。移植完毕后将输卵管及子宫角送回腹腔，按回收手术中的要求缝合腹壁创口，术后做好移植记录。（2）非手术法移胚非手术法移胚只适用于牛、马等大家畜。与采胚相似，先将母畜保定麻醉后，再移胚。3.影响胚胎移植妊娠率的因素（1）胚胎因素包括胚胎质量、日龄、移植胚胎的数量、提供胚胎的供体、胚胎在体外培养的时间、鲜胚和冻胚等。（2）母体因素包括供、受体发情同期化程度，受体的孕酮水平，受体的营养，子宫、卵巢的生理状况等。（3）其他因素包括自然发情与人工诱导发情，移植器污染程度以及操作者熟练程度等（3—5分钟）1．超数排卵的方法有、、2.胚胎移植的意义有、、、、、、、3．胚胎移植的基本原则有、、、4．检胚的方法为5．胚胎保存的方法有、、胚胎移植的部位有手术法移植胚胎的方法有、,非手术法移胚的方法有、影响胚胎移植妊娠率的因素有小结：采用学生互相提问方式（3—10分钟）如：A学生问：“胚胎移植的意义？由B学生回答……课后作业：(1—2分钟)1、复习本节所讲内容；2、简述胚胎移植的基本过程板书设计:一、胚胎移植的意义二、胚胎移植的基本原则（一）胚胎移植前后供体和受体所处环境的同一性（二）胚胎发育的期限（三）胚胎的质量（四）供、受体的状况三、胚胎移植技术（一）供体和受体的选择（二）药品和器械的准备（三）供体的超数排卵（四）、受体的同期发情（五）供体的发情鉴定和配种（六）胚胎采集（七）胚胎保存（八）胚胎移植教后感：本节课采用讲授法，及讨论法。完成了本节课的教学目标，同时也注意了学生的学习动机、兴趣、习惯、信心等非智力因素的培养不足之处：在教学过程中注意引导式与归纳式的并用2014学年秋季学期第17周总课时：10课程名称畜禽繁殖与改良时间2014年12月14星期星期日任课教师白绪珍职称中学一级节次第4-5节班级三年级养殖班授课时数2教具安排多煤体教学题目第九章动物繁殖新技术――――胚胎生物工程技术复习教学方式讲授法、归纳法、练习法教学内容目标要求复习内容：(1).了解体外受精及性别控制技术(2).关于卵核移植与动物克隆技术(3).动物转基因技术重点难点:=1\*GB2⑴体外受精技术=2\*GB2⑵胚胎分割与嵌合技术情感目标：能力点：培养学生团结、互助的精神专业素质渗透点：通过复习“胚胎生物工程技术”的基本知识，让学生了解畜禽养殖前沿技术，使学生建立科学的世界观教学过程组织：清点人数（1—2分钟）复习导入：（3—5分钟）胚胎的保存方法？采胚时对供体的要求？进入复习一、体外受精技术（20分钟）（一）、体外受精的意义1、充分发挥优良母畜的繁殖力2、评价公畜的繁殖性能3、作为其他相关研究的手段（二）体外受精技术1、精子采集与获能处理（1）精子采集：可采用射出精子或附睾尾精子（2）精子获能：精子可在体内子宫中获能，也可在体外获能2、卵母细胞采集与成熟培养（1）卵母细胞采集（2）卵母细胞成熟培养3、精卵体外受精4、受精的判定出现下列现象为受精：精子穿入卵内、精子头部膨大、精子头部和尾部在卵细胞质内存在、第二极体的排出、原核的形成和正常的卵裂等现象即确定为受精5、体外受精（早期胚胎）的培养发育二、性别控制技术（一）胚胎性别控制技术1、X、Y精子的分离（1）理论依据（2）分离方法2、改变受精环境3、卵子的无性繁殖（二）、胚胎性别鉴定技术1、细胞学方法（1）胚胎分割（2）羊胚预培养及有丝分裂阻滞（3）制作染色体标本（4）染色及镜检2、生物化学微量分析法3、免疫学方法（1）、细胞毒性分析法（2）、间接免疫荧光法4、分子生物学方法三、卵核称植与动物克隆技术（一）核移植与克隆的意义1、研究细胞核与细胞质的遗传作用2、研究配子发生过程中核的印迹作用3确定动物早期胚胎发育期间核的分化程度4、生产大量克隆动物5、克隆动物技术可为生物药物开发和珍稀动物保护做出重大南献（二）、核移植和动物克隆的原理（三）操作技术1、核移植技术（1）获取胚胎和卵母细胞（2）显微操作（3）电融合（4）培养（5）移植以产生克隆绵羊为例，克隆技术步骤大致如下：将胚盘细胞培养在饲养层上，建立长久的细胞系除去受体卵母细胞的核及含有中期板的少量细胞质从全能细胞系取出1个细胞与去核卵母细胞融合将重建的胚胎移植给临时受体羊，并在7天后鉴定其发育情况将发育成的桑椹胚和囊胚移植给其他绵羊，使其发育到产出羔羊四、胚胎分割技术（一）胚胎分割技术1、胚胎分割的方法（1）对2-16细胞期胚胎，用显微镜操作仪上的玻璃针或刀片，将每个卵裂或两个卵裂球为一组或4个卵裂球为一组进行分割，分别放入一个空透明带内，然后进行移植（2）与上述方法相同，将桑椹胚或早期囊胚一分为二或一分四，将每块细胞团移入一登上空透明带内，然后进行移植2、胚胎分割的程序（1）用促性腺激素促使牛、羊超数排卵（2）通过外科手述取出2、4、8等分裂球的胚胎（3）将秀明带中的卵裂球分离，用吸管吸出（4）将分离的分裂球放入其他动物预先掏空的秀明带中，在每个透明带中放入1—2个卵裂球（5）将分割后的胚胎埋藏于琼脂中，放入羊或其他动物输卵管中培养3-4天（6）将胚胎冲洗出来经鉴定后，再作移植用（二）胚胎嵌合技术1、嵌合体的制作方法（1）早期胚胎聚合法=1\*GB3①采集胚胎=2\*GB3②除去透明带=3\*GB3③胚胎的聚合=4\*GB3④聚合胚胎的培养=5\*GB3⑤嵌合体的移植=6\*GB3⑥嵌合体的鉴定（2）分裂球聚合法（3）囊胚注入法2、嵌合体的标记及鉴定方法五、动物转基因技术（一）外源基因导入的主要方法1、原核显微注射法2、反转录病毒感染胚胎法3、胚胎干细胞法子、精子载体法（二）基因导入的应用前景1、动物育种2、生产动物蛋白六、胚胎干细胞技术（一）、形态与功能特点1、形态学特征2、功能特征（二）胚胎干细胞建系技术要点1、饲养层的制备及分化抑制物的选择2、早期胚胎及PGC的选择和分离3、早期胚胎及PGC的培养和ESC的分离传代（3—5分钟）1核移植是指2外源基因导入的主要方法、、、3胚胎分割的程序为4核移植及动物克隆的意义是。5嵌合体的制作小结：采用学生互相提问方式（3—10分钟）如：A学生问：“胚胎移植的意义？由B学生回答……课后作业：(1—2分钟)1、完成课本P225页的习题2、胚胎干细胞建系技术要点板书设计:一、体外受精技术1、体外受精的意义2、体外受精技术（1）、精子采集与获能处理（2）、卵母细胞采集与成熟培养（3）、精卵体外受精（4）、受精的判定（5）、体外受精（早期胚胎）的培养发育二、性别控制技术1、胚胎性别控制技术2、胚胎性别鉴定技术三、卵核称植与动物克隆技术1、核移植与克隆的意义2、核移植和动物克隆的原理3、操作技术四、胚胎分割技术1、胚胎分割技术2、胚胎嵌合技术五、动物转基因技术1、外源基因导入的主要方法2、基因导入的应用前景六、胚胎干细胞技术1、形态与功能特点2、胚胎干细胞建系技术要点教后感：