2000眼镜王蛇伤抗蛇毒血清治疗的实验研究

75— { ·76 · l · 论 著 · Chinese Critical Care Medicine，February 2000，Vo1．12mN 2 眼镜王蛇伤抗蛇毒血清治疗的实验研究 ／ 竺至兰， —兰 朱 柳，林振桃，钟满森，管锦霞 (广州蛇毒研究所，广东 广卅 510182) 摘要：目的：探讨用抗眼镜蛇毒与抗银环蛇毒血清配伍治疗眼镜王蛇伤的治疗 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 。 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 ：改良雷克健氏法 分离纯化眼镜王蛇毒；微量免疫电泳分析 5种国产抗蛇毒血清与眼镜王蛇毒组分的共同抗原性；对 2种同科属 及 1种非同科属的抗蛇毒血清进行同科属及非同科属血清配对动物体内保护实验；用孙氏综合法进行 LD 。实 验=结果：眼镜蛇毒LD 为(O．360~0．045)mg／kg：徽量免疫电泳证实，抗眼镜蛇毒血清和抗银环蛇毒血清分别 与眼镜王蛇毒在 I、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅸ、x、x】、瑚 及 I、Ⅱ Ⅵ、Ⅶ组分有沉淀线。用抗眼镜蛇毒与抗银环蛇毒血清 配伍治疗眼镜王蛇伤在各用 0．1 ml的小剂量下即可达到 100 的保护率，优于单用一种抗蛇毒血清以及与其 它抗蛇毒血清配伍 中毒程度越探 ，所需 2种抗蛇毒血清的量就越大 结论 ：用抗眼镜蛇毒与抗银环蛇毒血清配 伍可协同治疗眼镜王蛇伤，优于用其它抗蛇毒血清配伍治疗眼镜王蛇伤的治疗方案 关键词：抗眼镜蛇毒血清；抗银环蛇毒血清}眼镜王蛇咬伤；治疗 中囤分类号：R996 3{R965 文献标识码 ：A 文章编号：1003—0603(2000)02—0076—04 Combination of naja naja antivenin and bugarus multicinctus antivenin in the treatment of ophiophagus hannah bite YU Qing—shengtHUANG ShaotZHU Liu，et a1 The Guangzhou Research Institute of Snake Venom， Guangzhou 510182 Abstract：Objective：To investigate the therapeutic effect of combinations of naja naja antivenin and bugarus muhicinctus antivenin on ophiophagus hannah bite．Methods：According to KJ Lei s method，the ophio— phagus hannah venom was separated and purified，and micro—immunoelectrophoretic test was used to analyze the common antigen character of purified gradients of ophiophagus hannah and five native snake venoms．Pro tective test in vlvoⅧ performed in animals to compare the therapeutm effects of combinations of any two of three antivenins．In additiontSY Shun s method was used in LD5。test．Results：The LD5。of ophiopha gus han nah venom was(O．360±0．045)mg／kg．Micro—immunoelectrophoretm test showed that naja naja venom had common antigen with gradients I t1，Ⅵ，Ⅶ tⅨ ，X ，XI，XⅡ of ophiophagus hannah venom，and gradients I．ⅡtⅥ．Ⅶ of bugartrs muhleinctus venolxi．respectively．A combination of naja naja antivenin and bugarus multicnictus antivenin offered 100 survival rate in the treatment of ophiophagus hannah bite even in a low dose(O．1 ml each)It was more effective tha n the use of any one type of antivenin alone or other combinations of~tutivenlns．More severethe venenation was，higher dose of antiveninwas needed．Concluslons：Combination of naja naja antivenin and bugarus multicinctus antivenin appears to be effective in the treatment of ophiopha gus hannah bite． Key words：naja naja antivenin；bugarus multicinctus antiveninmphiophagus hannah bite,therapy CLC number：R996．3；R965 Document code：A ArticalID：1003—0603(2000)O2—0076一O4 眼镜王蛇毒素以神经毒为主，兼有心脏毒、出血 毒的混合毒．毒性大，发病急、病死率高。。 。在目前投 有抗眼镜王蛇毒血清可供临床使用的情浣下，如何 基金项}j：广州市科委重点科研基金资助项目(94一z一28) 获婪项目：卫生部第 6批向全国推广项 目(1996—159) 作者筒舟：余清声(1947一)，男(汉族1，广东饶平凡，副教授．硕 士生导师 已完成国家、广东省自然科学基垒及广州市科委项目10 余项 莸教育部、省科技进步二等奖各 1项．省自然科学三等奖 1项- 省医药卫生 市自然科学奖 5项 发 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 论文30多篇 现任中国中西医 结台学会蛇1务急救学组副主任委员，中国毒理学会生物毒素毒理专 业委员会副 E任委员 降低眼镜王蛇伤患者的病死率，是蛇伤急救关心的 问 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 。 。本研究采用抗眼镜蛇毒血清与抗银环蛇毒 血清配伍治疗眼镜王蛇伤。报告如下。 1 材料与方法 1．1 实验材料：真空冷冻干燥眼镜王蛇毒粉末，由 本研究所提供；精制抗眼镜蛇、银环蛇、蝮蛇、蝰蛇、 五步蛇蛇毒血清均由卫生部上海生物制品研究所提 供；琼脂糖凝胶为 Promega产品；水平电泳仪为北 京六一仪器厂生产；健康 ICR系纯种小白鼠由广州 医学院动物中心提供。 维普资讯 http://www.cqvip.com 中国危重病急救医学 2000年2月第 l2卷第 2期 1．2 实验方法 ： 1．2．1 眼镜王蛇毒的 LD 按文献[3]方法选用 ICR小白鼠7O只，平均体重(20--J-2)g，雌雄各半，随 机分组，每组 1o只，按 0．1 ml／]0 g腹腔注射眼镜 王蛇毒液，观察48小时，记录小自鼠死亡数。 1．2．2 微量免疫电泳反应：按文献C4}方法改良。把 眼镜王蛇毒分离纯化成 17个组分，各组分用Tri s 盐酸缓冲液，配制成 1 琼脂糖凝胶，温化后倒入平 置的洁净玻璃板上，趁热植入毛细管，室温冷却后打 孔，在低电压下各孔加入 5 mg／ml蛇毒组分液 15 1，调整电压于 105、95和 85 V，分段电泳各 1小 时后断开电源，取出毛细管，在槽中加入未稀释的抗 蛇毒血清，观察结果。 1．2．3 3种抗蛇毒血清对眼镜王蛇毒的中和作用： 1．2．3．1 3种抗蛇毒血清对眼镜王蛇毒的体内保 护作用；选用上述品系小白鼠96只，平均体重(2o± 2)g，随机分组，每组 6只。实验组按 10．8~g／lO g (3LD 。)腹腔注射蛇毒液，对照组注射同体积生理盐 水，10分钟后，实验组分别用不同剂量未稀释的抗 眼镜蛇毒血清、抗银环蛇毒血清、抗蝰蛇毒血清以及 这 3种抗蛇毒血清中两两配伍进行救治，观察 72小 时，记录每组小鼠存活数。 1．2．3．2 抗眼镜蛇毒血清与抗银环蛇毒血清不同 时间给药对眼镜王蛇毒(3LD 。)中毒的体内保护作 用影响：选用上述品系小白鼠42只，平均体重(20士 2)g，随机分组，每组 6只。实验组按 10．8 g／10 g (3LD 。)腹腔注射蛇毒液，对照组注射同体积生理盐 水，在不同时间内实验组分别用未稀释的抗眼镜蛇 毒血清与抗银环蛇毒血清配伍各 0．20 ml，观察 72 小时，记录每组小鼠存活数。 1．2．3．3 对不同中毒状况抗眼镜蛇及抗银环蛇毒 0．10 ml，观察 72小时，记录每组小鼠存活数。 2 结 果 2．1 眼镜王蛇毒 LD 按文献[3]方法，求得 LD 。 = (0．360士0．045)mg／kg。 2．2 微量免疫电泳反应：眼镜王蛇毒分离出 1 7个 组分，I、I、Ⅲ、Ⅳ、vI、Xl具有酶活性；V、Ⅵ、Ⅶ、 IX、X、XI、XE具有神经毒活性，而 、xV、删 、 xvI有局部出血效应。以各组分为抗原，国产 5种抗 蛇毒血清为抗体，其免疫电泳结果见表 1。 2．3 3种抗蛇毒血清对眼镜王蛇毒的中和作用： 2．3．1 3种抗蛇毒血清对眼镜王蛇毒体内保护作 用见表 2。单用抗眼镜蛇毒血清、抗银环蛇毒血清、 抗蝰蛇毒血清均需用极大剂量才对 3LDso眼镜王蛇 毒中毒有较好保护作用；3种抗蛇毒血清在两两配 伍中，抗眼镜蛇毒血清和抗银环蛇毒血清配伍各只 用0．1 ml就能达到 100 的保护，其它的两两组合 均未能达到此效果。 表2 3种抗蛇毒血清对 3LD 眼镜王蛇毒的体内保护作用 血清用量比较：小白鼠36只，平均体重(20士2)g，随 2．3．2 抗眼镜蛇毒血清与抗银环蛇毒血清不同时 机分组，每组 6只。实验 组分别按 7．2~g／]0 g 间给药对 3LD 。眼镜王蛇毒中毒时体内保护作用的 (2LD；。)、10．8~g／]O g(3 LD 。)腹腔注射蛇毒液，对 影响见表 3。对于 3LD 。眼镜王蛇毒中毒的小白鼠， 照组注射同体积生理盐水，在同时间内实验组分别 给予眼镜王蛇毒后，于 10分钟内注射抗眼镜蛇毒血 用未稀释的抗眼镜蛇毒血清 0．40 ml、抗眼镜蛇毒 清与抗银环蛇毒血清各0．20 ml，均有 100 的保护 血 清与抗银 环蛇 毒血清 配伍 各 0．05 ml和各 率 ；随着给药时间倍数延长，其保护率相应下降．呈 表 1 5种抗蛇毒血清对眼镜王蛇毒组分微量免疫电泳沉淀线比较 条 抗蛇毒血清 I l I Ⅳ v Ⅵ Ⅶ Ⅶ Ⅸ x xI x】 x_ Ⅻ 瑚 m 抗眼镜蛇毒血清 抗银环蛇毒血清 抗蝗蛇毒血清 抗五步蛇毒血清 抗蝮蛇毒血清 维普资讯 http://www.cqvip.com ·78· 时间依赖性。 表3 抗眼镜蛇毒血清和抗银环蛇毒血清配伍不同时间给药 对3LD5o眼镜王蛇毒中毒体内保护作用的影响 2．3．3 对不同中毒状况抗眼镜蛇毒血清 抗银环 蛇毒血清用量比较：对于不同状态(ZLD 3LD )的 眼镜王蛇毒中毒小自鼠，单用抗眼镜蛇毒血清，需 0．40 ml才有 100 的保护率。在2LD 中毒状态下， 用抗眼镜蛇毒血清与抗银环蛇毒血清配伍，各自的 剂量只需 0．05 ml就可达到 100 的保护率，是单 用抗眼镜蛇毒血清疗效的8倍。但随着中毒状态从 2LDso发展为 3LD 。时，抗眼镜蛇毒血清与抗银环蛇 毒血清配伍的量要增大到 0．10 ml，仅是单用抗眼 镜蛇毒血清疗效的4倍。中毒程度越重，抗眼镜蛇毒 血清与抗银环蛇毒血清配伍的量就越大。 3 讨 论 蛇毒具有能同相应的蛇毒抗体发生反应的特 性，如眼镜蛇毒只能同抗眼镜蛇毒血清发生免疫反 应，不能同抗蝮蛇、五步蛇毒血清发生反应。蛇毒抗 原的特异性是由蛇毒抗原决定簇所决定的，而且同 科属(亚种)具有种属(亚种)的特异性。但是，蛇毒的 毒性基团与抗原决定簇并非相同 ，本研究也证明 了这一点。眼镜王蛇与眼镜蛇、银环蛇同属眼镜蛇 科，其致死成分主要是神经毒。有研究表明眼镜王蛇 与眼镜蛇存在免疫沉淀线 。有用抗眼镜蛇毒血清 或抗银环蛇毒血清治疗眼镜王蛇伤的报道。-”，但广 东蛇伤防治研究网络在临床单用抗眼镜蛇毒血清治 疗眼镜王蛇伤却未取得好的治疗效果 眼镜蛇科的神经毒按其作用方式可分为突触前 神经毒及突触后神经毒，眼镜蛇毒的神经毒是突触 后神经毒，其肽链有长短之分。 ；而银环蛇毒中的神 经毒可分为突触前神经毒(p—bungarotoxin)及突 触后神经毒( —bungarotoxin)，对神经一肌肉接头 起双重抑制作用 ：。眼镜王蛇毒中的神经毒含v、 Ⅵ、Ⅶ、IX、x、XI、xⅡ7个不同组分，这些与眼镜蛇 毒和银环蛇毒都有相似之处 ，给治疗带来了困难。 在微量免疫电泳反应上，本研究证实，抗眼镜蛇 毒血清对眼镜王蛇毒的组分 I、I、Ⅵ、Ⅶ、Ⅸ、x、 Chinese Cfitlcal Care Medicine，F XI、xⅡ都有免疫电泳沉淀线，表明眼镜蛇毒与眼镜 王蛇毒具有相当数量的共同抗原性，尤其是眼镜蛇 毒的神经毒活性组分与眼镜王蛇的神经毒活性组分 的共同抗原性更高}而抗银环蛇毒血清对眼镜王蛇 毒的 I、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ有免疫电泳沉淀线 表明眼镜王蛇 毒与银环蛇毒也有共同抗原性。蛇毒是蛋白混合物， 除毒蛋白外，还含有许多酶，它们所具有的复杂而奇 特的生理和药理活性，与蛇伤时造成机体溶血、出 血、肌肉坏死、休克等病理现象密切相关。如乙酰胆 碱酯酶、磷脂酶 Az等在眼镜蛇科的蛇毒中含量很 高 ：而蝰蛇科的蛇毒中富含蛋白水解酶、氨基酸酯 酶 ；眼镜王蛇毒也含有蛋白水解酶和氨基酸酯酶，但 活力较低“ 。由于这些酶的同源性，所以眼镜王蛇 毒的组分在微量免疫电泳反应上表现为 I、Ⅱ、Ⅵ、 Ⅶ、Ⅸ、x、XI、xⅡ各组分与5种抗蛇毒血清在不同 程度上都有沉淀线出现。可以说，眼镜王蛇毒在神经 毒以及蛇毒酶上与同科属的眼镜蛇、银环蛇的同源 性比蝮蛇科强。 在抗眼镜蛇毒血清、抗银环蛇毒血清、抗蝰蛇毒 血清 3种血清对眼镜王蛇毒中毒(2LD。。)的保护实 验中，单用其中一种血清的保护效果都不佳，而抗眼 镜蛇毒血清与抗银环蛇毒血清配伍对，其疗效是单 用抗眼镜蛇毒血清的8倍，有明显的协同作用。随着 眼镜王蛇毒中毒程度到 3LD 。，抗眼镜蛇毒血清与 抗银环蛇毒血清的用量相应增多，但仍然有协同作 用。这一结果提示，临床用药应随中毒症状的加深而 增加。至于抗眼镜蛇毒血清与抗蝰蛇毒血清配伍，抗 银环蛇毒血清与抗蝰蛇毒血清配伍均只是相加的作 用。保护实验的结果与微量免疫电泳结果一致。 抗眼镜蛇毒血清与抗银环蛇毒血清配伍时，对 眼镜王蛇毒(3LD 。)中毒的体内保护，在中毒后 10 分钟，随给药时间倍数延长，保护率相应下降，呈时 间依赖性。提示蛇伤后越早抢救，疗效越好。 参考文献： [1]覃公平主编．中国毒蛇学 第 1版 南宁：广西科学技术出版牡， 1995．778—780 [2]李其 斌，黄嫣娇，方 饶墀，等．抢救 眼镜 王蛇(Ophiophagus hamlah)咬伤中毒 12协临床报告．蛇志，1993，5(2){25～28． [3]孙瑞元．定量药理学．第 1版．北京：人民卫生出版社，1986．154— 189． 4]雷克健，胡纫秋，王锦兰．眼镜王蛇(0phiophagus hannah)毒中L 一 氪基酿的分离纯化和理化性质的研究．动物学研究，1981 2(4 增刊)，43—50 (53蒋克贤．抗蛇毒血清治疗蛇伤新进展．见：陈远聪，袁士龙主编．毒 素的研究和利用．中国生物化学会专题讨论会文集(4)．第 1版． 北京：科学出版社，1988，96—1O4． (6]符民崔，植飞，管锦霞，等．五种抗蛇毒血清对眼镜王蛇的中和作 用．广州医学院学报．1995，23(4) 1—4． [7~Lee C Y，Chang S L，Kau S T， d ．Chromatographic separation Df the venom of Bungarus muhicinctus and character[Z．atlon of its components．Chromatography，1972，72(1)：71—82． 维普资讯 http://www.cqvip.com 中国危重病急救医学 2000年2月第 l2卷第2期 C83黄敏州．王晴川，刘广莽．福建眼镜王蛇毒柱层析分离及生化药理 特性 中国药理学与毒理学杂志，1990t4(2)：127—130． C93林南琴．张辉时，幕见凤，等．广西眼镜王蛇毒神经毒素的一级结 构．生物化学与生物蛔理学报 ，1984．16(6) 592—596． ·79 · [1o]吴兴陆，陈远聪 我国十种蛇毒磷酯 A的活力比较 动物学研 究，1981，2(4增刊)；24—88 嫩郴期’ 裂 李12银-平27； 吼 谚童季 哪究简 严重烧伤患者核黄素营养状厕的分析 √ 雀 ， ，张 玲，宁恩弟，夏修金 (天津市第一中心医院烧伤整形科 ，天津 300192) 中图分类号 ：R644~R151．2 文献标识码：B 文章编号 ：1003—0603(2000)02—0079—01 桉黄素提 中国人膳食中普遍不足的 营养素。。， ．为了解严重烧伤患者桉黄素 的营养状况，分析 32例严重烧伤患者伤 后 3～7 El和 8～14 El桉黄素 4小时尿 负荷试验及核黄素、蛋白质和能量经不 同途径摄入量，报告如下 1 资料与方法 1．1 病例：烧伤患者 32倒中男 22倒， 女 10铡；年龄 20～44岁，平均(25．6土 7．2)岁：烧伤面积 30．2 士10．9 ，平 均烧伤指数 19．7；无 口服硫胺素药史 1．2 评价方法：①棱黄素 4小时尿负荷 试验 ：于伤后 3～7日和 8～1 4 El期间检 测2次，每次测定前让患者排尿．然后给 患者口服 5mg棱黄素，再避光收集4小 时尿量。用 930型荧光光度计，选用激发 波长400 nnl和发射波长510 ni／i的滤光 片，测定并计算出尿中棱黄隶排出量。成 年人铰黄素 4小时尿 中排出量评价标 准：<400 g为缺乏{4O0～799 g为不 足；>8o。 g为正常 。②用登记加询问 核实法对患者进行伤后 3～7日、8～14 日每El膳食摄人情况调查，根据食物成 分表用计算机处理分析平均每日膳食桉 黄素、蛋白质和能量摄入量，同时统计分 析平均每日经静脉(或口服药)摄入棱黄 素，能量和蛋白质的量。 1．3 统计学方法：用f检验分析均数差 异，P