前列冲剂大鼠灌胃给药长期毒性试验

　　　　 　基金项目 :国家高技术研究发展计划 (863 计划)创新药物与中药现代化重大专项博士基金项目 (编号 :2003AA2Z3505) 　作者简介 :张春和 (1968～) ,男 ,四川南江县人 ,副主任医师 ,医学博士 ,主要从事泌尿外科、男科研究。 前列冲剂大鼠灌胃给药长期毒性试验 张春和1 , 林咏梅2 , 陆 　瑛2 , 陈天波1 , 秦国政1 , 李焱风1 (11 云南中医学院第一附属医院 , 云南 昆明 650021 ; 21 云南省天然药物药理重点实验室 , 云南 昆明 650031) 　　摘 　要 :目的 :观察前列冲剂重复给药对试验动物所产生 的不良反应。方法 :用雄性 SPF 级 SD 大鼠 80 只连续灌胃给 予前列冲剂 6 周 ,停药恢复 2 周的长期毒性试验 ,动物随机分 为溶媒对照组和前列冲剂 310、610、910g/ kg 体重 3 个剂量 组 ,相当于临床成人拟用药量的 20、40、60 倍。于末次给药后 24h 处死约 1/ 2 动物进行血液学指标检查 ,血清生化指标检 查 ,病理组织学检查。余下动物停药观察 2 周 ,检查指标同给 药末期。结果 :溶媒对照组和 3 个剂量给药组动物 ,体重增 长 ,摄食量正常 ,未见明显毒性反应 ;血液学仅见停药期 MPV 组间比较有显著性差异 ( P < 0105) ,血清生化学所测指标停药 期 AL P、TP、ALB 组间比较有显著性差异 ( P < 0105/ 0101) , 但均在本研究历史背景资料范围 ;脏器、器官组织病理学检查 未观察到与受试药物相关的病理组织学改变。结论 :前列冲 剂在本试验剂量范围条件下对 SD 大鼠未引起明显毒性反应 , 即 31 0g/ kg 体重 ,相当于临床成人拟用药量的 20 倍以下为安 全剂量参考范围。 关键词 :前列冲剂 ;长期毒性 ;动物试验 中图分类号 :R285. 5 文献标识码 :A 文章编号 :1007 - 2349 (2007) 03 - 0038 - 02 前列冲剂为临床使用多年的经验处方 ,经现代中药制备 工艺提取精制而成 ,主要用于治疗良性前列腺增生症属肾虚 血瘀膀胱气化功能失司者。为了对该药作出客观的安全性评 价 ,笔者进行了前列冲剂大鼠灌胃给药长期毒性试验。 1 　材料与方法 111 　药物与动物 　前列冲剂 (由云南中医学院附属医院制剂 中心提供 ,科研用药无批号) 临用前用高压灭菌水配成 013g , 016g ,0145g/ ml 的混悬液。5～6 周龄健康未交配 SPF 级雄性 SD 大鼠 80 只 ,体重 140～180g (由昆明医学院实验动物中心 提供) 。 112 　主要仪器及配套试剂 　ADV IA 60 型全自动血球分析 仪及配套试剂 (测 Hb、RBC、WBC、PL T、HCT、MCV、MCH、 MCHC、RDW、MPV) ; TMS - 1024 全自动生化分析仪及配套 试剂 (测 Glu、AST、AL T、AL P、Crea、BUN、TP、ALB、T - CHO、T - Bil) ;OL YMPUS B H - 2 显微镜 ;普通光学显微镜。 113 　方法 11311 　剂量设计及分组 　根据临床成人 (以 60kg 体重计)拟 用药量 0115g/ kg/ d ; ICR 小鼠急性毒性试验的最大耐受量大 于 5312g/ 40ml/ kg。按《中药、天然药物长期毒性研究技术指 导原则》的要求 ,设一个溶媒对照组和 3 个剂量组。80 只大鼠 随机分为 4 组 ,每组 20 只。溶媒对照组 :高压灭菌水。低剂 量组 :3g/ kg 为临床成人拟用量的 20 倍。中剂量组 :6g/ kg 为 临床成人拟用量的 40 倍。高剂量组 :9g/ kg 为临床成人拟用 量的 60 倍。 11312 　给药方法 　对照组、低、中、高剂量组均为 10ml/ kg 体 重等容量灌胃 ,高剂量组因给药容量大故每天灌胃 2 次。 11313 　实验周期 　2005 年 11 月 11 日～2006 年 1 月 11 日 , 每周灌胃给药 7d ,连续 6 周 ,停药恢复 2 周。 114 　观察指标 [1 ] 　每天观察试验动物进食、饮水、活动等一 般情况 ,异常反应或中毒症状 ,动物死亡数 ,中途死亡动物及 时解剖进行肉眼观察和病理组织学检查 ,以便了解死亡原因。 每周称量动物体重及进食量一次 ,根据体重变化调整给药容 量。于末次给药后 24h 各组随机抽取约 1/ 2 动物采血进行血 液学、血清生化检查 ,解剖 ,进行病理组织学检查 ,剩余动物停 药 2 周恢复观察 ,检查指标同给药末期。 11411 　血液学检测指标 　血红蛋白 ( Hb)测定、红细胞 (RBC) 计数、白细胞 (WBC) 计数及分类 ( %) 、血小板 ( PL T) 计数、网 织红细胞 ( %) 红细胞比容 ( HCT) 、平均红细胞容积 (MCV) 、 平均红细胞血红蛋白含量 (MCH) 、平均红细胞血红蛋白浓度 (MCHC) 、红细胞体积分布宽度 ( RDW) 、平均血小板体积 (MPV)测定。白细胞分类和网织红细胞采用手工推血片 ,显 微镜计数。 11412 　血清生化学检测指标 　血糖 ( Glu) 、血清天冬氨酸转 氨酶 (AST) 、丙氨酸转氨酶 (AL T) 、碱性磷酸酶 (AL P) 、肌酐 (Crea) 采用酶法。尿素氮 (BUN ) 、总蛋白 ( TP) 、白蛋白 (ALB) 、总胆固醇 ( T - CHO) 、总胆红素 ( T - Bil) 采用终点比 色法。白/ 球比值 (A/ G)直接计算法。 11413 　病理组织学检查指标 　解剖动物肉眼观察各脏器有 无病变 ,取脑、心、肝、脾、肺、肾、前列腺、胸腺、睾丸、附睾称 重 ,计算脏器指数。并取胃、肠 (十二指肠、空肠、回肠、结肠) 、 胰腺、膀胱及肠系膜淋巴结于 10 %福尔马林液固定 ,进行对照 组和高剂量组动物病理切片 ,光镜检查各个脏器 ,如发现异常 再对低剂量组及中剂量组进行组织切片观察。 115 　统计学处理 　用 SPSS 1110 统计软件对试验数据进行 83 云 南 中 医 中 药 杂 志　　　　　　　　　　2007 年第 28 卷第 3 期 方差检验或秩和检验 ,病理组织学检查用χ2 检验进行统计学 分析处理。 2 　结果 211 　一般状况 　给药期和恢复期对照、低、中、高剂量组动 物 ,状态良好 ,活动自如 ,毛皮光泽 ,均未出现明显毒性反应。 212 　死亡情况 　给药 6 周及恢复 2 周 ,各组试验动物均未出 现死亡。 213 　体重及进食量 　给药期及恢复期 ,动物体重均增长 ,进 食正常 ,给药组与对照组比较无显著性差异 ( P > 0105) 。 214 　血液学检查　给药末期 MPV 中剂量组略高于其余各组 , 有显著性差异 ( P < 0105) ,但所测数值在文献参考值和本实验 室历史背景资料范围 ,且无明显剂量 - 反应关系 ,故认为此差 异无明显的生物学和毒理学意义 ;恢复期给药组及对照组 ,血 液学各项检查指标各组间比较无显著性差异 ( P > 0105) 。 215 　血清生化检查 　给药末期仅见 AL P、TP、ALB 低剂量组 均低于其余各组 ,有显著性差异 ( P < 0105) ,但无明显剂量 - 反应关系 ,所测数值均在文献参考值和本实验室历史背景资 料范围 ,无生物学意义 ;恢复期各项检查指标未见明显异常 , 各组间比较无显著性差异 ( P > 0105) 。 216 　脏器重量及指数 　给药末期胸腺重量中、高剂量组之间 有显著性差异 ( P < 0101 ) , 但胸腺指数无显著性差异 ( P > 0105) ,病理组织学检查结果未见异常 ,故不能认为有毒 理学意义 ,肝肾指数中、高剂量组与对照组比较均有显著性差 异 ( P < 0105) ,但绝对重量并无显著性差异 ( P > 0105) ;恢复 期肝指数低剂量组高于其余各组 ,有显著性差异 ( P < 0105) , 结合分析血清生化肝功能指标检查及病理组织学检查 ,结果 均未见异常 ,且所测数值均在文献参考值和本实验室历史背 景资料范围 ,故认为无毒理学意义。 217 　病理组织学检查结果 　给药末期和恢复期解剖动物 ,对 照、低、中、高剂量组动物主要脏器、器官色泽正常 ,光滑 ,未见 充血、粘连等异常改变。镜下可见对照和高剂量组均有少量 动物出现局灶性肺出血 ;心肌间质瘀血 ;肝细胞点状坏死 ,肝 肉芽肿 ;肾间质瘀血 ;前列腺间质炎性细胞浸润。经统计学分 析 ,对照组与给药组病变程度无显著性差异 ( P > 0105) ,观察 到的组织学异常改变为大鼠常见自发性病变 ,非受试药物所 致 ,其余脏器、器官未见异常。 3 　讨论 前列冲剂临床成人拟用药量为每日 9g ,小鼠急性毒性实 验未测出 LD50 ,最大耐受量为临床拟用量的 355 倍以上 [2 ] 。 灌胃给予 SD 大鼠前列冲剂 310、610、910g/ kg 体重 (相当于临 床成人拟用量的 20、40、60 倍) ,连续 6 周 ,停药恢复 2 周长期 毒性试验 ,在本试验剂量范围 ,未观察到试验动物明显的毒性 反应 ,试验动物血液学及血清生化学检查指标均在文献参考 值和本室历史背景资料范围 ,试验动物脏器、器官病理组织学 检查未见与药物相关的病理组织学改变。前列冲剂灌胃给药 310g/ kg 体重 (相当于临床成人拟用药量的 20 倍)以下可为安 全剂量参考范围。 参考文献 : [ 1 ]谢秀琼. 中药新制剂开发与应用 [ M ] . 北京 :人民卫生出版社 , 20001 527～5421 [ 2 ]张春和 ,林咏梅 ,陈天波 ,等1 前列冲剂小鼠灌胃给药急性毒性实 验研究[J ]1 中华实用医学 ,2006 ,8 (6) :1～21 (收稿日期 :2007 - 01 - 27。) (上接 37 页) [ 4 ]罗士德. 中草药抗艾滋病病毒的研究 [J ] . 昆明 :云南科技出版社 , 1998. 6. 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J Agric Food Chem 2002 Aug 14 ; 50 (17) :4791～51 [ 13 ]李海霞 ,王钊 ,刘延泽 ,等1 石榴科植物化学成分及药理活性研究 进展[J ] . 中草药 ,2002. 33 (8) :765～附 21 [ 14 ]王德怀 ,陈大夫 ,罗鹏 ,等1 美宝治疗中、小面积烧伤 210 例疗效 观察[J ]1 成都医药 ,2003 ,29 (2) :95～961 [ 15 ]袁新初 ,周乾毅1 烫伤大鼠脂质过氧化改变及三七保护作用的探 讨[J ]1 中草药 ,2002 ,33 (5) :446～4471 [ 16 ]施新猷 1 医学动物实验方法 [ M ]1 北京 : 人民卫生出版社 , 19801 31～331 (收稿日期 :2006 - 12 - 27。) 932007 年第 28 卷第 3 期 　　　　　　　　　　云 南 中 医 中 药 杂 志 Yunnan Journal of Traditional Chinese Medicine and Material Medicine Vol. 28. No. 3 ( General No. 165) March , 2007 Main Content A Clinical Study on the Treatment of AIDS Patients with the Methods of Supplementing Qi and Replenishing Yin and Clearing Heat and Toxic Materials L IAN GJie , WAN G Ting , WAN G Cong2liang , et al⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ A Clinical Study on the Treatment of 100 Diabetic Nephropathy Patients with Jiang Tang Bao Shen Capsule YAN G Hua , SHEN Wen2lan , Zhang Yuan2hua , et al⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ An Experimental Research on the Treatment of Burn and Ambustion Patients with PPE Compound Preparation YAN GJian2yu , YU Fang , YAN G Yong , et al⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ Long2term toxicity studies of qianlie chongji implantation ZHAN G Chun2he ,LIN Yong2mei ,Lu Ying , et al⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ A Clinical Study on the Treatment of AIDS Patients with the Methods of Supplementing Qi and Replenishing Yin and Clearing Heat and Toxic Materials LIAN GJie , WAN G Ting , WAN G Cong2liang , et al ( Gejiu Traditional Chinese Medicine Hospital , Gejiu , Yunnan , 661000) Abstract :Objective : To explore effective methods of preventing and treating AIDS patients with traditional Chinese medicine. Methods : 97 HIV antibody positive patients were treated with the methods of supplementing qi and replenishing yin and clearing heat and toxic materials and the physical sign integral of their symptom and the changes of their CD4 cell index were observed in the course of the treatment . Results : Guided by the idea of traditional Chinese medicine , the treatment effectively improved the symptom of HIV antibody positive patients and retarded the descent of the CD4 cells. Conclusion : The methods of supplementing qi and replenishing yin and clearing heat and toxic materials have a certain effect on the treatment of AIDS patients. Key Words : supplementing qi and replenishing yin ; clearing heat and toxic materials ; AIDS A Clinical Study on the Treatment of 100 Diabetic Nephropathy Patients with Jiang Tang Bao Shen Capsule YAN G Hua , SHEN Wen2lan , Zhang Yuan2hua , et al ( Gejiu Traditional Chinese Medicine Hospital , Gejiu , Yunnan , 661000) Abstract : Objective : To observe the clinic effectiveness of the treatment of diabetic nephropathy patients with Jiang Tang Bao Shen Capsule. Methods : 160 diabetic nephropathy patients were divided into one test group and one control group at random sample. 100 patients in the test group were treated with Jiang Tang Bao Shen Capsule while the patients in the control group were treated with either Lotensin or Divan. One month is a course of treatment and two courses were observed. The blood sugar , kidney function , urine micro2dose protein , amount of urine protein of the patients in the two groups were determined before and after the treatment . Results : The total rate of the effectiveness in the test group was 92 % and the rate of noticeable effect was 38 % while the total rate of the effectiveness in the control group was 76. 7 % and the rate of noticeable effect was 26. 7 %. FPG, UAER , BUN , Cr , mALb/ cr of the patients in the two groups were obviously improved after the treatment ( P < 0. 01 or P < 0. 05) . Conclusion : Jiang Tang Bao Shen Capsule has a good effect on the treatment of diabetic nephropathy patients and no side effect has been found. Key Words : Jiang Tang Bao Shen Capsule ; diabetic nephropathy patients ; treatment of traditional Chinese medicine An Experimental Research on the Treatment of Burn and Ambustion Patients with PPE Compound Preparation YAN GJian2yu , YU Fang , YAN G Yong , et al ( Pharmacological Section , School of Haiyuan , Kunming Medical College , Kunming , Yunnan , 650101) Abstract : Objective : To observe the effectiveness of PPE local medicine on the treatment of the neck and back skin burn and ambustion of small mice ( II2III) . Methods : PPE different concentration salves were smeared on the burn and ambustion locus of the small mice once every two days for twenty days. The concentration of high dose group was twice of that of the low dose group. Mei Bao Moisturing Salve was taken as a positive control group and a no medicine group was also observed. The time of decrustation and fur2growing , appetite and activity of the mice in each group were observed. Result s : Comparing the PPE high dose group , the PPE low dose group , Mei Bao Moisturing Salve group with the no medicine group , the time of the decrustation ( P < 0. 0083) and the fur2growing ( P < 0. 01) of the neck and back skin burn and ambustion of small mice ( II2III) was shortened , and the difference showed a significance. Conclusion : PPE compound preparation has a noticeable effect on the treatment of the neck and back skin burn and ambustion of small mice ( II2III) . Key Words : PPE compound preparation ; burn and ambustion treatment Long2term toxicity studies of qianlie chongji implantation ZHAN G Chun2he ,L IN Yong2mei ,Lu Ying ,et al ( The first affiliated hospital , Yunnan College of Traditional Chinese Medicine , Kunming 650021) Abstract : Objective Qianlie chongji was subjected to evaluate the long2term toxicity in rats. Methods 80 SPF grade male SD rats were implanted with qianlie chongji once daily consecutively for six weeks and then stop dosing animals for another two weeks to clean up. Animals were randomly divided into 4 groups , control and 3 doses of qianlie chongji at 3. 0 , 6. 0 and 9. 0 g/ kg , which is 20 , 40 , and 60 times of the clinical dose specification respectively. In 24 hour of last implantation , half of animals in each group were sacrificed for blood testing , serum biochemistry analysis , and histological examination ? The other half were sacrificed in 2 weeks for the same tests specified above. Results ? Increased weight and food consumption in control group is similar to those in three dosed groups , therefore no significant toxicity indicated. Compared the results of the same group before and after clean up duration , only MPV of blood testing result s ( P < 0. 05) and AL P , TP as well as ALB of serum biochemical testing results are significantly different ( P < 0. 05/ 0. 01) , however , which , however , are all in the normal range according to the historically statistical data. In addition , no significantly histological change related to visceral is observed. Comment No significant toxicity of ? qianlie chongji is observed in SD rats dosed at 3. 0 g/ kg , 20 times less than which is clinical adult safe dose. Key Words : qianlie chongji ;long2term toxicity