资料收集于网络如有侵权请联系网站删除谢谢资料收集于网络如有侵权请联系网站删除谢谢资料收集于网络如有侵权请联系网站删除谢谢实验六马铃薯多酚氧化酶制备和化学性质一、实验目的1、学习从组织细胞中制备酶的方法。2、掌握多酚氧化酶的作用和化学性质。二、实验原理多酚氧化酶是一种含铜的酶，其最适pH值为6-7。由多酚氧化酶催化的反应，如以邻苯二酚为底物，可以被氧化形成邻苯二醌。由多酚氧化酶催化的氧化还原反应可通过溶液的颜色的变化鉴定，这个反应在自然界中是常见的，如去皮的马铃薯和水果变成褐色就是由于该酶作用的结果。多酚氧化酶的最适底物是邻苯二酚（儿茶酚）。间苯二酚和对苯二酚与邻苯二酚的结构相似，它们也可以被氧化为各种有色物质。三、实验器材1、实验仪器匀浆机，离心机，冰箱，恒温水浴，烧杯，三角瓶，漏斗，小刀，纱布，2、材料与试剂1）马铃薯2）0.1mol/L的NaF溶液：将4.2g氟化钠溶于1000mL水中。3）0.01mol/L的邻苯二酚溶液：将1.1g邻苯二酚溶解于1000mL水中，用稀NaOH调节溶液的pH值为6.0，防止其自身的氧化作用。当溶液变成褐色时，应重新配制。新配制的溶液应贮存于棕色瓶中。4）pH6.8的磷酸盐缓冲液5）5%三氯乙酸溶液6）0.01mol/L的间苯二酚溶液：将0.11g间苯二酚溶解于100mL水中。7）0.01mol/L的对苯二酚溶液：将0.11g对苯二酚溶解于100mL水中。8）硫酸铵晶体四、实验步骤1、多酚氧化酶的制备每三个小组一起，称取150g马铃薯（新马铃薯可以不去皮），切块后放入匀浆机，加入150mLNaF溶液，匀浆后用四层纱布过滤。各组分别量取50mL滤液置离心管中，于4000r/min离心10min，取上清夜，加入硫酸铵晶体16g，溶解，于4℃放置30min，于4000转/min离心15min，弃上清液，沉淀用15mlpH4.8的柠檬酸缓冲液溶解，即为粗酶液。2、多酚氧化酶的催化作用按表1加入各试剂，观察反应现象并记录和分析原因。表1多酚氧化酶的催化作用 试管号 酶液 consumevt.消费；消耗；耗尽；吃完邻苯二酚 水 混匀后37℃保温5、10、15、20min，观察并记录颜色变化（用+表示） 1 15滴 15滴 － 2 15滴 － 15滴 3 － 15滴 15滴 3、多酚氧化酶的化学性质按表2加入各试剂，观察反应现象并记录和分析原因。表2多酚氧化酶的化学性质 试管号 酶液 5％三氯乙酸 邻苯二酚 37℃保温10min，观察颜色变化 1 15滴 － 15滴 2 10滴 10滴 10滴 4、底物专一性按表3加入各试剂，观察反应现象并记录和分析原因。表3多酚氧化酶的底物专一性 试管号 酶液 邻苯二酚 间苯二酚 对苯二酚 37℃保温10min，观察颜色变化 1 15滴 15滴 － － 2 15滴 － 15滴 － 3 15滴 － － 15滴 5、实验结果1、按实验步骤中各表格要切记录实验现象。2、分析每组实验现象产生的原因。六、思考题1．在酶制备过程中加入硫酸铵的目的是什么？2．在多酚氧化酶性质实验中三氯乙酸有什么作用？精品文档精品文档精品文档
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