国家自然基金申请书NSFCproposal－龚朝辉

国家自然科学基金申请书 申请代码： 受理部门： 收件日期： 受理编号： 国家自然科学基金 申 请 书 资助类别： 亚类说明： 附注说明： 项目名称： 申 请 者： 电话： 依托单位： 通讯地址： 邮政编码： 单位电话： 电子邮件： 申报日期： 2006年3月20日 国家自然科学基金委员会 基本信息 申 请 者 信 息 姓名 性别 男 出生 年月 1978年11月 民族 汉族 学位 硕士 职称 助理研究员 主要研究领域 生物化学与分子生物学，基因工程 电话 0571－86843190 电子邮件 zhgong@gmail.com 传真 0571－86843198 个人网页 工作单位 浙江理工大学 /生命科学学院生物化学研究所 在研项目批准号 依托单位信息 名称 代 码 31001204 联系人 张琪 电子邮件 zhangqi@zist.edu.cn 电话 0571-86843052 网站地址 www.zist.edu.cn 合作单位信息 单 位 名 称 代 码 项 目 基 本 信 息 项目名称 资助类别 面上项目 亚类说明 自由申请项目 附注说明 申请代码 C01040102:核酸 C010401:生物分子的结构与功能、合成机理及调节过程 基地类别 预计研究年限 2007年1月 — 2008年12月 研究属性 基础研究 摘 要 (限400字)：MicroRNA(微RNA，miRNA)是一类长约22个核苷酸的小分子非编码RNA。尽管在相关的模式生物基因组中miRNA基因被大量的发现，但在家蚕发育环节中miRNA功能研究至今没有报道。家蚕既是一种能吐丝的经济动物，同时又能作为生物反应器生产药用重组蛋白。本研究以家蚕为模式生物，开展对家蚕发育过程中不同时期的miRNA研究，确定其miRNA基因序列，并选择性地研究若干重要miRNA基因的结构模式和功能，以此来分析家蚕在不同成长时期蛋白质的表达调控模式。我们通过确定miRNA分子在家蚕生长和发育分化中的作用，来进一步阐明影响家蚕经济性状的分子机理并在分子水平上揭示家蚕发育和生理过程，填补国内外在家蚕miRNA领域研究的空白。 关 键 词(用分号分开，最多5个) 家蚕；微RNA；RNA干涉；转录调控；表达 项目组主要成员（注: 项目组主要成员不包括项目申请者，国家杰出青年科学基金类项目不填写此栏。） 编号 姓 名 出生年月 性别 职 称 学 位 单位名称 电话 电子邮件 项目分工 每年工作时间（月） 1 1977-12-18 女 助理研究员 博士 浙江理工大学 0571－86843194 jcyacai@sohu.com 杂交分析 3 2 1977-2-22 男 助理研究员 硕士 浙江理工大学 0571－86843194 liu16@hzcnc.com 序列比对分析 3 3 1975-12-18 男 讲师 硕士 浙江理工大学 0571－86843194 wuxinzm@126.com miRNA基因鉴定 4 4 1974-1-1 女 博士生 硕士 浙江理工大学 0571－86843190 xhlong0717@126.com miRNA功能分析 3 5 1978-1-1 女 博士生 硕士 浙江理工大学 0571－86843190 lanhl@163.com miRNA靶标鉴定 3 6 7 8 9 总人数 高级 中级 初级 博士后 博士生 硕士生 0 FORMTEXT 0                   说明: 高级、中级、初级、博士后、博士生、硕士生人员数由申请者负责填报（含申请者），总人数自动生成。 经费申请表 （金额单位：万元） 科目 申请经费 备注（计算依据与说明） 一.研究经费 25.75 FORMTEXT 25.7500       1.科研业务费 15.75 FORMTEXT 15.7500       （1）测试/计算/分析费 8.5000 cDNA文库构建、cDNA测序、Northern Blot分析 （2）能源/动力费 1.2500 FORMTEXT 1 按照5％计算 （3）会议费/差旅费 3.0000 国内外学术交流 （4）出版物/文献/信息传播费 3.0000 版面费，专利申请费 （5）其它             2.实验材料费 10 FORMTEXT 10.0000       （1）原材料/试剂/药品购置费 8.0000 各种分子生物学实际，细胞培养，体外转录，免疫检测试剂等 （2）其它 2.0000 常规实验耗材等 3.仪器设备费 0 FORMTEXT 0.0000 实验设备齐全，无需购置 （1）购置             （2）试制             4.实验室改装费       实验室条件完好，无需改装 5.协作费             二.国际合作与交流费 4 FORMTEXT 4.0000       1.项目组成员出国合作交流 2.0000 拟派1名项目组骨干成员去国外短期学习 2.境外专家来华合作交流 2.0000 聘请国外专家来访讲学 三.劳务费 4.0000 按不超过15％ 四.管理费 1.5000 按不超过5％计算 合 计 35.25 FORMTEXT 35.2500       与本项目相关的 其他经费来源 国家其他 计划 项目进度计划表范例计划下载计划下载计划下载课程教学计划下载 资助经费       其他经费资助（含部门匹配）       其他经费来源合计 0 FORMTEXT 0.0000 报告正文 （一）立项依据与研究内容（4000-8000字）： 1.     项目的立项依据 MicroRNA(微RNA，miRNA)是一类长约22个核苷酸的小分子非编码RNA。miRNA可以通过与靶基因mRNA的特定位点结合，抑制该蛋白的合成或诱导该mRNA的降解，从而参与基因的表达调控[1-3]。miRNA 在各种生物中普遍存在, 现已从动物的线虫、果绳、家鼠、人体及植物的拟南芥中都分离到了miRNA [4－12]。 查询专业的miRNA数据库——miRBase（http://microrna.sanger.ac.uk/）得知，目前已经发现有3000多条miRNA序列，但其中只有一半的的miRNA功能通过实验确定[13, 14]。序列同源性比对发现在其他物种中也存在大量miRNA，其数量远未达到饱和。此外，除了少数几个如lin-4、let-7等的功能研究得比较清楚外，大多数的miRNA的生理功能尚不清楚。因此，开展对几种常见的模式生物的miRNA研究是至关重要的。 微RNA分子的序列短小，在基因组中存在较多的互补序列，在不同生物体内与靶标结合的方式也不尽相同，而且通常还与多种蛋白相互作用，这使得建立一个有效而且普遍适用的研究方法异常困难。虽然如此，科学家仍在不断努力，并在miRNA基因鉴定、生理功能和靶标研究中取得了明显的突破。在各种小分子RNA中，miRNA是一类长度很短的非编码调控单链小分子RNA，长度在18-26nt，是由一段具有发夹结构的长度为70-100nt的单链RNA前体（pre-miRNA）剪切后生成。微RNA基因以单拷贝、多拷贝或基因簇等多种形式存在于基因组中，而且绝大部分定位于基因间隔区。其转录独立于其他基因，并不翻译成蛋白质，而是在体内代谢过程中起到多种调控作用。它通过与目标mRNA基因的3’端非编码区域（3'UTR）互补匹配导致该mRNA基因的翻译受到抑制。由于miRNA在各个物种间具有高度的进化保守性，并且在茎部的保守性更强；但在环部可以容许更多的突变点存在。基于这些特点，使得运用多种实验方法以及生物信息学方法来预测和确定miRNA成为可能[15-26]。 众所周知，家蚕既是非常重要的经济昆虫，又是极其重要的模式生物。作为模式动物与哺乳动物基因组相比，家蚕基因组相对简单，且个体较大。其单倍体完全基因组长度为450M左右，共有28对染色体。这给细胞生命活动的机理及发育生物学研究提供了一个非常合适的材料。此外，家蚕在基础生命体系、物质代谢、能量代谢和遗传方式上与人类有很大的相似性。家蚕遗传资源存在大量疾病模型，如癌症模型、糖尿病模型、发育畸形模型等。通过研究这些遗传模型，将在克隆人类疾病控制新基因、研究疾病机理和开发新药物上发挥重大作用，对解决人类疾病、寿命等重大问 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 具有重要参考价值。另外，家蚕是理想的生物反应器，家蚕体内的丝腺是一个高效率的蛋白质工厂，通过基因组研究，彻底阐明茧丝生产的调控机理，可使家蚕生产对人类有益的高纯度药用蛋白质。 在各种小分子RNA中，microRNA是一类长度很短的非编码调控单链小分子RNA，长度在18-26nt，是由一段具有发夹结构的长度为70-100nt的单链RNA前体（pre-miRNA）剪切后生成。MicroRNA基因以单拷贝、多拷贝或基因簇等多种形式存在于基因组中，而且绝大部分定位于基因间隔区。其转录独立于其他基因，并不翻译成蛋白质，而是在体内代谢过程中起到多种调控作用。它通过与目标mRNA基因的3’端非编码区域（3'UTR）互补匹配导致该mRNA基因的翻译受到抑制。由于microRNA在各个物种间具有高度的进化保守性，并且在茎部的保守性更强；但在环部可以容许更多的突变点存在。这些特点，使得利用生物信息学的方法来预测microRNA成为可能[1-18]。最早发现的microRNA是在线虫的let-7和lin-4。运用多种实验方法以及生物信息学方法，至今已找到了3518种 microRNA基因序列[19-21],并被收入专门的数据库 miRBase 数据库。 根据microRNA的大小、丰度以及其生物来源，国际上提出了一套通用的microRNA命名和注释的 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 ：（1）通过Northernd杂交可以从以大小分级的RNA样品中检测到18-26nt的转录物；（2）可以从以大小分级的cDNA文库中分离得到，且来源是所建库的生物基因组；（3）有能形成发夹结构的前体，且该发夹结构中的一条臂上包含有microRNA序列，发夹必须是具有最低能量的预测结构；此外发夹结构的其中一条臂上必须含有~22nt microRNA核苷酸中的至少16nt预测的结构中不应该有大的内部环或泡，特别是不能有大的不对称的泡；（4）进化上高度保守的microRNA和它的发夹结构前体，保守的发夹要符合标准（3）中的最小配对碱基的要求，但不必是能量最低；（5）随着Dicer酶的功能活性降低，可以检测到生物体中前体的积聚。 在与家蚕近缘昆虫（例如果蝇、蜜蜂、蚊子等）microRNA研究中，已发现了上百种microRNA。其中在Anopheles gambiae中发现了38种，Apis mellifera 中找到了25种，Drosophila melanogaster中发现了78，Drosophila pseudoobscura 中有73种[21]。在这些microRNA序列中，仅有78个是非100%相似的。这些microRNA序列、结构、丰度和表达方式的多样性使其可能作为mRNA表达的调节子，对基因表达、细胞周期调控乃至个体发育过程都起了重要的调控作用。 尽管在相关的模式生物基因组中microRNA基因被大量的发现，但在家蚕发育环节中microRNA功能研究至今没有报道。在家蚕发育过程中各个变态期是否存在microRNA基因? 它们的结构如何？功能如何？在家蚕蛹期调控作用机制是什么？家蚕作为模式生物具有非常重要的生物学特征和比较清楚的遗传背景。家蚕既是一种能吐丝的经济动物，同时又能作为生物反应器表达药用重组蛋白，在理论上研究与家蚕发育分化节律调控相关的microRNA,对于深刻认识家蚕体内复杂调控机理具有重要意义。 本研究以家蚕为模式生物，开展对家蚕发育过程中不同时期的miRNA研究，确定其miRNA基因序列，并选择性地研究若干重要miRNA基因的结构模式和功能，以此来分析家蚕在不同成长时期蛋白质的表达调控模式。确定miRNA分子在家蚕生长和发育分化中的作用，进一步阐明影响家蚕经济性状的分子机理并在分子水平上揭示家蚕发育和生理过程，填补国内外在家蚕miRNA领域研究的空白。 主要参考文献： [1] Bartel DP. (2004) MicroRNAs: genomics, biogenesis, mechanism, and function. Cell, 116, 281–297 [2] Filipowicz W, Jaskiewicz L, Kolb FA. and Pillai RS. (2005) Post-transcriptional gene silencing by siRNAs and miRNAs. Curr. Opin. Struct. Biol., 15, 331–341 [3] Sontheimer EJ. and Carthew RW. (2005) Silence from within: endogenous siRNAs and miRNAs. Cell, 122, 9–12 [4] Lagos-Quintana M, Rauhut R, Lendeckel W, et al. (2001) Identification of novel genes coding for small expressed RNAs. Science, 294(5543): 853-858 [5] Lau NC, Lim LP, Weinstein EG, et al. (2001) An abundant class of tiny RNAs with probable regulatory roles in Caenorhabditis elegans. Science, 294(5543): 858-862 [6] Lee RC, Ambros V. (2001) An extensive class of small RNAs in Caenorhabditis elegans. Science, 294 (5543):862-864 [7] Mourelatos Z, Dostie J, Paushkin S, et al. (2002) miRNPs: a novel class of ribonucleoproteins containing numerous microRNAs. Genes Development, 16(6):720-728 [8] Lagos-Quintana M, Rauhut R, Yalcin A, et al. (2002) Identification of tissue-specific microRNAs from mouse. Current Biology, 12 (9):735-739 [9] Llave C, Kasschau KD, Rector MA, et al. (2002) Endogenous and silencing-associated small RNAs in plants. Plant Cell, 14(7):1605-1619 [10] Reinhart BJ, Weinstein EG, Rhoades MW, et al. (2002) MicroRNAs in plants. Genes Development, 16(13):1616-1626 [11] Lagos-Quintana M, Rauhut R, Meyer J, et al. (2003) New microRNAs from mouse and human. RNA, 9(2):175- 179 [12] Dostie J, Mourelatos Z, Yang M, et al. (2003) Numerous microRNPs in neuronal cells containing novel microRNAs. RNA, 9(2):180- 186 [13] Griffiths-Jones S. The microRNA Registry.Nucleic Acids Res 32:D109-D111(2004). [14] Griffiths-Jones S, Grocock RJ, van Dongen S, et al. (2006) miRBase: microRNA sequences, targets and gene nomenclature. Nucleic Acids Res., 34:D140-D144 [15] Aravin AA, Lagos-Quintana M, Yalcin A, et al. (2003) The small RNA profile during Drosophila melanogaster development. Dev. Cell, 5:337-350 [16] Grad Y, Aach J, Hayes GD, et al. (2003) Computational and experimental identification of C. elegans microRNAs. Mol Cell, 11:1253-1263 [17] Lai EC, Tomancak P, Williams RW and Rubin GM. (2003) Computational identification of Drosophila microRNA genes. Genome Biol., 4:R42 [18] Lim LP, Lau NC, Weinstein EG, et al. (2003) The microRNAs of Caenorhabditis elegans. Genes Dev., 17:991-1008 [19] Johnston RJ, Hobert O. (2003) A microRNA controlling left/right neuronal asymmetry in Caenorhabditis elegans. Nature, 426:845-849 [20] Ohler U, Yekta S, Lim LP, et al. (2004) Patterns of flanking sequence conservation and a characteristic upstream motif for microRNA gene identification. RNA, 10:1309-1322 [21] Berezikov E, Guryev V, van de Belt J, et al. (2005) Phylogenetic shadowing and computational identification of human microRNA genes. Cell, 120:21-24 [22] Altuvia Y, Landgraf P, Lithwick G, et al. (2005) Clustering and conservation patterns of human microRNAs. Nucleic Acids Res 33:2697-2706 [23] Bentwich I, Avniel A, Karov Y, et al. (2005) Identification of hundreds of conserved and nonconserved human microRNAs. Nat. Genet., 37:766-770 [24] Giraldez AJ, Cinalli RM, Glasner ME, et al. (2005) MicroRNAs regulate brain morphogenesis in zebrafish. Science, 308:833-838 [25] Jones-Rhoades MW, Bartel DP. (2004) Computational identification of plant microRNAs and their targets, including a stress-induced miRNA. Mol. Cell, 14:787-799 2、 [26] Adai A, Johnson C, Mlotshwa S, et al. (2005) Computational prediction of miRNAs in Arabidopsis thaliana. Genome Res., 15:78-91 3、 研究内容、研究目标,以及拟解决的关键问题 研究内容： (1) 预测microRNA基因：利用比较基因组方法和RNA序列的数学特征刻画方法，对已有的microRNA进行数学上的描述，改进已有的预测microRNA基因模型，充分利用已有EST和全长cDNA资源，设计新的算法，预测家蚕microRNA基因的前体序列、成熟序列、目的序列。（研究miRNA的来源，前体，预测，验证） (2) microRNA基因检测和鉴定：利用预测的结果和已有的cDNA文库和小RNA分子资源设计实验，分别利用Nortern杂交和化学合成芯片技术，试验验证预测的结果，为预测提供新的证据和模型，扩大搜索的范围。有机的结合预测和试验检测，鉴定家蚕microRNA基因的前体序列、成熟序列、目的序列。 （3）某些microRNA基因结合蛋白的功能研究 a.通过正反向遗传学技术，确定某基因是否受到特定miRNA的表达调控 b.结合生物信息学技术等手段确定miRNA靶基因 c.阐明miRNA和靶标相互作用的生理功能 研究目标： 该项目的主要研究目标是（1）家蚕miRNA分子的结构特征鉴定；（2）家蚕特定miRNA分子的功能分析。通过对家蚕模式生物的miRNA研究，在理论上基本阐明家蚕的miRNA的转录、表达、代谢和调控机制，填补国内外在家蚕miRNA研究领域的空白；发表高水平SCI 论文 政研论文下载论文大学下载论文大学下载关于长拳的论文浙大论文封面下载 2－3篇。 拟解决的关键问题： （1） 目前，利用序列比对工具（例如BLAST等）预测microRNA基因前体序列，对发现几乎完美的匹配序列非常有效，然而这些方法对同源性比较远的序列却没有用。如何构建合适的数学模型设计简单可行的新算法，识别预测家蚕基因组中的各种情况的microRNA基因是一个关键问题。 （2） 由于microRNA序列的长度较短，对microRNA的提取和功能鉴定是一个非常困难的问题，如何设计合理的实验路线和恰当的试验来提取和鉴定microRNA基因也是本项目的关键问题之一。 4、 拟采取的研究 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 及可行性分析。 （1） 研究方案与技术路线 （2） 可行性分析 本项目实验方案设计合理，技术路线切实可行。在组员梯队构成上设置合理，且都极富合作和创新精神，组员在相关领域发表SCI论文10多篇。而且近两年，项目组在家蚕小RNA研究领域已经取得一定进展，目前已经成功构建了家蚕cDNA文库，测定了1000多条cDNA序列并已经登陆GeneBank（登陆号：DN 236876－237878，DN 591076－591089），从中发现了一系列新的非编码RNA家族。 项目申请人所在的浙江理工大学生命科学院生物化学研究所是浙江省重点实验室，本学科被列为浙江省生物医学工程“重中之重”学科。本研究所近年来承担或完成了多项国家级有关家蚕研究的项目，是国内外家蚕基础和应用研究的重点基地之一。项目组所在实验室已经购置价值2000多万的实验仪器，具有家蚕蛋白质组和功能基因组学两个研究技术平台，完全可以保障本项目的顺利实施。 5、 本项目的特色与创新之处 尽管在其他相关模式生物中miRNA基因被大量发现和确认，但到目前为止，在家蚕中的miRNA功能研究至今没有报道。在家蚕发育过程中各个变态期是否存在microRNA基因? 它们的结构模式如何？功能如何？在家蚕蛹期调控作用机制是什么？家蚕作为模式生物具有非常重要的生物学特征和比较清楚的遗传背景。家蚕既是一种能吐丝的经济动物，同时又能作为生物反应器生产药用重组蛋白。因此，本研究的创新之处在于，首次以我国大量饲养的经济昆虫家蚕为模式生物，开展与家蚕发育分化节律调控相关的miRNA研究，这对于认识家蚕体内复杂调控机理和深入利用家蚕生物反应器生产药用蛋白都具有极其重要的意义，同时也填补了国内外家蚕miRNA研究的空白。 6、 年度研究计划及预期研究结果。 2007年1月－6月 分离纯化小分子RNA，构建小RNA分子的cDNA文库 2007年7月－12月 序列比对分析与Nortern blot分析确定miRNA分子 2008年1月－6月 选择3－5个特定miRNA分子进行表达谱分析和表达调控研究 2008年7月－12月 确定特定miRNA的靶标基因已经生物学功能研究 在此期间培养研究生1－2名，发表高水平SCI论文2－3篇。 （二）研究基础与工作条件 1、 工作基础 本项目依托浙江理工大学生命科学院张耀洲教授的生物化学研究所，本所是浙江省重点实验室、浙江省生物医学工程“重中之重”学科所在地。研究所近年来共计完成了家蚕相关研究项目多项，其中包括“863”计划和“973”项目。在过去1年中，我们已经成功构建了家蚕cDNA文库，测定了1000多条cDNA序列，并从中发现了一系列新的非编码RNA（ncRNA）家族。此外，我们已经利用比较基因学方法，利用同源搜索初步得到了31个miRNA前体序列和miRNA基因序列。项目组成员已经在相关领域发表学术论文10多篇，其中多数被SCI收录。这些工作已初步形成了一定的积累，为有关miRNA的研究奠定了很好的基础。 我们已经通过miRBase中的果蝇、蜜蜂和按蚊的miRNAs序列及相应的加工前体序列与家蚕基因组（http://silkworm.genomics.org.cn/）序列比对，预测得到了31个长约72～101bp的候选miRNA前体序列，需要进一步的Northern blot等鉴定。我们使用ClustalX软件包对这些家蚕的miRNA前体做了聚类分析（图1）。 图 1. 预测的miRNA前体序列聚类分析 同时我们也将这些预测得到的31条家蚕候选miRNA前体序列与已知相应的果蝇序列做了多重比对（multi-alignment），图2给出了3个候选miRNA分子（bm-mir-1、 dme-mir-1、dps-mir-1）的比对结果。分析表明，家蚕候选miRNA分子和对应的果蝇miRNA分子之间的序列同源性达50%以上，而15bp的同源性达到50～60%，11bp同源性达到60～70%。同时，有17个候选的家蚕miRNA分子与果蝇中相应的miRNA分子序列一致。 图 2. bm-mir-1、 dme-mir-1和dps-mir-1的前体序列多重比较分析 我们进一步比较了特定的几个家蚕候选miRNA分子的二级结构，从图 3中可以看出，这些候选的miRNA分子中有形成典型RNA二级结构的茎环保守区，这是miRNA前体形成成熟的miRNA分子的必要条件。 图 3. bm-mir-1、 aga mir-1、ame-mir-1、dme-mir-1和dps-mir-1的二级结构比较 以上这些研究为家蚕miRNA结构和基因序列的鉴定奠定了很好的基础。 2、 工作条件 申请人所在的浙江理工大学数学研究所与生命科学院张耀州教授的生物化学研究所合作建立了生物信息研究中心，工作条件是相当好的。并与国内外生物信息研究单位有良好的合作。校图书馆订有相当数量的相关学科的图书、杂志，基本可以满足需要。利用这里的网络资源，我们可以比较快速地了解相关领域的动态。我校对本学科和本研究方向十分重视，给与多方面的支持。 实验室已经配备计算用工作站一台，美国ABI 3100A 和ABI3130遗传分析仪各一台、美国ABI 700E 蛋白快速纯化工作站、美国ABI QTrap 液相质谱串联蛋白组工作站、德国Christ GmbH离心浓缩仪（RVC2-18）、德国Christ GmbH冷冻干燥系统(alphal 2-4)、瑞典Amersham 公司2-D Electrophoresis System 二维电泳及图像分析系统、瑞典Amersham 公司2-D LC System 二维液相色谱系统、瑞典Amersham 公司AKTAprime System 蛋白纯化系统、日本Nikon公司 ECLIPSE E1000 明视场/相差/荧光/DIC正立显微镜、日本Nikon公司ECLIPSE TS100-F 三目倒置生物显微镜、日本Nikon公司TE2000U+NT-88NE 显微操作系统、上海力新HFSafe-1500 Safety Cabine 生物安全柜、德国贺利氏UT 12 HOT AIR STERILIZER 热空气循环消毒箱（112升）、德国Leica公司CM1900冷冻切片机、德国Leica公司RM2135石蜡切片机、6.5万转日立超速离心机、DNA合成仪等。 需添置性能较好的服务器、计算机、激光打印机、扫描仪等设备，以便进行程序设计、数据分析与计算、上网搜集资料和下载国内外生物信息数据库等工作。 3、申请人简历 项目申请人龚朝辉2001毕业于浙江大学生物学国家理科基地班，获理学学士学位，2004年7月获得浙江大学生物化学与分子生物学专业硕士学位，最后在浙江理工大学工作，并在职攻读浙江大学生化与分子生物学专业的博士学位。申请人先后参与了多项国家级、省级重点以及863等项目课题的研究。目前，以第一作者在《Journal of Biotechnology》、《Journal of Biochemistry and Molecular Biology》和《Biotechnology and Applied Biochemistry》等SCI核心杂志上发表学术论文3篇，第三作者在《RNA biology》上发表论文1篇，另有第一作者的论文投稿到《Diabetologia》（审稿中）。已经申请国家发明专利2项，其中一项已公开。在工作期间，作为本研究所家蚕功能基因组学研究小组的骨干成员，负责家蚕cDNA文库的构建与分析、小RNA分子的结构鉴定与功能研究。 4、承担科研项目情况 1） 国家自然科学基金《蚕表达CTB和胰岛素融和蛋白抗I型糖尿病功能研究》（30277056）（主要完成人） 2） 浙江省自然科学基金《I型糖尿病口服疫苗的设计和在家蚕中的表达及机理研究》（Y204307）（第三完成人） 3） 国家教育部新世纪优秀人才支持计划《蚕表达CTB与单链胰岛素融合蛋白口服抗I型糖尿病功能研究》（NCET-04-0531）（第四参与人） 4） 浙江省科技厅重点项目《家蚕生物反应器生产I型糖尿病口服药物研究》(2005C23028)（第四参与人） 5） 国家863重大专项课题《家蚕生物反应器生产生物制品的平台技术研究》(2004AA206010)（第八参与人）   （三）经费申请说明 无特殊说明。 （四）其他附件清单 1．申请者近三年发表的代表性论文 1． Gong ZH, Jin YF, Zhang YZ. Oral administration of a cholera toxin B subunit-insulin fusion protein produced in silkworm protects against autoimmune diabetes. J. Biotechnol. 2005, 119(1): 93-105 [SCI, IF=2.323] 2． Gong ZH, Jin HQ, Jin YF, Zhang YZ. Expression of cholera toxin B subunit and assembly as functional oligomers in silkworm. J. Biochem. Mol. Biol. 2005,38(6):717-724 [SCI, IF=1.53] 3． Gong ZH, Jin YF, Zhang YZ. Incorporation of partial polyhedrin homology sequences (pphs) enhances the production of cloned foreign genes in baculovirus expression system. Biotechnol. Appl. Bioc. 2006, 43(3):165-170 [SCI, IF=0.942] 4． Gong ZH, Jin YF, Zhang YZ. Suppression of insulitis in non-obese diabetic (NOD) mice by oral administration of a cholera toxin B subunit-insulin B chain fusion protein expressed in silkworm. Diabetologia. 2006 (In review) [SCI, IF=5.583] 5． Jin YF, Chen YH, Gong ZH. Determination and analysis of the pre-mRNA cleavage sites in Arabidopsis. RNA biology. 2005, 2(3): 24-26 6． 金勇丰，张耀洲，龚朝辉 表达CTB和人胰岛素融合蛋白的重组家蚕杆状病毒及其应用 国家发明专利 公开号：CN 1629288A 7． 金勇丰，张耀洲，龚朝辉 一种融合基因、其表达的蛋白及其制备方法 国家发明专利 申请号：200410056850X 2．项目组成员简介 蓝航莲，女，1978年6月出生，浙江衢州人，2000年毕业于中央民族大学生物化学系，获医学学士学位，2003年毕业于中国农科院研究生院，获工学硕士学位，2003年9月至今，师从浙江理工大学张耀洲教授攻读博士学位，主要研究方向为家蚕分子生物学。 签字和盖章页(此页自动生成,打印后签字盖章) 申 请 者：龚朝辉 依托单位：浙江理工大学 项目名称：家蚕中microRNA的基因鉴定与功能研究 资助类别：面上项目 亚类说明：自由申请项目 附注说明： 申请者承诺： 我保证申请书内容的真实性。如果获得基金资助，我将履行项目负责人职责，严格遵守国家自然科学基金委员会的有关规定，切实保证研究工作时间，认真开展工作，按时报送有关材料。若填报失实和违反规定，本人将承担全部责任。 签字： 项目组主要成员承诺： 我保证有关申报内容的真实性。如果获得基金资助，我将严格遵守国家自然科学基金委员会的有关规定，切实保证研究工作时间，加强合作、信息资源共享，认真开展工作，及时向项目负责人报送有关材料。若个人信息失实、执行项目中违反规定，本人将承担相关责任。 编号 姓 名 工作单位名称 项目分工 每年工作时间(月) 签 字 1 蒋彩英 浙江理工大学 杂交分析 3 2 刘玉明 浙江理工大学 序列比对分析 3 3 聂作明 浙江理工大学 miRNA基因鉴定 4 4 龙晓辉 浙江理工大学 miRNA功能分析 3 5 蓝航莲 浙江理工大学 miRNA靶标鉴定 3 6 7 8 9 依托单位及合作单位承诺： 已按填报说明对申请人的资格和申请书内容进行了审核。申请项目如获资助，我单位保证对研究计划实施所需要的人力、物力和工作时间等条件给予保障，严格遵守国家自然科学基金委员会有关规定，督促项目负责人和项目组成员以及本单位项目管理部门按照国家自然科学基金委员会的规定及时报送有关材料。 依托单位公章 合作单位公章1 合作单位公章2 日期： 日期： 日期： 您现在不能检查保护文档或打印文档，请根据以下三个步骤操作： 1)如果您是Word2000或以上版本用户，请把Word宏的安全性设为:"中" 方法: Word菜单->工具->宏->安全性->安全级,设置为"中" (如果您是Word97用户，继续执行以下步骤) 2)关闭本文档，重新打开本文档 3)点击"启用宏"按钮，即可开始填写本文档或打印了 7 第 2 页 版本1.000.000 _1238056238.unknown _1238056242.unknown _1238056244.unknown _1238056245.unknown _1238056243.unknown _1238056240.unknown _1238056241.unknown _1238056239.unknown _1238056234.unknown _1238056236.unknown _1238056237.unknown _1238056235.unknown _1238056230.unknown _1238056232.unknown _1238056233.unknown _1238056231.unknown _1238056227.unknown _1238056229.unknown