10、复方烟酸缓释片质量研究

10、复方烟酸缓释片质量研究 西药三类 复方烟酸缓释片-申报资料10 本品为淡黄色薄膜衣片。除去衣膜，片芯为白色。 参考中国药典2000年版二部烟酸鉴别项下方法，采用化学法作为本品的鉴 别方法。 （1）取本品的细粉适量（约相当于烟酸0.25g），置100ml的量瓶中，加甲醇 70ml，超声，加入水20ml，超声溶解，再加甲醇至刻度。滤过，取滤液20ml，滴加0.4%氢氧化钠溶液至遇石蕊试纸显中性反应，加硫酸铜试液3ml，即缓缓析出淡蓝色沉淀。三批样品均呈正反应。另取仅不含烟酸的处方量的细粉同法 实验，结果显阴性反应。 （2）取本品片剂细粉适量（约相当于烟酸4mg），加2，4—二硝基氯苯8mg，研匀，置试管中缓缓加热熔化后，再加热数秒钟，放冷，加乙醇制氢氧化钾试 液3ml，即显红紫色。三批样品均呈正反应。另取仅不含烟酸的处方量的细粉 同法实验，结果显阴性反应。 洛伐他汀含量测定项下的供试品溶液的色谱图中，有与洛伐他汀对照品溶 液主成分峰保留时间一致的色谱峰。三批样品的供试品溶液与洛伐他汀对照品 溶液的高效液相色谱图见附图1~附图4。 本品的主要成分为烟酸与洛伐他汀，由于烟酸较稳定，中国药典2000年版二部收载的烟酸原料及烟酸的制剂均无有关物质检查项，洛伐他汀则较不稳定， 第-1-页 西药三类 复方烟酸缓释片-申报资料10 在美国药典24版及中国卫生部部 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 （WS-045（C-033）-97）中均对洛伐他汀原料的有关物质进行检查。所以重点对本品中洛伐他汀的有关物质进行检查。 仪器：岛津LC-10AT高效液相色谱仪 vp 色谱柱：迪马ODS-C18，5μ,4.6×150mm 流动相：乙腈—甲醇—磷酸盐缓冲溶液（取磷酸二氢钠3.45g，加水900ml溶解，用10%磷酸调节pH4.0，加水稀释到1000ml，混匀）（5：1：3） 流速：1.0ml/min 柱温：30? 检测波长：238nm 理论塔板数按洛伐他汀峰计算应不低于2000。 参照美国药典24版中洛伐他汀片含量测定下的液相条件进行检查。在此条 件下，烟酸的保留时间为1.5分左右，与溶剂峰重叠；洛伐他汀的保留时间为 9.5分左右，理论塔板数达10000左右。 从洛伐他汀对照品在流动相的紫外光谱图（附图5）可看出，洛伐他汀在 230nm、238nm、246nm有三个吸收峰，238nm处吸收最大，故选用238nm为检测波长。 供试品溶液的制备：取本品1片，置研钵中研细，转移置100ml量瓶中，用80ml甲醇分次洗涤研钵，洗液并入量瓶中，超声10分钟，加20ml醋酸钠缓冲液（取冰醋酸3.0ml，加水1000ml，加20%氢氧化钠调节pH值4.0）,继续超声5分钟。放冷，用甲醇-醋酸钠缓冲液（8：2）稀释至刻度，摇匀，精密量取 5ml，置10ml量瓶中，用甲醇-醋酸钠缓冲液（8：2）稀释至刻度，于3000转/分的转速下离心10分钟，取上清液作为供试品溶液。 第-2-页 西药三类 复方烟酸缓释片-申报资料10 对照溶液的制备：取上述供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，用甲醇-醋酸钠缓冲液（8：2）稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。 取对照溶液20μl，注入高效液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰 高约为满量程的20%，另取供试品溶液20μl，注入色谱仪，记录色谱图至主成 分保留时间的2.5倍。扣除保留时间为1.5分钟左右的烟酸色谱峰及溶剂峰， 供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，按自身对照法计算杂质峰的含量。 美国药典24版中洛伐他汀片含量测定的供试品溶液是将片粉用乙腈-醋酸钠缓冲液（8：2）超声溶解20分钟。为节约成本，本品的提取溶剂采用甲醇-醋酸钠缓冲液（8：2），此溶剂比甲醇-水（8：2）制备的供试品溶液稳定性好， 而先用甲醇提取，后加醋酸钠缓冲液可提高样品的溶解速度。由于样品溶液经 0.45μm的滤膜过滤不易得到澄清溶液，故选择离心后取上清液的方法。 将样品分别用甲醇-水（8：2）和甲醇-醋酸钠缓冲液（8：2）溶解，分别在不同时间取样注入色谱仪。比较两种溶剂中样品溶液的稳定性。扣除烟酸峰 及溶剂峰，以峰面积归一化法计算杂质含量。放置时间越长，样品溶液的杂质 量越多，尤其以保留时间为时间为6.0分及10.5分左右的杂质峰增加最为明显， 其他杂质基本无变化。结果见 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 1。结果表明，醋酸钠缓冲液能明显抑抑制洛 伐他汀的降解，也说明供试品溶液需现配现用，减少洛伐他汀的降解。 杂质峰（%） 杂质峰（%） 总杂质峰（%） 样品溶解 甲醇-水 甲醇-缓冲液 甲醇-缓后放置时 甲醇-水 间(小时) 冲液 6.0分 10.5分 5.9分 10.4分 0 0.15 0.06 0.12 0.07 0.74 0.73 0.5 0.26 0.14 0.16 0.11 0.95 0.82 1 0.36 0.21 0.20 0.18 1.14 0.89 1.5 0.46 0.27 0.24 0.18 1.29 0.98 2 0.57 0.34 0.28 0.22 1.47 1.06 第-3-页 西药三类 复方烟酸缓释片-申报资料10 2.5 0.69 0.42 0.32 0.25 1.69 1.14 3 0.82 0.51 0.36 0.29 1.89 1.22 3.5 0.95 0.59 0.40 0.32 2.11 1.32 4 1.08 0.67 0.44 0.36 2.32 1.48 取按处方配制的空白辅料、含烟酸的空白辅料、洛伐他汀原料及本品，按 上述供试品溶液的制备方法制备溶液，分别取20μl及溶剂（甲醇-醋酸钠缓冲液）20μl注入色谱仪，色谱图见附图6~附图10。辅料、烟酸及溶剂对本品中 洛伐他汀的有关物质检查无影响。 按上述方法制备。放置半小时后，取20μl注入色谱仪。 取本品一片，置研钵研细，转移至100ml量瓶中，加入40ml甲醇超声10分钟，加入5ml 1mol/L盐酸溶液继续超声10分钟，取出放冷后， 依次加5ml 1mol/L氢氧化钠溶液及10ml的水，加甲醇稀释至刻度，摇匀，量 取5ml置10ml量瓶中，加甲醇-醋酸钠缓冲液（8：2）稀释至刻度，摇匀，离 心，取上清液20μl注入色谱仪。 取本品一片，置研钵研细，转移至100ml量瓶中，加入40ml甲醇超声10分钟，加入1ml 1mol/L氢氧化钠溶液继续超声10分钟，取出放冷后，依次加1ml 1mol/L盐酸溶液及18ml的水，加甲醇稀释至刻度，摇匀，量 取5ml置10ml量瓶中，加甲醇-醋酸钠缓冲液（8：2）稀释至刻度，摇匀，离 心，取上清液20μl注入色谱仪。 取本品一片，置研钵研细，转移至100ml量瓶中，加入40ml甲醇超声10分钟，加入1ml 30%过氧化氢溶液继续超声10分钟，取出放冷后， 加入19ml的水，加甲醇稀释至刻度，摇匀，量取5ml置10ml量瓶中，加甲醇-醋酸钠缓冲液（8：2）稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液20μl注入色谱仪。 取上述供试品溶液适量，密封，于60?烘箱中放置3小时，取出放冷，取20μl注入色谱仪。 第-4-页 西药三类 复方烟酸缓释片-申报资料10 取上述供试品溶液适量，密封，于Lux5000的光照箱中放置12小时，取20μl注入色谱仪。 以上六种溶液的HPLC图见附图11~附图16。以峰面积归一化法计算杂质的 含量并观察其种类及数量的变化。结果见表2。 杂质 保留时 破坏前 酸破坏 碱破坏 氧化破坏 光破坏 热破坏 分离度 编号 间（分） 1 4.3 0.03 0.02 0.02 0.03 0.03 0.02 -- 2 4.7 0.10 0.05 0.07 0.10 0.09 0.08 4.22 3 5.3 0.02 未检出 0.02 0.04 0.04 0.04 6.22 4 6.0 0.24 37.05 13.03 0.73 5.42 10.06 2.57 5 7.3 0.04 0.02 0.03 0.04 0.03 0.05 4.13 6 8.1 0.06 0.02 0.06 0.06 0.06 0.05 2.05 7 10.6 0.16 12.34 8.65 0.56 4.14 6.81 2.99 8 11.4 0.10 0.09 0.09 0.09 0.10 0.07 2.13 9 19.5 0.22 0.23 0.24 0.22 0.23 0.25 38.77 总计 0.97 49.81 22.23 1.87 10.13 17.44 结果表明，洛伐他汀主峰在杂质6和杂质7之间，主峰与前后杂质峰的分 离度分别为3.71和2.99，各杂质峰分离度也大于1.5，说明此液相条件分离洛 伐他汀的有关物质效果较好。样品溶液经酸、碱、光、热破坏后，杂质种类无 增加，杂质4和杂质7均急剧增加，其他杂质无明显变化。 将上述供试品溶液用甲醇-醋酸钠缓冲液（8：2）稀释至样品溶液中主峰的 响应值约为噪音水平的3倍，记录色谱图，见附图17，得出检测限为0.4ng。 取三批供试品按上述方法制备供试品溶液及对照溶液，立即注入色谱仪， 按自身对照法计算杂质的含量，测定结果见表3。三批样品的供试品溶液及对 照溶液的HPLC图见附图18~附图23。 第-5-页 西药三类 复方烟酸缓释片-申报资料10 样品批号 030301 030302 030303 总杂质（%） 0.65 0.66 0.64 由于本品中的洛伐他汀为速释成分，洛伐他汀在水中的溶解度很小，故依 据有关规定，应进行溶出度检查。 按中国药典2000年版二部附录X C第一法，选用转篮法进行溶出度的测定。 以0.5%十二烷基硫酸钠溶液的磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钠1.38g，十二烷基硫酸钠5g，加水900ml溶解，用1mol/L氢氧化钠调节pH7.0，加水稀释到1000ml，混匀）900ml为溶出介质。此介质是参照USP24版中洛伐他汀片的溶 出介质，将十二烷基硫酸钠的浓度由2%降为0.5%。 取本品，以900ml的0.5%十二烷基硫酸钠溶液的磷酸盐缓冲液为介质，按 转篮法，分别在50转/分、75转/分、100转/分下进行溶出曲线试验，结果见表 4，溶出曲线见附图24。 4 (%n=6) 转速\时间 5’ 10’ 20’ 30’ 45’ 60’ 50rpm 1.80 8.19 32.3 58.2 79.7 86.0 75rpm 2.16 10.3 37.5 63.6 80.4 87.6 100rpm 3.65 14.9 45.6 73.2 88.5 90.9 由上述结果可见，转速增至100转/分时，30分钟时的溶出度已达70%以上，因此采用100转/分的转速，溶出曲线的拐点均为45分钟，所以取样时间定为 45分钟。 第-6-页 西药三类 复方烟酸缓释片-申报资料10 1（同有关物质检查项下） 色谱柱：ODS-C18 柱（150mm×4.6mm） 流动相：乙腈—甲醇—磷酸盐缓冲溶液（取磷酸二氢钠3.45g，加水900ml 溶解，用10%磷酸调节pH4.0，加水稀释到1000ml，混匀）（5：1：3） 检测波长：238nm 柱温：30? 进样量：20,l 流速：1ml/min 理论板数按洛伐他汀峰计算，不低于2000。 溶剂：甲醇--醋酸钠缓冲溶液（取冰醋酸3.0ml，置烧杯中，加水900ml， 加20%氢氧化钠调节pH值4.0，用水稀释到1000ml，混匀）（80：20）。 2 取溶出液，经45μ微孔滤膜过滤，取续滤液备用。另精密称取洛伐他汀对 照品约20mg，置100ml量瓶中，加适量溶剂超声溶解并稀释至刻度，摇匀，精 密量取5ml，置50ml的量瓶中，用溶剂稀释至刻度，作为对照品溶液。取上述 两种溶液各20μl注入色谱仪，记录峰面积，以外标法计算溶出度，即得。 分别取溶出介质及洛伐他汀对照品溶液20μl注入色谱仪，记录色谱图， 见附图25、26。从图中可看出，溶出介质中有杂质峰，但不影响洛伐他汀的测 定。 取溶出液，分别在0、1、2、4、8小时分别注入色谱仪，分别记录峰面积， 结果见表5。结果表明，溶出溶液在8小时内测定，变化小于2%，说明溶液稳定。 5 时间（小时） 峰面积 变化率（%） 0 1255437 ---- 1 1253470 -0.16 2 1255605 0.01 第-7-页 西药三类 复方烟酸缓释片-申报资料10 4 1249341 -0.49 8 1247752 -0.61 分别精密称取洛伐他汀对照品11mg、18mg、22mg分别置100ml的量瓶中，分别加入处方量的烟酸及其他辅料，加80ml的甲醇超声溶解20分钟，加醋酸钠缓冲液20ml继续超声5分钟，取出放冷，用溶剂稀释至刻度，摇匀。精密量 取5ml置50ml量瓶中，用溶出介质稀释至刻度，摇匀，过滤，取20μl注入色谱仪，按上述测定法下测定，计算溶出回收率，结果见表6。结果表明，高、中、低三种浓度的回收率均符合规定。 6 加入量（mg） 测得量（mg） 回收率（%） 平均回收率（%） RSD（%） 11.81 11.76 99.6 低11.60 11.63 100.3 100.0 0.50 11.66 11.60 99.5 18.32 18.25 99.6 中17.89 17.92 100.2 100.5 0.70 18.12 17.96 99.1 21.88 21.66 99.0 高21.91 21.72 99.2 99.0 0.16 22.11 21.85 98.8 取本品，照溶出度测定法(《中国药典2000年版（二部）》附录XC第一法)测定，以0.5%十二烷基硫酸钠溶液的磷酸盐缓冲液为溶出介质，转速为每分钟 100转，依法操作，经5、10、20、30、45、60分钟时，分别取溶液5ml，用0.45,m滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液，同时补充相同体积、温度的溶出 介质；精密量取供试品溶液和按上述方法配制的对照品溶液各20,l，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算溶出度。 以时间为横坐标，累积溶出度为纵坐标，绘制溶出曲线，见图27、28、29， 第-8-页 西药三类 复方烟酸缓释片-申报资料10 结果见表7。 样品批号：030301、030302、030303。 样品批号 片号 5min 10min 20min 30min 45min 60min 1 4.37 15.6 46.1 73.6 87.8 93.0 2 4.20 14.0 41.6 68.6 84.3 92.2 3 3.36 14.8 43.6 70.2 85.9 89.2 4 4.06 17.9 45.7 72.3 87.5 91.0 030301 5 3.70 13.6 42.4 73.5 90.3 91.9 6 5.82 15.2 43.8 72.7 86.1 90.4 均值 4.25 15.2 43.9 71.8 87.0 91.3 RSD% 20.0 9.9 4.0 2.8 2.4 1.5 1 4.47 14.8 42.4 73.2 88.9 91.1 2 5.59 16.8 44.1 69.5 84.9 88.0 3 4.07 17.9 45.8 74.9 89.9 92.5 4 3.70 14.3 45.4 72.3 87.0 91.0 030302 5 5.34 15.5 42.2 71.5 87.1 90.8 6 3.81 15.6 41.3 72.5 86.3 91.2 均值 4.50 15.8 43.6 72.3 87.4 90.8 RSD% 17.8 8.4 4.2 2.5 2.1 1.6 1 5.50 14.4 43.0 70.6 85.7 91.0 2 4.80 13.9 45.0 69.9 86.0 90.3 3 5.04 16.5 50.1 75.1 90.3 91.8 4 5.39 17.1 48.8 73.4 90.3 92.3 030303 5 4.15 16.6 45.6 72.6 88.5 90.3 6 3.80 15.3 45.0 69.7 86.4 91.4 均值 4.78 15.6 46.2 71.9 87.9 91.2 RSD% 14.2 8.3 5.8 3.0 2.4 0.9 由结果可见，本品45分钟时溶出均一性较好，三批样品的溶出曲线相似， 第-9-页 西药三类 复方烟酸缓释片-申报资料10 说明工艺较稳定。 测定法 取本品，照溶出度测定法(中国药典2000年版（二部）附录X C第一法)测定，以0.5%十二烷基硫酸钠溶液的磷酸盐缓冲液为溶出介质，转速为 每分钟100转，依法操作，经45分钟，取溶液适量，用0.45,m滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液，按上述测定法测定。结果见表8。 8 1 2 3 4 5 6 均值 RSD％ 030301 85.4 90.8 87.8 86.2 86.8 89.0 87.6 2.3 030302 89.4 85.6 90.4 89.8 85.4 88.3 88.2 2.5 030303 90.6 88.6 86.1 85.3 89.4 88.1 88.0 2.3 此项检查是测定本品中烟酸的释放度水平。 测定方法的确定 本品为含烟酸500mg、洛伐他汀20mg的片剂，根据烟酸水溶液在262nm处有最大吸收峰，且洛伐他汀水溶液在262nm处无吸收，所以考虑选用紫外分 光光度法测定烟酸释放度。 释放度条件的确定： （1）释放度介质的选择依据 美国FDA资料中显示，烟酸缓释片及Advicor片均以水为介质考察烟酸释 放度，采用篮法，100转/分，故确定烟酸释放度测定采用中国药典2000版二部附录XD第一法，用溶出度测定法第一法装置，以900ml水为溶剂。 （2）转速及取样时间的选择 采用中国药典2000版二部附录XC第一法装置，以900ml水为溶剂，转速分别选择75和100转/分钟试验，记录1、3、6、9、12、16、20和24小时溶出量，绘制溶出曲线（见附图30）进行转速和取样时间的选择，结果见表9、 第-10-页 西药三类 复方烟酸缓释片-申报资料10 表10。 9 75/ 取样时间 1 3 6 9 12 16 20 24 （小时） 释放度（%） 7.1 20.0 36.9 49.8 62.1 73.4 84.3 91.6 10 100/ 取样时间 1 3 6 9 12 16 20 24 （小时） 释放度（%） 7.9 22.4 38.1 51.9 63.1 76.9 87.6 97.6 试验结果显示转速为100转/分钟时，复方烟酸缓释片烟酸释放度较好，而 75转/分溶出较慢，故选择100转/分更为合理。转速为100转/分钟时在3、9、20小时释放度分别为22.4%、51.9%和87.6%，故取样时间定为3、9、20小时。 综合以上实验结果，最终的烟酸释放度测定条件采用释放度测定法（中国 药典2000版二部附录XD第一法，用溶出度测定法第一法装置），以900ml水为溶剂，转速为每分钟100转，依法操作，分别于3、9、20小时取样，溶出量应分别为10%~30%、40%~60%和75%以上，均应符合规定。 专属性实验 按照烟酸释放度测定方法，称取约1片量的辅料和洛伐他汀，配制成相同 浓度的辅料溶液，在190～420nm范围进行紫外扫描，与烟酸对照品溶液的UV图相比较，见附图31、32。结果表明辅料及洛他汀在262nm处无吸收，对主药的测定无干扰。 回收率实验 精密称取烟酸对照品20mg，置100ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度， 摇匀；精密量取该液5ml，置50ml容量瓶中，用水稀释至刻度，在262nm处测吸收度。 精密称取约20mg烟酸，置于100ml容量瓶中，再按处方量加入相应辅料 和洛伐他汀，加入5ml乙醇，振摇，加水定容，超声15分钟，滤过，精密量取 续滤液5ml，置50ml容量瓶中，加水，定容，混匀，在262nm的波长处测吸收 第-11-页 西药三类 复方烟酸缓释片-申报资料10 度，共做平行样品3次。 分别取10mg和16mg烟酸，依上法操作。测定结果见表11。 11 加入量（mg） 测得量（mg） 回收率（%） 平均回收率（%） RSD（%） 10.38 10.35 99.7 低9.85 9.87 100.2 99.9 0.26 10.19 10.17 99.8 16.28 16.25 99.8 中15.85 15.87 100.1 100.0 0.21 16.37 16.40 100.2 20.18 20.19 100.0 高20.29 20.25 99.8 100.0 0.25 19.88 19.94 100.3 测定液的稳定性考察： 将测定溶液放置在室温自然条件下，从0小时起，在262nm波长于不同放置时间测定测吸收度，测定至30小时，结果见表12。 12 时间（hr） 0 4 8 12 16 20 24 30 吸收度 0.6885 0.6880 0.6884 0.6893 0.6877 0.6880 0.6887 0.6875 平均值=0.6883，RSD=0.08% 结果表明：测定液在30小时内基本稳定。 线性试验 精密称取烟酸对照品约20mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释到刻度， 摇匀，分别精密量取上述溶液2、3、4、5、6ml置50ml容量瓶中，加水稀释到 刻度，摇匀，于262nm处测定吸收度A。以样品浓度C为横坐标，A为纵坐标，绘制曲线，见附图33。结果见表13。 13 C（μg/ml） 3.952 7.904 11.856 15.808 19.76 23.712 A 0.1191 0.2523 0.3928 0.5398 0.6793 0.8195 第-12-页 西药三类 复方烟酸缓释片-申报资料10 回归方程 A = 0.0356 C + 0.0259 相关系数r = 0.9999 烟酸释放度测定方法： 根据以上研究，确定烟酸释放度测定方法为： 取本品，照释放度测定法（中国药典2000版二部附录XD第一法），用溶出度测定法第一法装置，以900ml水为溶剂，转速为每分钟100转，依法操作，在3小时、9小时和20小时分别取溶液5ml，滤过，并即时在操作容器中补充 水5ml，精密量取续滤液2ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，作为供试品 溶液；另称取烟酸对照品适量，用水溶解并稀释成每1ml中约含20μg的溶液。取上述两种溶液，照分光光度法（中国药典2000版二部附录IV A），在262nm的波长处分别测定吸收度，计算出每片的烟酸释放量。本品每片在3小时、9小时和20小时的烟酸释放量应分别相应为标示量的10%~30%、40%~60%和75%以上，应符合规定。 烟酸释放度测定： 按照337项下方法，测定了三批样品的烟酸释放度。结果见表14。 14 释放度（%） 时间 平均RSD批号 （%） （小时） 值（%） 1 2 3 4 5 6 3 21.4 22.7 21.1 23.3 22.0 22.0 22.1 3.7 030301 6 51.3 49.7 53.4 51.3 52.9 52.7 51.9 2.6 9 86.8 89.2 87.8 91.0 89.7 89.4 89.0 1.7 3 22.3 22.7 21.2 23.5 21.9 22.1 22.3 3.5 030302 6 51.0 52.5 49.5 50.8 52.2 52.3 51.4 2.3 9 86.6 88.6 88.1 90.3 89.2 88.8 88.6 1.4 3 22.7 22.5 20.5 21.5 21.8 22.0 21.8 3.6 030303 6 52.9 52.9 49.8 51.2 52.9 52.6 52.1 2.5 9 86.2 88.3 86.6 88.7 88.8 88.3 87.8 1.3 第-13-页 西药三类 复方烟酸缓释片-申报资料10 烟酸释放度均一性实验 照烟酸释放度测定方法分别对三批片剂进行释放曲线测定，取样时间分别 为1小时、3小时、6小时、9小时、12小时、16小时、20小时和24小时，考察每批片剂6片之间烟酸释放度的均一性，释放曲线见附图34~附图36，结果见表15。 15 释放度（%） 时间平均值RSD批号 （%） （hr） （%） 1 2 3 4 5 6 7.2 7.8 7.4 8.2 8.5 8.7 8.0 7.6 1 3 22.2 22.5 21.2 21.5 23.0 24.8 22.5 5.7 6 36.7 37.4 37.6 35.8 39.3 41.1 38.0 5.0 9 50.3 51.1 51.3 49.5 53.0 54.8 51.7 3.7 030301 12 62.2 62.5 61.2 61.5 63.0 67.2 62.9 3.5 16 75.2 74.8 77.8 75.8 79.6 78.4 76.9 2.5 20 84.6 86.4 88.6 85.8 90.4 89.2 87.5 2.6 24 94.8 95.7 98.8 95.6 100.0 97.4 97.1 2.1 1 7.5 8.1 6.8 6.9 8.1 8.2 7.6 8.3 3 22.8 20.5 21.4 21.8 23.1 24.8 22.4 6.7 6 36.5 38.2 35.4 36.3 38.5 39.2 37.4 4.0 9 50.1 51.9 49.1 50.0 52.2 52.9 51.0 2.9 030302 12 62.8 60.5 61.4 61.8 63.1 64.4 62.3 2.2 16 75.1 75.0 77.0 75.0 78.7 77.3 76.4 2.0 20 84.4 86.7 87.8 85.7 90.6 86.1 86.9 2.5 24 93.2 95.4 98.0 95.2 99.2 95.6 96.1 2.2 1 7.6 6.9 6.9 6.9 7.7 8.2 7.4 7.5 3 23.1 21.9 20.6 20.9 22.6 24.8 22.3 6.9 6 36.8 38.8 38.3 36.4 40.0 41.6 38.7 5.1 030303 9 50.4 52.5 52.0 50.1 53.7 55.3 52.3 3.8 12 63.1 61.9 60.6 60.9 62.6 63.9 62.2 2.1 16 74.2 75.5 78.3 75.8 80.0 78.6 77.1 2.9 第-14-页 西药三类 复方烟酸缓释片-申报资料10 20 83.3 87.0 89.1 85.0 91.3 88.2 87.3 3.3 24 94.4 95.6 98.1 95.3 99.6 96.8 96.6 2.0 结果表明：每批片剂6片之间的烟酸释放度均一性较好。 由于本品中洛伐他汀的含量小于每片重量的5%，所以根据规定，应进行洛 伐他汀含量均匀度的检查。取本品10片，按中国药典2000年版二部附录X E含量均匀度检查法进行检查。 取本品一片，置研钵中研成细粉（小心避免损失），将细粉转移至100ml量瓶中，用80ml的甲醇分次洗涤研钵，洗液并入量瓶中，超声溶解20分钟，加入20ml pH4.0的醋酸钠缓冲液，继续超声至溶液均匀，冷至室温，加甲醇-醋酸钠缓冲液（8：2）稀释至刻度，摇匀。精密取5ml至50ml量瓶中，加甲醇-醋酸钠缓冲液（8：2）稀释至刻度，摇匀，经0.45μm的滤膜过滤，取续滤液 作为供试品溶液，照洛伐他汀含量测定项下的方法测定，计算每片含量。测定 结果见表16。三批样品的A+1.80S均小于15，符合规定。 批 号 030301 030302 030303 1 97.47 101.48 97.64 2 101.26 98.49 104.64 3 98.67 99.81 101.88 4 103.41 102.15 102.18 5 102.31 95.86 103.40 含量 （%） 6 97.82 97.04 99.48 7 101.45 103.80 104.66 8 97.72 96.88 97.51 9 105.44 106.05 99.40 10 98.34 98.75 96.40 平均值 100.4 100.0 100.7 A 0.4 0 0.7 S 2.8 3.3 3.0 A+1.80S 5.4 5.9 6.1 第-15-页 西药三类 复方烟酸缓释片-申报资料10 由于上述均匀度检查中只检查了洛伐他汀，所以仍需检查重量差异。按中 国药典2000年版二部附录IA项下检验，取本品20片，精密称定总重量，求得 平均片重后，再分别精密称定每片重量。每片重量与平均片重相比较，超出重 量差异限度（5%）的药片不得多于2片，并不得有一片超出限度1倍。测定结果见表17，三批样品均符合规定。 批 号 030301 030302 030303 平均片重（g） 0.7751 0.7785 0.7773 最低片重（g） 0.7654 0.7684 0.7675 最高片重（g） 0.7867 0.7894 0.7844 0.7363～ 0.7396～ 0.7384～ 限度范围（g） 0.8138 0.8174 0.8162 结论 符合规定 符合规定 符合规定 (同有关物质检查项下) 色谱柱：迪马ODS-C18，5μ,4.6×150mm 流动相：乙腈—甲醇—磷酸盐缓冲溶液（取磷酸二氢钠3.45g，加水900ml溶解，用10%磷酸调节pH4.0，加水稀释到1000ml，混匀）（5：1：3） 流速：1.0ml/min 柱温：30? 检测波长：238nm 理论塔板数按洛伐他汀峰计算应不低于2000。 溶剂：甲醇--醋酸钠缓冲溶液（取冰醋酸3.0ml，置烧杯中，加水900ml， 加20%氢氧化钠调节pH值4.0，用水稀释到1000ml，混匀）（80：20）。 取本品5片，置研钵中小心研细，将细粉转移至500ml量瓶中，用100ml 第-16-页 西药三类 复方烟酸缓释片-申报资料10 甲醇分次洗涤研钵，洗液并入上述量瓶中，加入300ml甲醇，超声溶解20分钟，加醋酸钠缓冲溶液100ml继续超声至溶液均匀，放冷，加溶剂稀释至刻度，摇 匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，3000转/分的转速离心5分钟，取上清液20μl注入色谱仪；另取洛伐他汀对照品20mg,精密称定，置100ml量瓶中，加适量溶剂超声溶解后稀释至刻度，摇匀，精密量 取5ml置50ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，同法测定，按外标法以峰面 积计算供试品中洛伐他汀的含量。 取对照品溶液，连续进样5次，记录洛伐他汀峰面积，结果见表18。RSD小于1.0%，说明进样的精密度较高。 No. 峰面积 平均 RSD% 1 1314823 2 1310790 3 1314119 1312058 0.18 4 1309382 5 1311177 取本品30片，按上述测定项下操作，每次5片，测定6次，计算标示含量，试验结果见表19。RSD小于2.0%，说明本方法测定重复性好。 No. 标示含量（%） 平均（%） RSD% 1 100.65 2 100.55 3 101.69 100.4 1.0 4 99.70 5 98.70 6 101.07 第-17-页 西药三类 复方烟酸缓释片-申报资料10 分别精密称取洛伐他汀对照品16mg、20mg、24mg分别置100ml的量瓶中，分别加入处方量的烟酸及其他辅料，加80ml的甲醇超声20分钟，加醋酸钠缓冲溶液20ml继续超声至溶液均匀，放冷，用溶剂稀释至刻度，摇匀。精密量取 5ml置50ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，3000转/分的转速离心5分钟，取上清液20μl注入色谱仪，按上述测定法下测定，计算回收率，结果见表20。结果表明，高、中、低三种浓度的回收率均符合规定。 加入量(mg) 测得量(mg) 回收率(%) 平均值（%） RSD（%） 16.35 16.48 100.8 80% 16.19 16.28 100.6 100.1 1.0 16.66 16.50 99.0 19.52 19.74 101.1 100% 19.89 19.68 98.9 99.6 1.3 19.68 19.45 98.8 25.11 25.02 99.6 120% 25.04 25.09 100.2 99.6 0.65 24.86 24.58 98.9 回收试验表明：该方法准确可靠，误差在允许的范围内。 取洛伐他汀对照品适量，精密称定后加甲醇-醋酸钠缓冲液（8：2）制成系列浓度的溶液，分别精密量取20μl，注入液相色谱仪，量取峰面积。结果见 表21。标准曲线见附图37。 浓度（μg/ml） 色谱峰面积 11.976 787912 15.968 1062469 19.96 1308222 23.952 1557868 第-18-页 西药三类 复方烟酸缓释片-申报资料10 27.944 1809888 31.936 2071960 4用峰面积(A)对浓度(C)作回归直线，得方程：A=6.379×10C+32574 r=0.9999，因此，浓度在12～32μg/ml之间有良好的线性关系。 取洛伐他汀对照品溶液，在不同的时间进样测定，结果见表22。 时间（小时） 0 1 2 4 8 色谱峰面积 1342179 1341907 1341278 1334488 1339462 变化率（%） ---- -0.02 -0.067 -0.57 -0.20 变化率小于?2.0%，说明样品溶液稳定性好。 分别对本品三个批号进行含量测定，结果见表23： 23 批号 标示含量（%） 平均值(%) RSD(%) 030301 100.45 100.05 102.37 101.0 1.2 030302 98.87 99.86 101.71 100.2 1.4 030303 101.79 99.45 100.49 100.6 1.2 精密量取上述洛伐他汀含量测定中离心后的上清液2ml，置50ml量瓶中，加甲醇-醋酸钠缓冲液（8：2）稀释至刻度，摇匀，照分光光度法（中国药典 2000年版二部附录?A），在262nm的波长处测定吸收度；另取烟酸对照品20mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇-醋酸钠缓冲液（8：2）超声溶解并稀释至 刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加甲醇-醋酸钠缓冲液（8：2）稀释至刻度，同法测定，按外标法计算供试品中烟酸（CHNO）的含量。 652 第-19-页 西药三类 复方烟酸缓释片-申报资料10 取按本品处配制的仅不含烟酸的细粉适量，按上法配制溶液，在190～420nm范围进行紫外扫描，与烟酸对照品溶液的UV图相比较，见附图38、39。结果表明辅料及洛他汀在262nm处无吸收，对烟酸的测定无干扰。说明本法测定烟酸专属性强。 取烟酸对照品，精密称定，用甲醇-醋酸钠缓冲液（8：2）溶解并精密稀释成一系列浓度的溶液，在262nm波长处测定吸收值，以浓度为横坐标，吸收值 为纵坐标，作线性回归，见附图40，测定结果见表24。 24 μg/ml 12.348 16.464 20.58 24.696 28.812 A 0.3036 0.4008 0.4975 0.5924 0.6896 线性方程：A= 0.02341C+0.01498，相关系数r=1.000 取烟酸对照品溶液，分别在0、1、2、4、8小时于262nm波长处测定吸收值，并计算变化率，测定结果见表25。 25 时间（小时） 0 1 2 4 8 吸收值A 0.4862 0.4870 0.4845 0.4847 0.4836 变化率（%） --- 0.16 -0.35 -0.31 -0.53 变化率小于?2.0%，说明样品溶液稳定性好。 分别精密称取烟酸原料0.4g、0.5g、0.6g，并加入处方量的洛伐他汀及其它 辅料，置100ml量瓶中，按上述测定法配制供试品溶液，并配制烟酸对照品溶 液，分别测定其在262nm波长处的吸收值，计算烟酸测得量及回收率，测定结 果见表26。 第-20-页 西药三类 复方烟酸缓释片-申报资料10 加入量(g) 测得量(g) 回收率(%) 平均值（%） RSD（%） 0.4038 0.4046 100.2 低 0.4043 0.4018 99.4 99.7 0.43 0.4009 0.3995 99.7 0.5008 0.4999 99.8 中 0.4993 0.4972 99.6 99.8 0.26 0.5020 0.5025 100.1 0.6006 0.6005 100.0 高 0.6057 0.6069 100.2 99.9 0.28 0.6033 0.6011 99.6 测定结果表明，本品烟酸的回收率均在98.0%~102.0%，准确度高。 取本品，按上述测定法项下测定，每次5片，测定6次，计算烟酸的标示 百分含量，结果见表27。 27 序号 1 2 3 4 5 6 99.46 100.04 100.36 100.54 99.41 98.89 含量(%) 平均值(%) 99.8 RSD(%) 0.64 结果表明，6份测定结果的RSD值小于2%，说明此法测定的重复性好。 取本品三批，按上述测定法测定，结果见表28。 28 n=3 批号 标示含量（%） 平均值(%) RSD(%) 030301 99.5 100.3 99.4 99.7 0.49 030302 100.7 100.1 99.3 100.0 0.71 030303 99.0 99.7 99.9 99.5 0.47 第-21-页 西药三类 复方烟酸缓释片-申报资料10 第-22-页 西药三类 复方烟酸缓释片-申报资料10 第-23-页