GB 5009.86-2016 食品安全国家标准 食品中抗坏血酸的测定

中华人民共和国国家 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 GB500986—2016.食品安全国家标准食品中抗坏血酸的测定2016-08-31发布2017-03-01实施中华人民共和国发布国家卫生和计划生育委员会GB500986—2016.前言本标准代替蔬菜水果及其制品中总抗坏血酸的测定荧光法和二硝基GB/T5009.86—2003《、(2,4-苯肼法食品中还原型抗坏血酸的测定和水果蔬菜维生素)》、GB/T5009.159—2003《》GB6195—1986《、含量测定法二氯靛酚滴定法C(2,6-)》。本标准与相比主要变化如下GB/T5009.86—2003,:标准名称修改为食品安全国家标准食品中抗坏血酸的测定———“”;扩大了方法的适用范围———;增加了高效液相色谱法及相关方法的定量限———;删除了二硝基苯肼法———2,4-;增加了二氯靛酚滴定法———2,6-;按照对原标准的结构进行了修改———GB/T20001.4—2015。ⅠGB500986—2016.食品安全国家标准食品中抗坏血酸的测定1范围本标准规定了高效液相色谱法荧光法二氯靛酚滴定法测定食品中抗坏血酸的方法、、2,6-。本标准第一法适用于乳粉谷物蔬菜水果及其制品肉制品维生素类补充剂果冻胶基糖果八、、、、、、、、宝粥葡萄酒中的抗坏血酸抗坏血酸和抗坏血酸总量的测定第二法适用于乳、L(+)-、D(-)-L(+)-。粉蔬菜水果及其制品中抗坏血酸总量的测定第三法适用于水果蔬菜及其制品中抗、、L(+)-。、L(+)-坏血酸的测定。2术语和定义21抗坏血酸一种具有抗氧化性质的有机化合物又称为维生素是人体必需的营养素之一.:。“C”,。22抗坏血酸左式右旋光抗坏血酸具有强还原性对人体具有生物活性.L(+)-:。,。23抗坏血酸又称异抗坏血酸具有强还原性但对人体基本无生物活性.D(-)-:。,。24脱氢抗坏血酸抗坏血酸极易被氧化为脱氢抗坏血酸脱氢抗坏血酸.L(+)-:L(+)-L(+)-,L(+)-亦可被还原为抗坏血酸通常称为脱氢抗坏血酸L(+)-。。25抗坏血酸总量将试样中脱氢抗坏血酸还原成的抗坏血酸或将试样中.L(+)-:L(+)-L(+)-抗坏血酸氧化成的脱氢抗坏血酸后测得的抗坏血酸总量L(+)-L(+)-L(+)-。第一法高效液相色谱法3原理试样中的抗坏血酸用偏磷酸溶解超声提取后以离子对试剂为流动相经反相色谱柱分离其中,,,抗坏血酸和抗坏血酸直接用配有紫外检测器的液相色谱仪波长测定试样中L(+)-D(-)-(245nm);的脱氢抗坏血酸经半胱氨酸溶液进行还原后用紫外检测器波长测定抗坏L(+)-L-,(245nm)L(+)-血酸总量或减去原样品中测得的抗坏血酸含量而获得脱氢抗坏血酸的含量以色谱峰,L(+)-L(+)-。的保留时间定性外标法定量,。4试剂和材料除非另有说明本方法所用试剂均为分析纯水为规定的一级水,,GB/T6682。41试剂.411偏磷酸n含量以计..(HPO3):(HPO3)≥38%。412磷酸三钠..(Na3PO4·12H2O)。413磷酸二氢钾..(KH2PO4)。1GB500986—2016.414磷酸..(H3PO4):85%。415半胱氨酸优级纯..L-(C3H7NO2S):。416十六烷基三甲基溴化铵色谱纯..(C19H42BrN):。417甲醇色谱纯..(CH3OH):。42试剂配制.421偏磷酸溶液称取精确至偏磷酸溶于水并稀释至此溶液保..(200g/L):200g(0.1g)(4.1.1),1L,存于的环境下可保存一个月4℃。422偏磷酸溶液量取偏磷酸溶液用水稀释至..(20g/L):50mL200g/L,500mL。423磷酸三钠溶液称取精确至磷酸三钠溶于水并稀释至..(100g/L):100g(0.1g),1L。424半胱氨酸溶液称取半胱氨酸溶于水并稀释至临用时配制..L-(40g/L):4gL-,100mL。。43标准品.431抗坏血酸标准品纯度..L(+)-(C6H8O6):≥99%。432抗坏血酸异抗坏血酸标准品纯度..D(-)-()(C6H8O6):≥99%。44标准溶液配制.441抗坏血酸标准贮备溶液准确称取抗坏血酸标准品精确至..L(+)-(1.000mg/mL):L(+)-0.01g(用的偏磷酸溶液定容至该贮备液在避光条件下可保存一周0.01mg),20g/L10mL。2℃~8℃。442抗坏血酸标准贮备溶液准确称取抗坏血酸标准品精确..D(-)-(1.000mg/mL):D(-)-0.01g(至用的偏磷酸溶液定容至该贮备液在避光条件下可保存一周0.01mg),20g/L10mL。2℃~8℃。443抗坏血酸混合标准系列工作液分别吸取抗坏血酸和抗坏血酸标准贮备液..:L(+)-D(-)-0mL,用的偏磷酸溶液定容至标准系列工作液0.05mL,0.50mL,1.0mL,2.5mL,5.0mL,20g/L100mL。中抗坏血酸和抗坏血酸的浓度分别为L(+)-D(-)-0μg/mL、0.5μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、临用时配制25.0μg/mL、50.0μg/mL。。5仪器和设备51液相色谱仪配有二极管阵列检测器或紫外检测器.:。52计精度为.pH:0.01。53天平感量为.:0.1g、1mg、0.01mg。54超声波清洗器.。55离心机转速.:≥4000r/min。56均质机.。57滤膜水相膜.:0.45μm。58振荡器.。6分析步骤整个检测过程尽可能在避光条件下进行。61试样制备.611液体或固体粉末样品混合均匀后应立即用于检测..:,。2GB500986—2016.612水果蔬菜及其制品或其他固体样品取左右样品加入等质量的偏磷酸溶液经均..、:100g20g/L,质机均质并混合均匀后应立即测定,。62试样溶液的制备.称取相对于样品约精确至混合均匀的固体试样或匀浆试样或吸取0.5g~2g(0.001g),2mL~液体试样使所取试样含抗坏血酸约于烧杯中用的偏10mL[L(+)-0.03mg~6mg]50mL,20g/L磷酸溶液将试样转移至容量瓶中震摇溶解并定容摇匀全部转移至离心管(4.2.2)50mL,。,50mL中超声提取后于离心取上清液过水相滤膜滤液待测由此试液,5min,4000r/min5min,0.45μm,[可同时分别测定试样中抗坏血酸和抗坏血酸的含量L(+)-D(-)-]。63试样溶液的还原.准确吸取上述离心后的上清液于离心管中加入的半胱氨酸溶液20mL50mL,10mL40g/LL-用磷酸三钠溶液调节至以次振荡再用磷酸调节(4.2.4),100g/LpH7.0~7.2,200/min5min。pH至用水将试液全部转移至容量瓶中并定容至刻度混匀后取此试液过水相2.5~2.8,50mL,。0.45μm滤膜后待测由此试液可测定试样中包括脱氢型的抗坏血酸总量[L(+)-]。若试样含有增稠剂可准确吸取经半胱氨酸溶液还原的试液再准确加入甲醇混,4mLL-,1mL,匀后过滤膜后待测0.45μm。64仪器参考条件.641色谱柱柱柱长内径粒径或同等性能的色谱柱..:C18,250mm,4.6mm,5μm,。642检测器二极管阵列检测器或紫外检测器..:。643流动相磷酸二氢钾和十六烷基三甲基溴化铵用水溶解并定容至用磷酸调..:A:6.8g0.91g,1L(至甲醇按混合过滤膜超声脱气pH2.5~2.8);B:100%。A∶B=98∶2,0.45μm,。644流速..:0.7mL/min。645检测波长..:245nm。646柱温..:25℃。647进样量..:20μL。65标准曲线制作.分别对抗坏血酸混合标准系列工作溶液进行测定以抗坏血酸或抗坏血酸标准溶,L(+)-[D(-)-]液的质量浓度为横坐标抗坏血酸或抗坏血酸的峰高或峰面积为纵坐标绘(μg/mL),L(+)-[D(-)-],制标准曲线或计算回归方程抗坏血酸抗坏血酸标准色谱图参见附录中图。L(+)-、D(-)-AA.1。66试样溶液的测定.对试样溶液进行测定根据标准曲线得到测定液中抗坏血酸或抗坏血酸的浓度,L(+)-[D(-)-](μg/mL)。67空白试验.空白试验系指除不加试样外采用完全相同的分析步骤试剂和用量进行平行操作,、,。7分析结果的表述试样中抗坏血酸或抗坏血酸的含量和抗坏血酸总量以毫克每百克表示L(+)-[D(-)-]L(+)-,3GB500986—2016.按式计算(1):c-c×VX=(10)×F×K×m×100…………………………(1)1000式中:X试样中抗坏血酸或抗坏血酸抗坏血酸总量的含量单位为毫克———L(+)-[D(-)-、L(+)-],每百克(mg/100g);c样液中抗坏血酸或抗坏血酸的质量浓度单位为微克每毫升1———L(+)-[D(-)-],(μg/mL);c样品空白液中抗坏血酸或抗坏血酸的质量浓度单位为微克每毫升0———L(+)-[D(-)-],(μg/mL);V试样的最后定容体积单位为毫升———,(mL);m实际检测试样质量单位克———,(g);换算系数由换算成的换算因子1000———(μg/mLmg/mL);F稀释倍数若使用还原步骤时即为———(6.3,2.5);K若使用中甲醇沉淀步骤时即为———6.3,1.25;换算系数由换算成的换算因子100———(mg/gmg/100g)。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示结果保留三位有效数字,。8精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。9其他固体样品取样量为时抗坏血酸和抗坏血酸的检出限均为定量限2g,L(+)-D(-)-0.5mg/100g,均为液体样品取样量为或时抗坏血酸和抗坏血酸的检出2.0mg/100g。10g(10mL),L(+)-D(-)-限均为或定量限均为或0.1mg/100g(0.1mg/100mL),0.4mg/100g(0.4mg/100mL)。第二法荧光法10原理试样中抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸后与邻苯二胺反应生成有L(+)-L(+)-,(OPDA)荧光的喹唔啉其荧光强度与抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比以此测定试(quinoxaline),L(+)-,样中抗坏血酸总量L(+)-。注脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与反应以此排除试样中荧光杂质产生的干扰:L(+)-OPDA,。11试剂和材料除非另有说明本方法所用试剂均为分析纯水为规定的三级水,,GB/T6682。111试剂.1111偏磷酸n含量以计..(HPO3):(HPO3)≥38%。1112冰乙酸浓度约为..(CH3COOH):30%。4GB500986—2016.1113硫酸浓度约为..(H2SO4):98%。1114乙酸钠..(CH3COONa)。1115硼酸..(H3BO3)。1116邻苯二胺..(C6H8N2)。1117百里酚蓝..(C27H30O5S)。1118活性炭粉..。112试剂的配制.1121偏磷酸乙酸溶液称取偏磷酸加入冰乙酸及水加温搅拌使之逐渐溶..-:15g,40mL250mL,,,解冷却后加水至于冰箱可保存,500mL。4℃7d~10d。1122硫酸溶液取硫酸小心加入水中再加水稀释至..(0.15mol/L):8.3mL,,1000mL。1123偏磷酸乙酸硫酸溶液称取偏磷酸加入冰乙酸滴加硫酸溶液至溶..--:15g,40mL,0.15mol/L解并稀释至,500mL。1124乙酸钠溶液称取乙酸钠加水至..(500g/L):500g,1000mL。1125硼酸乙酸钠溶液称取硼酸用乙酸钠溶液溶解并稀释至临用时配制..-:3g,500g/L100mL。。1126邻苯二胺溶液称取邻苯二胺用水溶解并稀释至临用时配制..(200mg/L):20mg,100mL,。1127酸性活性炭称取约活性炭粉加入盐酸加热回流..:200g(75μm~177μm),1L(1+9),1h~2h,过滤用水洗至滤液中无铁离子为止置于烘箱中干燥备用,,110℃~120℃10h,。检验铁离子方法利用普鲁士蓝反应将亚铁氰化钾与盐酸等量混合将上述洗出滤:。20g/L1%,液滴入如有铁离子则产生蓝色沉淀,。1128百里酚蓝指示剂溶液称取百里酚蓝加入氢氧化钠溶液约..(0.4mg/mL):0.1g,0.02mol/L在玻璃研钵中研磨至溶解用水稀释至变色范围等于时呈红色等10.75mL,,250mL。(:pH1.2;pH于时呈黄色大于时呈蓝色2.8;pH4)。113标准品.抗坏血酸标准品纯度L(+)-(C6H8O6):≥99%。114标准品的配制.1141抗坏血酸标准溶液称取抗坏血酸精确至用..L(+)-(1.000mg/mL):L(+)-0.05g(0.01mg),偏磷酸乙酸溶液溶解并稀释至该贮备液在避光条件下可保存一周-50mL,2℃~8℃。1142抗坏血酸标准工作液准确吸取抗坏血酸标准液用偏磷..L(+)-(100.0μg/mL):L(+)-10mL,酸乙酸溶液稀释至临用时配制-100mL,。12仪器和设备荧光分光光度计具有激发波长及发射波长配有比色皿:338nm420nm。1cm。13分析步骤整个检测过程应在避光条件下进行。131试液的制备.称取约精确至试样加偏磷酸乙酸溶液倒入捣碎机内打成匀浆用百里酚蓝100g(0.1g),100g-,,5GB500986—2016.指示剂测试匀浆的酸碱度如呈红色即称取适量匀浆用偏磷酸乙酸溶液稀释若呈黄色或蓝色则称。,-;,取适量匀浆用偏磷酸乙酸硫酸溶液稀释使其为匀浆的取用量根据试样中抗坏血酸的含量--,pH1.2。而定当试样液中抗坏血酸含量在之间一般称取精确至匀浆。40μg/mL~100μg/mL,20g(0.01g),用相应溶液稀释至过滤滤液备用100mL,,。132测定.1321氧化处理分别准确吸取试样滤液及抗坏血酸标准工作液于具塞锥形瓶中加..:50mL200mL,入活性炭用力振摇过滤弃去最初数毫升滤液分别收集其余全部滤液即为试样氧化液和2g,1min,,,,标准氧化液待测定,。1322分别准确吸取试样氧化液于两个容量瓶中作为试样液和试样空白液..10mL100mL,“”“”。1323分别准确吸取标准氧化液于两个容量瓶中作为标准液和标准空白液..10mL100mL,“”“”。1324于试样空白液和标准空白液中各加硼酸乙酸钠溶液混合摇动用水稀释至..“”“”5mL-,15min,在冰箱中放置取出待测100mL,4℃2h~3h,。1325于试样液和标准液中各加的乙酸钠溶液用水稀释至待测..“”“”5mL500g/L,100mL,。133标准曲线的制备.准确吸取上述标准液抗坏血酸含量分别置“”[L(+)-10μg/mL]0.5mL,1.0mL,1.5mL,2.0mL,于具塞刻度试管中用水补充至另准确吸取标准空白液于带盖刻度试10mL,2.0mL。“”2mL10mL管中在暗室迅速向各管中加入邻苯二胺溶液振摇混合在室温下反应于激发波长。5mL,,35min,发射波长处测定荧光强度以标准液系列荧光强度分别减去标准空白液荧光强338nm、420nm。“”“”度的差值为纵坐标对应的抗坏血酸含量为横坐标绘制标准曲线或计算直线回归方程,L(+)-,。134试样测定.分别准确吸取试样液和试样空白液于具塞刻度试管中在暗室迅速向各管中加2mL“”“”10mL,入邻苯二胺溶液振摇混合在室温下反应于激发波长发射波长处测定5mL,,35min,338nm、420nm荧光强度以试样液荧光强度减去试样空白液的荧光强度的差值于标准曲线上查得或回归方程计。“”“”算测定试样溶液中抗坏血酸总量L(+)-。14结果计算试样中抗坏血酸总量结果以毫克每百克表示按式计算L(+)-,,(2):c×VX=×F×100m……………………………(2)1000式中:X试样中抗坏血酸的总量单位为毫克每百克———L(+)-,(mg/100g);c由标准曲线查得或回归方程计算的进样液中抗坏血酸的质量浓度单位为微克———L(+)-,每毫升(μg/mL);V荧光反应所用试样体积单位为毫升———,(mL);m实际检测试样质量单位克———,(g);F试样溶液的稀释倍数———;换算系数100———;换算系数1000———。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示结果保留三位有效数字,。6GB500986—2016.15精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。16其他当样品取样量为时抗坏血酸总量的检出限为定量限为10g,L(+)-0.044mg/100g,0.7mg/100g。第三法26-二氯靛酚滴定法,17原理用蓝色的碱性染料二氯靛酚标准溶液对含抗坏血酸的试样酸性浸出液进行氧化还原2,6-L(+)-滴定二氯靛酚被还原为无色当到达滴定终点时多余的二氯靛酚在酸性介质中显浅红色由,2,6-,,2,6-,二氯靛酚的消耗量计算样品中抗坏血酸的含量2,6-L(+)-。18试剂和材料除非另有说明本方法所用试剂均为分析纯水为规定的三级水,,GB/T6682。181试剂.1811偏磷酸n含量以计..(HPO3):(HPO3)≥38%。1812草酸..(C2H2O4)。1813碳酸氢钠..(NaHCO3)。1814二氯靛酚二氯靛酚钠盐..2,6-(2,6-,C12H6Cl2NNaO2)。1815白陶土或高岭土对抗坏血酸无吸附性..():。182试剂的配制.1821偏磷酸溶液称取偏磷酸用水溶解并定容至..(20g/L):20g,1L。1822草酸溶液称取草酸用水溶解并定容至..(20g/L):20g,1L。1823二氯靛酚二氯靛酚钠盐溶液称取碳酸氢钠溶解在热蒸馏水中然..2,6-(2,6-):52mg200mL,后称取二氯靛酚溶解在上述碳酸氢钠溶液中冷却并用水定容至过滤至棕色瓶2,6-50mg。250mL,内于环境中保存每次使用前用标准抗坏血酸溶液标定其滴定度,4℃~8℃。,。标定方法准确吸取抗坏血酸标准溶液于锥形瓶中加入偏磷酸溶液或草酸:1mL50mL,10mL溶液摇匀用二氯靛酚溶液滴定至粉红色保持不褪色为止同时另取偏磷酸溶液或,,2,6-,15s。10mL草酸溶液做空白试验二氯靛酚溶液的滴定度按式计算。2,6-(3):c×VT=VV……………………………(3)1-0式中:T二氯靛酚溶液的滴定度即每毫升二氯靛酚溶液相当于抗坏血酸的毫克数单位为———2,6-,2,6-,毫克每毫升(mg/mL);7GB500986—2016.c抗坏血酸标准溶液的质量浓度单位为毫克每毫升———,(mg/mL);V吸取抗坏血酸标准溶液的体积单位为毫升———,(mL);V滴定抗坏血酸标准溶液所消耗二氯靛酚溶液的体积单位为毫升1———2,6-,(mL);V滴定空白所消耗二氯靛酚溶液的体积单位为毫升0———2,6-,(mL)。183标准品.抗坏血酸标准品纯度L(+)-(C6H8O6):≥99%。184标准溶液的配制.抗坏血酸标准溶液称取精确至抗坏血酸标准品L(+)-(1.000mg/mL):100mg(0.1mg)L(+)-,溶于偏磷酸溶液或草酸溶液并定容至该贮备液在避光条件下可保存一周100mL。2℃~8℃。19测定整个检测过程应在避光条件下进行。191试液制备称取具有代表性样品的可食部分放入粉碎机中加入偏磷酸溶液或草酸.:100g,,100g溶液迅速捣成匀浆准确称取匀浆样品精确至于烧杯中用偏磷酸溶液或草酸溶,。10g~40g(0.01g),液将样品转移至容量瓶并稀释至刻度摇匀后过滤若滤液有颜色可按每克样品加白100mL,,。,0.4g陶土脱色后再过滤。192滴定准确吸取滤液于锥形瓶中用标定过的二氯靛酚溶液滴定直至溶液呈.:10mL50mL,2,6-,粉红色不褪色为止同时做空白试验15s。。20结果计算试样中抗坏血酸含量按式计算L(+)-(4):V-V×T×AX=(0)×m100………………………………(4)式中:X试样中抗坏血酸含量单位为毫克每百克———L(+)-,(mg/100g);V滴定试样所消耗二氯靛酚溶液的体积单位为毫升———2,6-,(mL);V滴定空白所消耗二氯靛酚溶液的体积单位为毫升0———2,6-,(mL);T二氯靛酚溶液的滴定度即每毫升二氯靛酚溶液相当于抗坏血酸的毫克数———2,6-,2,6-(mg/mL);A稀释倍数———;m试样质量单位为克———,(g)。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示结果保留三位有效数字,。21精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值在抗坏血酸含量大于,L(+)-20mg/100g时不得超过算术平均值的在抗坏血酸含量小于或等于时不得超过算术平均2%。L(+)-20mg/100g值的5%。8GB500986—2016.附录AL+-抗坏血酸D--抗坏血酸标准色谱图()、()第一法抗坏血酸抗坏血酸标准色谱图见图L(+)-、D(-)-A.1。图A1L+-抗坏血酸D--抗坏血酸标准色谱图.()、()9