0222西洋参提取物技术要求编制说明1.261

1 西洋参提取物技术要求编制说明 本技术要求根据《中华人民共和国标准化法》、《中华人民共和国食品安全 法》、《保健食品管理办法》、GB16740-1997 保健（功能）食品通用标准及《中国 药典》等法规制定，形式体例上严格遵循 GB/T1.1-2009《标准化工作导则 第 1 部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。 （一）概况 五加科植物西洋参 Panax quinque folium L. 的干燥根。西洋参主产于美国、 加拿大; 约于 300 年前西洋参运销到中国, 被当时我国医药家首先认定为凉性 补益药, 以中药学理论为指导将西洋参应用于临床治疗阴虚内热证, 其后西洋参 逐渐成为名贵滋补药。现在我国东北也有栽培。西洋参具有补气养阴，清热生津 之功效。用于气虚阴亏，内热，咳喘痰血，虚热烦倦，消渴，口燥咽干。 2002年卫生部《关于进一步 规范 编程规范下载gsp规范下载钢格栅规范下载警徽规范下载建设厅规范下载 保健食品原料管理的通知》（卫法监发【2002】 51 号）把西洋参列入可用于保健食品原料的名单，西洋参正式作为保健食品原 料。西洋参提取物在市场上有多种规格，含总皂苷 10%～85%，只是生产企业根 据客户需要进行生产，其生产工艺差异较大，经大孔吸附树脂纯化制得的西洋参 提取物纯度较高，主要用于药品，而在保健食品中多数使用的是经 70%乙醇提取， 浓缩，干燥制得的西洋参提取物，因此本技术要求即以该工艺下生产的产品进行 研究。由于目前广泛应用于保健食品的西洋参提取物，只是生产企业根据客户需 要建立的内控标准，现无法定检验标准来统一控制其内在质量。为此，此次从安 全性检查项目、有效性检测项目等方面进行研究与考察，建立保健食品原料西洋 参提取物技术要求。 1.建立安全性检查项目：有害元素和农药残留的测定方法和限度。 采用国标 5009 系列标准规定的方法测定，分别进行方法学考察、样品测定。 其限度参考相关食品及药品标准限度规定予以确定。 2.溶剂残留量检查 按照西洋参提取物制法，未使用大孔吸附树脂，但在调研中了解到有的生产 企业为除农残，有使用大孔吸附树脂及其他溶剂的可能，因此，为确保提取物使 用安全，参照《中国药典》（2005 年版二部）残留溶剂测定法（附录Ⅷ P第二法）， 2 对大孔吸附树脂中残留物正己烷、丙酮、苯、甲苯、二甲苯、苯乙烯、二乙烯基 苯，采用顶空气相色谱法进行检测，并进行了方法学研究。 实际测定结果，均未检出各种溶剂残留物。因此，未在技术要求中列入溶剂 残留物检测项目。 3．标志性成分检测 西洋参提取物中主要有效成分为人参皂苷类成分，其中主要皂苷为 Rg1、Re,、 Rb1、Rc、Rb2、Rd、拟人参皂苷 F11 等。为有效控制西洋参提取物内在质量， 确保提取物原料质量的稳定性及可控性，分别（1）采用紫外-可见分光光度法测 定西洋参提取物中人参总皂苷的含量；（2）采用高效液相色谱法测定西洋参提取 物中所含七种有效成分-人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Re、人参皂苷 Rb1、人参皂苷 Rb2、人参皂苷 Rb3、人参皂苷 Rc、人参皂苷 Rd 含量。并对上述两种方法进行 比较，确定第二种方法即可控制保健食品原料人参提取物的内在质量，因此，在 技术要求中只采用一种方法。 4．一般检查项目 在技术要求中设立以下检查项目： （1）感官要求（色泽、滋气味、性状、杂质） （2）鉴别 （3）理化指标（水分、灰分） （4）微生物指标（菌落总数、大肠菌群、霉菌、酵母、致病菌（沙门氏菌、 志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌）。 5.特征图谱研究 为减少含量测定项目（测定七种人参皂苷含量）使用对照品种类，降低检验 成本，对特征图谱测定方法进行了研究。 实验结果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明，由于特征图谱受色谱柱品牌、长短、粒径等不同因素的影响， 在实际操作中难以通过计算各峰相对保留时间准确判断，重复性较差，因此，未 将特征图谱列入本技术要求中，仍采用 HPLC 法测定八种人参皂苷成分，以控制 西洋参提取物的内在质量，以保证使用提取物的有效性与均一性。 总体看，该项研究工作设立项目较全面，所建立的标准可有效控制西洋参提 取物原料内在质量，符合《食品安全法》对保健食品实行严格监管的要求。 3 （二）技术要求中主要技术指标的确定依据 1、名称 本品系用五加科植物西洋参 Panax quinque folium L. 的干燥根粗粉，经 70% 乙醇提取，浓缩，干燥，既得，故本品名称为西洋参提取物。 2．感官指标 根据产品的生产要求，结合产品的实际情况进行描述，能直观得体现产品的 外在质量。经对 26 批西洋参提取物样品实际观察，样品多为淡棕色至棕色细粉 状，无肉眼可见的杂质具有本品特有的气味，味微苦。 3．理化指标 3.1 薄层色谱鉴别 西洋参所含主要有效成分为皂苷类成分，含人参皂苷 Ro、Rb1、Rb2、 Rc、Rd、Re、Rg1 以及拟人参皂甙 F11，其中拟人参皂苷 F11 是西洋参特有成 分，可将其与人参相区别。根据皂苷类成分理化性质及溶解性能，对西洋参提 取物以人参皂苷成分为对照进行薄层色谱鉴别方法研究，经对不同展开条件进行 选择。结果显示，以《中国药典》（2010 年版一部）西洋参项下的薄层鉴别方法 操作，各斑点清晰、分离良好，供试品在与对照品及对照药材色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点，故将此薄层鉴别列入本技术要求，该方法省时、简便、直观。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 图 1 西洋参提取物薄层色谱鉴别图 1～3-产品 9～11,4-西洋参对照药材，5-拟人参皂苷 F11，6-人参皂苷 Rg1，7-人参皂苷 Re ；8-人参皂苷 Rb1 4 3.2 水分 按照 GB 5009.3-2010 食品中水分的测定方法，对产品进行测定及制定 限值。采用直接干燥法，限值≤5.0%。26 批样品均符合规定。 3.3 灰分 食品经灼烧后残留的无机物质为灰分，多为遗留的金属氧化物等杂质。西洋 参药用部位为根，带有泥土，如清洗不净，易带入产品中，应予以控制。 按 GB 5009.4-2010 食品中灰分的测定方法，对产品进行测定及制定限值。 取样量 2g，限值≤7.0%。 3.4 重金属及有害元素 中药中残留的重金属及有害元素问 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 ，已是中药行业十分关注的问题之一。 对于西洋参提取物这种广泛用于补益类保健食品中的原料，若重金属及有害元素 超标，长期服用势必会产生重金属及有害元素的蓄积，危害身体健康。因此，对 重金属及有害元素的控制是十分必要的。 实验采用微波消解前处理方法，参照国标 5009 系列标准规定的方法测定， 对 4种元素（铅、砷、汞、镉）分别进行方法学考察、样品测定。 部分样品采用 GB 5009.12 -2010 食品中铅的测定方法和 GB/T 5009.15 -2003 食品中镉的测定方法第一法与中国药典 2010 年版一部附录ⅨB 铅、镉测定法相 比较，其方法不同处为消解液中加入 30%过氧化氢 2~3ml 。 由于本品为植物提 取物均能消解完全，且测出结果基本一致。因此，可采用中国药典 2010 年版一 部附录ⅨB 铅、镉测定法，或 GB 5009.12 -2010 食品中铅的测定方法和 GB/T 5009.15 -2003 食品中镉的测定方法第一法，对西洋参提取物进行铅、镉检查。 采用 GB/T 5009.11 食品中总砷及无机砷的测定及 GB/T 5009.17 食品中总汞及有 机汞的测定方法，对西洋参提取物进行砷、汞检查。 选择铅、砷、汞、镉 4种重金属及有害元素进行控制，其限量值的参考依据， 主要有： （1）《食品中污染物限量》（中华人民共和国国家标准 GB 2762-2005）； （2）《保健（功能）食品通用卫生标准卫监发〖1996〗38 号》； （3）绿色食品 西洋参和西洋参（NY/T 1043-2006）（农业行业标准）； （4）地理标志产品 吉林长白山人参（GB/T 19506-2009）； （5）原产地域产品 吉林长白山人参（GB 19504-2004）； 5 （6）《中国药典》2010 年版 人参总皂苷和人参茎叶总皂苷 （7）GB2762 食品安全国家标准 食品中污染物限量（征求意见稿） 表 1 保健食品原料西洋参提取物中重金属及有害元素限值比较表 单位：mg/kg 铅 砷 汞 镉 原产地域产品 吉林长白山人参 （GB 19504-2004） 5.0 2.0 0.1 0.5 地理标志产品 吉林长白山人参 （GB/T 19506-2009） 5.0 2.0 0.1 0.5 中国药典 2010 年版 人参总皂苷 3.0 2.0 0.2 0.2 中国药典 2010 年版 人参茎叶总 皂苷 2.0 2.0 0.2 0.2 食品中污染物限量 （GB 2762-2005） 0.2（禽畜肉类） 无机砷：0.05（禽 畜肉类） 总汞：0.05肉、 蛋（去壳） 0.1（禽畜肉类） 食品安全国家标准 食品中污染 物限量（征求意见稿）（GB2762） 0.2（肉类） 0.5（肉制品） 总砷：0.05（肉 及肉制品） 总汞：0.05（肉 及肉制品） 0.1（肉及肉制 品） 绿色食品 人参和西洋参 （NY/T 1043-2006） 0.5 0.5 0.06 0.2 保健食品通用卫生标准 卫监发〖1996〗38 号 一般 0.5；一般 胶囊产品 1.5； 以藻类和茶类为 原料的固体饮料 和胶囊产品 2.0 一般 0.3；以藻 类和茶类为原料 的固体饮料和所 有胶囊产品 1.0 一般产品未规 定；以藻类和茶 类为原料的固体 饮料和所有胶囊 产品 1.0 / 拟定限值 2.0 0.3 0.1 0.1 样品实测值范围 未检出～1.0 0.03～0.08 0.004～0.09 0.005～0.02 3.5 溶剂残留量的检测 按照西洋参提取物制法，未使用大孔吸附树脂，但在调研中了解到有的生产 企业为除农残，有使用大孔吸附树脂的可能，因此，为确保西洋参提取物使用安 全，参照《中国药典》（2005 年版二部）残留溶剂测定法（附录Ⅷ P 第二法）， 对大孔吸附树脂中残留物正己烷、丙酮、苯、甲苯、二甲苯、苯乙烯、二乙烯基 6 苯，采用顶空气相色谱法进行检测，并进行了方法学研究。包括 （1）柱的选择、柱温的选择：采用确定的程序升温方法进行实验，各色谱峰 均能良好分离，且保留时间较短。 （2）提取溶剂的考察：以 40%的二甲基甲酰胺溶液既可使样品在其中良好溶 解，又可完全溶解待测残留溶剂，并可提高方法灵敏度。 （3）专属性：为进一步考察试验的合理性，精密吸取淀粉或糊精 0.5g，精 密加入 40%的二甲基甲酰胺溶液 5ml，以确定方法进行检测，结果，无与对照品 保留时间相同的色谱峰检出。 （4）检测限和定量限：逐级稀释对照品溶液，在上述色谱条件下测定各溶剂 峰的信噪比，最低检测限（S/N=3）（μg/ml）和最低定量限（S/N=10）（μg/ml）， 见下表。 表 2 最低检测限和最低定量限 溶剂 正己烷 丙酮 苯 甲苯 二甲苯 苯乙烯 检出限（μg/ml） 0.26 0.66 0.37 0.70 2.60 8.75 定量限（μg/ml） 0.77 1.97 1.12 2.33 7.80 29.15 （5）线性关系：以待测物浓度为横坐标，待测物峰面积为纵坐标，分别计算 回归方程。结果表明，7种待测组分在相应的线性范围内线性关系良好。 （6）精密度试验、稳定性试验、重复性试验、回收率试验：结果表明，确定 的方法可行。 样品测定结果及限度：依确定的方法测定样品，均未检出各种溶剂残留物， 结果表明，按照西洋参提取物生产工艺，未使用上述溶剂，因此，未在标准中列 入溶剂残留物检测项目。 3.6 有机氯农药残留量 农药的使用大大减少了食物中存在的昆虫，真菌和霉 菌，药用植物中的农药残留是在耕作过程中喷洒农药，改良土壤，在贮藏过程中 使用薰蒸剂而积聚起来的。 有机氯类农药是一类高效广谱杀虫剂，广泛用于杀灭农业害虫，曾是各国杀 虫剂中使用最广泛的一大类。由于其残留量高，毒性大，我国已对粮食、果蔬等 食品制定了残留限量标准，而有关中药材农药残留的限量标准较少。由于许多植 物性来源的保健食品原料需要长期使用，为了确保使用安全，参照 GB/T 7 5009.19-2008 食品中有机氯农药多组分残留量的测定及中国药典 2010 年版一 部附录Ⅸ Q 有机氯类农药残留量测定法等相关的要求，对西洋参提取物有机氯 类农药残留限量检查，并进行定量限及随行回收率试验，制定限值。 选择六六六、滴滴涕、五氯硝基苯进行控制，其限量值的参考依据，主要有： （1）《食品中污染物限量》（中华人民共和国国家标准 GB 2762-2005）； （2）《保健（功能）食品通用卫生标准卫监发〖1996〗38 号》； （3）绿色食品 人参和西洋参（NY/T 1043-2006）（农业行业标准）； （4）地理标志产品 吉林长白山人参（GB/T 19506-2009）； （5）原产地域产品 吉林长白山人参（GB 19504-2004）； （6）《中国药典》2010 年版 人参总皂苷和人参茎叶总皂苷 表 3 保健食品原料西洋参提取物中农药残留限量比较表（单位：mg/kg） 六六六 （mg/kg） 滴滴涕 （mg/kg） 五氯硝基苯 （mg/kg） 原产地域产品 吉林长白山人参 （GB 19504-2004） ≤0.1 ≤0.1 ≤0.1 地理标志产品 吉林长白山人参 （GB/T 19506-2009） ≤0.1 ≤0.1 ≤0.1 中国药典 2010 年版 人参总皂苷 ≤0.1 ≤1.0 ≤1.0 中国药典 2010 年版 人参茎叶总皂苷 ≤0.1 ≤1.0 ≤0.1 食品中农药最大残留量 （GB 2763-2005） 0.05～0.2 0.05～0.2 0.01～0.2 绿色食品 人参和西洋参 （NY/T 1043-2006） 不得检出 （≤0.002） 不得检出 （≤0.01） 不得检出 （≤0.01） 保健食品通用卫生标准 卫监发〖1996〗38 号 / / / 拟定限值 ≤0.05 ≤0.05 ≤0.1 实际测得结果 0.004～0.015 未检出～0.055 0.001～0.016 3.7 微生物指标检验 8 方法：GB 4789.2-2010 食品微生物学检验 菌落总数测定 GB 4789.3-2010 食品微生物学检验 大肠菌群计数 GB 4789.4-2010 食品微生物学检验 沙门氏菌检验 GB/T 4789.5-2003 食品卫生微生物学检验 志贺氏菌检验 GB 4789.10-2010 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验 GB/T 4789.11-2003 食品卫生微生物学检验 溶血性链球菌检验 GBT 4789.15-2010 食品微生物学检验 霉菌和酵母 限度确定依据：根据《保健食品通用卫生要求》（1996年7月18日卫监发〖1996〗 38 号发布）确定，西洋参提取物微生物指标。 表 4 微生物指标（《保健食品通用卫生要求》） 指 标 食 品 种 类 菌落总数 (cfu/g.mL) 大肠菌群 MPN(100g.mL) 霉菌 (cfu/g.mL) 酵母 (cfu/g.mL) 致病菌 液态食品 蛋白质含量≥1.0% 蛋白质含量＜1.0% ≤1000 ≤100 ≤40 ≤6 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 不得检出 不得检出 固体或半固体食品 蛋白质含量≥4.0% ≤30000 ≤90 ≤25 ≤25 不得检出 蛋白质含量＜4.0% ≤1000 ≤40 ≤25 ≤25 不得检出 罐头食品 符合罐头食品商业无菌要求 限度：菌落总数（cfu/g） ≤1000 大肠菌群（MPN/100g） ≤40 霉菌（cfu/g） ≤25 酵母（cfu/g） ≤25 致病菌（沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌）不得检 出。 4 标志性成分 9 西洋参含有多种生理活性成分，主要含皂苷类成分，也是生理活性最显著的 物质。对保健食品原料西洋参提取物标志性成分的测定方法的研究，采用紫外- 可见分光光度法测定西洋参提取物中人参总皂苷的含量、高效液相色谱法测定人 参提取物中所含七种有效成分-人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Re、人参皂苷 Rb1、人 参皂苷 Rb2、人参皂苷 Rb3、人参皂苷 Rc 和人参皂苷 Rd 含量。 4.1 总皂苷 紫外-可见分光光度法的含量测定研究 西洋参提取物中主要有效成分为人参皂苷类成分，采用紫外-可见分光光度法 测定西洋参提取物中人参总皂苷的含量，试验结果如下： 实 验 研 究 4.1.1 仪器、试剂与标准物质 仪器：VARIAN 50 BIO 紫外分光光度计； 试剂均为分析纯； 人参皂苷 Re（中国药品生物制品检定所提供，批号：110754-200822，供含 量测定用，纯度为 88.8%）。 4.1.2 方法考察与结果 4.1.2.1 提取方法 取本品约 1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇 50ml，称定重量， 超声处理（250w，50kHz）20 分钟，放置室温，称重，用甲醇补足减失的重量， 滤过，精密吸取续滤液 25ml，蒸干，残渣加水 20ml 溶解，置分液漏斗中，用水 饱和正丁醇提取 3 次，每次 15ml，合并正丁醇液，用氨试液 40ml 洗涤，分取正 丁醇液，蒸干，残渣加甲醇溶解并定容至 25ml 容量瓶中，摇匀，即得。 4.1.2.2 显色剂选择 参考（1）《中华人民共和国国家标准》GB/T 119506-2009，加8%香草醛无 水乙醇溶液、72%硫酸溶液显色，测定波长为544nm； （2）《中国药典》2010 年版一部人参总皂苷，加1%香草醛高氯酸试液、77% 硫酸溶液显色，测定波长为540nm； （3）《吉林省药品标准》-活力宝胶囊，加5%香草醛冰醋酸溶液、高氯酸、 冰醋酸显色，测定波长为560nm。 比较结果显示：同一样品溶液，以香草醛、硫酸显色，《中国药典》方法吸 10 收度值高于GB/T 119506-2009，更加灵敏。但实验中加入72~77%硫酸溶液后， 产生气泡，影响测定结果，且由于硫酸溶液的粘性，比色皿中易挂壁，影响下一 样品的测定。 采用%香草醛冰醋酸溶液、高氯酸、冰醋酸方法，显色灵敏，显色后测定值 稳定，故确定采用此方法测定西洋参提取物中总皂苷的含量。 4.1.2.3 回收率试验：结果显示,人参总皂苷平均回收率为 93.15%，RSD =1.74% （n=6）。 4.1.2.4 重复性试验：6 份样品测得总皂苷的含量平均值为 10.21%，RSD＝5.48 ％，n＝6。试验结果表明，本法的重现性较好。 4.1.2.5 线性关系与范围 结果表明：人参皂苷 Re 在 38.93～194.65µg 范围内， 与吸收度值呈良好的线性关系。 表 5 标准曲线结果 人参皂苷 Re（µg） 38.93 77.86 116.79 155.72 194.65 吸收度值 0.117 0.278 0.425 0.596 0.755 回归方程 Y＝0.0046X-0.0008，γ＝0.9996 4.1.2.5 样品测定及限度确定 实验结果显示，西洋参提取物中人参总皂苷含量 在 9.56%～13.85%之间，根据实际测得结果，确定本品含总皂苷（以人参皂苷 Re 计）应为 8.0%～15.0%。 表6 西洋参提取物样品测定结果 序号 批号 总皂苷含量（%） 1 090301 低 13.45 2 090302 14.88 3 090303 19.64 4 090304 13.91 5 090305 15.14 6 090306 15.01 7 090307 13.31 8 090308 20.20 9 090309 20.33 10 090310 16.42 11 11 090701 19.38 12 090702 18.72 13 080701 23.49 14 100801 18.70 15 100701 20.85 16 090301 13.94 17 090901 15.12 4.2 人参皂苷 HPLC 含量测定方法研究 为确保西洋参提取物原料质量的稳定性、专属性及可控性，采用高效液相色 谱法对西洋参提取物中所含有效成分-人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、 人参皂苷 Rb2、人参皂苷 Rb3、人参皂苷 Rc 和人参皂苷 Rd 进行含量测定方法研 究。方法学研究结果显示，该方法灵敏，精密度高，重现性好，结果准确，专属 性强，可作为该品种的内在质量控制方法。试验结果如下： 4.2.1 仪器、试剂与标准物质 Agilent 1100 高效液相色谱仪；VWD 紫外检测器；MILLI-PROA 纯水处 理器。 乙腈为色谱纯，水为高纯水，其它试剂均为分析纯。 人参皂苷 Rg1（中国药品生物制品检定所，纯度为 97.7%）； 人参皂苷 Re（中国药品生物制品检定所，纯度为 88.8%）； 人参皂苷 Rb1（中国药品生物制品检定所，纯度为 92.6%）； 人参皂苷 Rb2（中国药品生物制品检定所，供含量测定用）； 人参皂苷 Rb3（中国药品生物制品检定所，供含量测定用）； 人参皂苷 Rc（四川省维克奇生物科技有限公司，供含量测定用）； 人参皂苷 Rd（四川省维克奇生物科技有限公司，供含量测定用）； 4.2.2 方法选择及方法学研究 参考《中国药典》2010年版一部人参茎叶总皂苷和人参中多种人参皂甙含量 的测定 液相色谱-紫外检测法（GB/T 22996-2008），采用高效液相色谱法进行测 定。 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水为流动相，梯度洗脱；检测波 长为203nm。进样量5μl，柱温40℃，流速0.8ml/min。 12 色谱参考条件：检测波长：203nm；柱温：35℃。 (1)色谱柱：C18，2.6μm, 50mm×4.6mm。 流动相：乙腈为流动相 A，以水为流动相 B，按下表进行梯度洗脱； 时间（分钟） 流动相（A%） 流动相（B%） 0～15 15～20 20～35 35～40 17→19 19→30 30→33 33→17 83→81 81→70 70→67 67→83 (2)色谱柱：C18，5μm，250mm×4.6mm。 流动相：乙腈为流动相 A，以水为流动相 B，按下表进行梯度洗脱； 时间（分钟） 流动相（A%） 流动相（B%） 0～40 40～50 50～70 70～100 100～110 18→18 18→22 22→28 28→38 38→18 82→82 82→78 78→72 72→62 62→82 4.2.3 提取方法 取本品约 1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇 50ml，称定重量， 超声处理（250w，50kHz）30 分钟，放置室温，称重，用甲醇补足减失的重量， 滤过，精密吸取续滤液 25ml，蒸干，残渣加水 20ml 溶解，置分液漏斗中，用水 饱和正丁醇提取 3 次，每次 15ml，合并正丁醇液，用氨试液 40ml 洗涤，分取正 丁醇液，蒸干，残渣加甲醇溶解并定容至 25ml 容量瓶中，摇匀，即得。 4.2.4 耐用性试验：分别试验三个不同品牌的 C18 色谱柱进样，测定。结果显示， 均能将样品中各成分很好分离，以色谱柱 Kinetex-C18 (2.6μm,4.6mm×50mm)） 且出峰时间短，故选择此色谱柱进行方法学研究实验。 4.2.5 回收率试验：实验结果表明，本方法准确性良好。 表 7 回收率试验结果 13 4.2.6 重复性试验：试验结果表明，本法的重现性良好。 表 8 重复性试验结果(%) 4.2.7 线性关系与范围 表 9 标准曲线测定结果 人参皂苷 Rg1（µg） 0.1384 0.2769 0.5538 1.1076 1.6614 2.7690 峰面积 Y 48.64 91.38 181.71 360.58 537.65 897.13 回归方程 Y＝322.7X+2.8798，γ＝1.0000 人参皂苷 Re（µg） 0.1090 0.2181 0.4362 0.8724 1.3086 2.1810 峰面积 Y 56.30 110.99 219.72 438.77 658.53 1080.14 回归方程 Y＝495.15X+4.4389，γ＝0.9999 人参皂苷 Rb1（µg） 0.0950 0.1900 0.3800 0.7600 1.1400 1.9000 峰面积 Y 39.90 77.37 155.77 314.96 479.13 792.70 回归方程 Y＝418.59X-1.5285，γ＝0.9999 成分 回收率% RSD%（n=6） 人参皂苷 Rg1 99.15 0.75 人参皂苷 Re 94.86 1.29 人参皂苷 Rb1 93.80 1.16 人参皂苷 Rb2 92.04 1.75 人参皂苷 Rb3 91.01 3.05 人参皂苷 Rc 95.10 1.22 人参皂苷 Rd 93.94 2.53 序号 1 2 3 4 5 6 平均值% RSD% 人参皂苷 Rg1 0.9300 0.9245 0.9314 0.9403 0.9274 0.9199 0.9289 0.75 人参皂苷 Re 1.0846 1.0691 1.0959 1.1090 1.0851 1.0773 1.0868 1.29 人参皂苷 Rb1 2.7851 2.8053 2.8636 2.8226 2.7965 2.7710 2.8074 1.16 人参皂苷 Rb2 1.7549 1.7802 1.8216 1.7702 1.7533 1.8223 1.7838 1.75 人参皂苷 Rb3 0.2807 0.2850 0.3018 0.2851 0.2945 0.3005 0.2913 3.05 人参皂苷 Rc 3.1455 3.1594 3.2108 3.1700 3.1001 3.1239 3.1516 1.22 人参皂苷 Rd 1.3744 1.3686 1.4412 1.3965 1.3478 1.3503 1.3798 2.53 14 人参皂苷 Rb2（µg） 0.0927 0.1854 0.3708 0.7416 1.1124 1.8540 峰面积 Y 42.04 76.77 143.72 295.05 441.24 727.68 回归方程 Y＝391.04X+3.7952，γ＝0.9999 人参皂苷 Rb3（µg） 0.1088 0.2176 0.4352 0.8704 1.3056 2.1760 峰面积 Y 53.94 91.40 174.31 362.08 537.46 875.39 回归方程 Y＝401.02X+7.3212，γ＝0.9999 人参皂苷 Rc（µg） 0.0970 0.1940 0.3880 0.7760 1.1760 1.9400 峰面积 Y 27.83 54.80 110.97 224.10 336.38 556.8 回归方程 Y＝287.09X-0.2352，γ＝1.0000 人参皂苷 Rd（µg） 0.0935 0.1870 0.3740 0.7480 1.1220 1.8700 峰面积 Y 44.75 83.30 166.72 337.84 503.53 836.68 回归方程 Y＝447.07X+1.3604，γ＝1.0000 结果表明： 人参皂苷 Rg1 进样量在 0.138～2.769µg 范围内，与峰面积呈良好的线性关系； 人参皂苷 Re 进样量在 0.109～2.181µg 范围内，与峰面积呈良好的线性关系； 人参皂苷Rb1进样量在 0.095～1.900µg范围内，与峰面积呈良好的线性关系； 人参皂苷 Rb2 进样量在 0.093～1.854µg 范围内，与峰面积呈良好的线性关系； 人参皂苷Rb3进样量在 0.109～2.176µg范围内，与峰面积呈良好的线性关系； 人参皂苷 Rc 进样量在 0.097～1.940µg 范围内，与峰面积呈良好的线性关系； 人参皂苷 Rd 进样量在 0.094～1.870µg 范围内，与峰面积呈良好的线性关系。 4.2.8 检出限与定量限检测限测定结果： 表 10 检出限与定量限测定结果 4.2.9 样品测定及限度确定 按确定的方法进行含量测定，结果显示：人参皂苷 序号 检出限（ ng） 定量限（ ng） 人参皂苷 Rg1 8.31 13.84 人参皂苷 Re 6.54 10.90 人参皂苷 Rb1 5.70 9.50 人参皂苷 Rb2 5.56 9.27 人参皂苷 Rb3 6.53 10.88 人参皂苷 Rc 5.82 9.70 人参皂苷 Rd 5.61 9.35 15 Rg1、人参皂苷 Re、人参皂苷 Rb1、人参皂苷 Rb2、人参皂苷 Rb3、人参皂苷 Rc、 人参皂苷 Rd 含量之和，均在 8.88～14.87%之间，因此，根据样品实际测得结果， 确定人参提取物含上述七种人参皂苷各成分之和应在 8.0%～15.0%。 表 11 西洋参提取物样品测定结果 含量测定结果（%） 序 号 批号 Rg1 Re Rb1 Rb2 Rb3 Rc Rd 总量 1 090301 0.574 2.876 3.598 0.542 0.398 2.638 2.260 13.11 2 090302 0.589 3.010 4.463 0.689 0.481 3.006 2.359 14.83 3 090303 0.668 3.502 5.966 0.921 0.622 3.887 2.886 18.74 4 090304 0.567 2.404 2.967 0.449 0.327 2.198 1.893 10.80 5 090305 0.592 3.039 4.403 0.703 0.460 3.026 2.366 14.59 6 090306 0.552 2.750 3.367 0.605 0.394 2.506 2.148 12.55 7 090307 0.572 2.863 3.502 0.615 0.395 2.591 2.232 12.77 8 090308 0.694 3.652 6.177 0.945 0.636 4.038 3.006 19.15 9 090309 0.827 2.815 7.479 0.945 0.688 4.095 2.471 19.32 10 090310 0.749 2.558 5.945 0.699 0.508 3.221 1.999 15.68 11 090701 0.708 3.715 5.720 0.966 0.595 3.836 2.800 16.38 12 090702 0.689 3.587 5.363 0.905 0.553 3.637 2.747 17.72 13 080701 0.805 3.676 8.236 1.201 0.769 4.841 2.883 22.41 14 100801 0.684 3.523 5.292 3.568 0.884 0.568 2.667 17.19 15 100701 0.732 3.865 5.972 3.982 0.969 0.614 2.918 19.05 上述实验结果显示，人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Re、人参皂苷 Rb1、人参皂苷 Rb2、人参皂苷 Rb3、人参皂苷 Rc、人参皂苷 Rd 含量之和，在 10%～22%之间， 因此，根据样品实际测得结果，确定西洋参提取物含上述七种人参皂苷各成分之 和应在 10%～20%。 16 图 2 人参皂苷 Rg1、Re、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Rf 对照品 HPLC 图谱 （色谱柱：Kinetex-C18 (2.6μm,4.6mm×50mm)） 图 3 人参提取物（090410）HPLC 图谱（色谱柱：Kinetex-C18 (2.6μm,4.6mm×50mm)） 图 4 人参皂苷 Rg1、Re、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Rf 对照品 HPLC 图谱 （色谱柱：Kinetex-C18 (2.6μm,4.6mm×100mm)） 17 图5 人参提取物（090410）HPLC图谱（色谱柱：Kinetex-C18 (2.6μm,4.6mm×100mm)） 图 6 人参皂苷 Rg1、Re、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Rf 对照品 HPLC 图谱 （色谱柱：Therm Hypersil ODS 2 5 μm,4.6mm×250mm)） 18 图 7 人参提取物（090410）HPLC 图谱 （色谱柱：Therm Hypersil ODS 2 5 μm,4.6mm×250mm)） 图 8 检出限色谱图 4.3 3. 两种方法比较： （1）从西洋参提取物样品 HPLC 色谱图中可见，除去溶剂峰，按照面积 归一化计算，人参皂苷 Rg1、Re、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd 七种成分峰面积之 和占总面积的 97%以上。 （2）从两种方法测定结果来看，由于采用 HPLC 法测定西洋参提取物中所 含七种主要有效成分的含量，即可体现所含总皂苷的含量。因此，两种方法测定 结果接近，见下表： 表 12 两种含量测定方法比较结果 序号 批号 HPLC 法测得七种成分之和（%） 总皂苷含量（%） 1 090301 低 13.11 13.45 2 090302 14.83 14.88 3 090303 18.74 19.64 4 090304 10.80 13.91 5 090305 14.59 15.14 6 090306 12.55 15.01 7 090307 12.77 13.31 8 090308 19.15 20.20 9 090309 19.32 20.33 10 090310 15.68 16.42 11 090701 16.38 19.38 19 12 090702 17.72 18.72 13 080701 22.41 23.49 14 100801 17.19 18.70 15 100701 19.05 20.85 16 090301 / 13.94 17 090901 / 15.12 （3）紫外法测定总皂苷的方法，因受显色剂加入、显色温度等因素的影响， 误差较 HPLC 法大，且不能控制各种人参皂苷成分的含量。 通过对上述两种含量测定方法比较，得出以下结论：采用 HPLC 法测定西 洋参提取物中所含七种主要有效成分的含量之和、紫外-可见分光光度法测定总 皂苷含量结果接近，其测定结果可代表所含总皂苷的含量，且方法更为准确，不 需重复测定。因此，标准正文中只列入 HPLC 法测定西洋参提取物中所含七种主 要有效成分的含量之和的方法。 5. 特征图谱的研究 为减少含量测定项目（测定八种人参皂苷含量）使用对照品种类，降低检验 成本，对特征图谱测定方法进行了研究。 特征图谱可以综合的反映一种样本的多种活性成分或特征成分，是目前公认 的控制中药或天然药物质量的有效手段。方法是在选定的实验条件下，以一种或 几种已知对照品作为参比峰，确定其它色谱峰的一种方法，其优点,可以减少对 照品的使用，减少实验成本。其缺点，由于所使用仪器死体积不同，色谱柱品牌、 长短、粒径等不同，影响色谱峰相对保留时间，进而影响结果的判断，因此，使 用上受到一定的限制。 本实验按照功效成分-人参皂苷（HPLC）测定方法实验条件，选择三根各色 谱峰分离良好的色谱柱，进行测定，计算各色谱峰相对保留时间，考察方法的可 行性。 所使用仪器、试剂试药、标准物质以及色谱条件、测定方法均同标志性成分 测定条件。 为考察特征图谱方法的适用性及重复性，实验中使用四根不同厂家生产的色 谱柱，并进行精密度试验。 20 从色谱图中可见，采用四根色谱柱，测定六组对照品混合液、18 份供试品 溶液，均体现人参提取物中共有八个特征峰，且各峰分离良好。 以人参皂苷 Rb1 作为参比峰，人参皂苷 Rg1、Re、Rd 色谱峰相对保留时间 超出均值的±5%，若范围扩大，则与相邻峰保留时间相混淆，不利于结果的判断。 以人参皂苷 Rd 作为参比峰，除人参皂苷 Rb3 外，其余色谱峰相对保留时间 超出均值的±5%，若范围扩大，则与相邻峰保留时间相混淆，不利于结果的判断。 上述实验结果表明，由于特征图谱受色谱柱品牌、长短、粒径等不同因素的 影响，在实际操作中难以通过计算各峰相对保留时间准确判断，重复性较差，因 此，未将特征图谱列入本技术要求中，仍采用 HPLC 法测定八种人参皂苷成分， 以控制人参提取物的内在质量，以保证使用提取物的有效性与均一性。 表 13 各色谱峰保留时间测定结果 批号 色谱柱 Rg1 Re Rf Rb1 Rc Rb2 Rb3 Rd 对照品 56.091 57.273 80.354 90.488 92.948 95.522 96.353 101.02 对照品 55.992 57.197 80.365 90.526 93.011 95.586 96.417 101.12 对照品 55.949 57.174 80.392 90.355 92.899 95.483 96.331 101.034 西洋参 090304 55.792 57.02 90.616 93.014 95.552 96.372 101.112 西洋参 090307 55.725 56.958 90.594 92.982 95.522 96.339 101.078 西洋参 090310 Therm 55.718 56.956 90.61 93.032 95.595 96.427 101.127 对照品 18.982 19.328 24.212 26.594 27.993 29.525 30.114 33.73 西洋参 090304 18.953 19.307 26.756 28.129 29.61 30.182 33.843 西洋参 090307 18.98 19.33 26.802 28.197 29.692 30.266 33.901 西洋参 090310 Kinetex 18.971 19.32 26.751 28.125 29.61 30.181 33.801 对照品 40.786 43.097 73.539 81.674 84.167 86.719 87.473 92.215 西洋参 090304 40.934 43.382 82.103 84.6 87.145 87.919 92.607 西洋参 090307 42.411 45.031 82.011 84.45 86.97 87.736 92.455 西洋参 090310 Agilent 41.755 44.211 81.907 84.434 86.989 87.768 92.547 对照品 Apollo 73.783 74.508 96.042 103.675 106.358 108.508 109.192 114.283 表 14 精密度试验各色谱峰保留时间 批号 色谱柱 Rg1 Re Rf Rb1 Rc Rb2 Rb3 Rd 西洋参精密度 56.191 57.38 90.989 93.373 95.894 96.903 101.462 西洋参精密度 56.305 57.482 90.971 93.361 95.903 96.726 101.507 西洋参精密度 56.133 57.329 91.054 93.448 95.448 96.814 101.573 西洋参精密度 56.254 57.439 91.084 93.476 96.038 96.865 101.683 西洋参精密度 56.503 57.651 91.016 93.405 95.938 96.757 101.538 21 表 15 各色谱峰相对保留时间测定结果（以人参皂苷 Rb1 为参比峰） 批号 色谱柱 Rg1/rb1 Re Rb1 Rc Rb2 Rb3 Rd 对照品 0.62 0.633 1 1.027 1.056 1.065 1.116 对照品 0.619 0.632 1 1.027 1.056 1.065 1.117 对照品 0.619 0.633 1 1.028 1.057 1.066 1.118 西洋参 090304 0.616 0.629 1 1.026 1.054 1.064 1.116 西洋参 090307 0.615 0.629 1 1.026 1.054 1.063 1.116 西洋参 090310 Therm 0.615 0.629 1 1.027 1.055 1.064 1.116 对照品 0.714 0.727 1 1.053 1.11 1.132 1.268 西洋参 090304 0.708 0.722 1 1.051 1.107 1.128 1.265 西洋参 090307 0.708 0.721 1 1.052 1.108 1.129 1.265 西洋参 090310 Kinetex 0.709 0.722 1 1.051 1.107 1.128 1.264 对照品 0.499 0.528 1 1.031 1.062 1.071 1.129 西洋参 090304 0.499 0.528 1 1.03 1.061 1.071 1.128 西洋参 090307 0.517 0.549 1 1.03 1.06 1.07 1.127 西洋参 090310 Agilent 0.51 0.54 1 1.031 1.062 1.072 1.13 对照品 Apollo 0.712 0.719 1 1.026 1.047 1.053 1.102 0.587 0.604 0.979 1.02 1.03 1.10 均值±5% 0.649 0.668 1.082 1.12 1.13 1.22 表 16 各色谱峰相对保留时间测定结果（以人参皂苷 Rd为参比峰） 批号 色谱柱 Rg1/rd Re Rb1 Rc Rb2 Rb3 Rd 对照品 0.555 0.567 0.896 0.92 0.946 0.954 1 对照品 0.554 0.566 0.895 0.92 0.945 0.953 1 对照品 0.554 0.566 0.894 0.919 0.945 0.953 1 西洋参 090304 0.552 0.564 0.896 0.92 0.945 0.953 1 西洋参 090307 0.551 0.564 0.896 0.92 0.945 0.953 1 西洋参 090310 Therm 0.551 0.563 0.896 0.92 0.945 0.954 1 对照品 0.563 0.573 0.788 0.83 0.875 0.893 1 西洋参 090304 0.56 0.57 0.791 0.831 0.875 0.892 1 西洋参 090307 0.56 0.57 0.791 0.832 0.876 0.893 1 西洋参 090310 Kinetex 0.561 0.572 0.791 0.832 0.876 0.893 1 对照品 0.442 0.467 0.886 0.913 0.94 0.949 1 西洋参 090304 0.442 0.468 0.887 0.914 0.941 0.949 1 西洋参 090307 0.459 0.487 0.887 0.913 0.941 0.949 1 西洋参 090310 Agilent 0.451 0.478 0.885 0.912 0.94 0.948 1 22 对照品 Apollo 0.646 0.652 0.907 0.931 0.949 0.955 1 0.507 0.521 0.823 0.850 0.880 0.889 均值±5% 0.560 0.575 0.909 0.940 0.972 0.982