高效液相色谱－串联质谱法测定水产品中的喹乙醇

实验技术与方法 高效液相色谱一串联质谱法测定水产品中的喹乙醇 曾 静 朱宽正。 王 鹏 林雁飞 胡小钟 (1．华中科技大学同济医学院，湖北 武汉 430030；2．湖北出入境检验检疫局，湖北 武汉 430022) 摘 要 ：为测定水产品中喹 乙醇的残留量，建立 了高效液相色谱 一串联质谱联用(HPLC—MS／MS)的测定方法。均 质后的试样经水提取、液 一液分配净化后 。采用ZORBAX SB—C 色谱柱，并以0．1％乙酸 +乙腈(70+30，体积分数) 为流动相，色谱分离后直接进入 串联质谱检测器。采用电喷雾正离子，多反应监测(MRM)模式检测，外标法定量。 方法的检出限为 10 ttg／kg，浓度在0．5—500 ttg／L范围内，线性良好(r=0．998 9)。添加浓度在 l0—500 ttg／kg时，不同 水产品基质的回收率在 74．3％ 一93．5％之间。相对 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 偏差(RSD)小于 5．6％。本方法检 出限低，回收率高，定性可 靠，定量准确，适合于水产品中喹 乙醇残留的检测。 关键词：色谱法。高压液相；光谱 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 ，质量；喹 乙醇；水产品 Determination of Olaquindox Residues in Aquatic Produc~ by High Performance Liquid Chromatography—Tandem Mass Spectrometry ZENG Jing，ZHU Kuan—zheng，WANG Peng，LIN Yan—fei，HU Xiao—zhong (Ton~i Medical College of Huazhong University of Science and Technology，Hubei Wuhan 430030，China) Abstract：A high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometric(LC-MS／MS)method was developed for determ ination of olaquindox residues in aquatic products．The targeted analyte was extracted from homogenized samples with water， and purified with liquid-liquid extraction．Chromatographic separation was achieved by using ZORBAX SB-Cl8 column with an isocratic mobile phase consisting of 0．1％ acetic acid and acetonitrile (70+ 30，V／V)．Analytical identification and quantification were performed using multiple reaction monitoring (MRM)with one pmcumor ion and three product ions as identifiers and electrospray ionization in positive mode．The detection limit of this method was 10 ttg／kg．It was linearly ranged from 0．5 to 500 ttg／L with the correlation coefficient 0．998 9． Th e recoveries for different matrices were 74．3％ 一93．5％ when the concentration of olaquindox ranged from 10 to 500 ttg／kg．the RSD was lower than 5．6％ ． Key word：Chromatography．High Pressure Liquid；Spectrum Analysis，Mass；Olaquindox；Aquatic Products 喹乙醇(Olaquindox)，又称 喹酰胺醇，是一种化 学合成抗菌促生长剂。因其具有广谱抗菌效果和促 生长作用，作为饲料添加剂被广泛用于畜禽及水产 品的养殖。大量生物毒性试验研究 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明，喹乙醇可 在动物体内形成残留，具有明显的蓄积毒性和 DNA 显性损伤等毒副作用 。基于可能对人体健康造成 危害，欧盟委员会 2788／98决议规定禁止喹乙醇的 使用。国内也对喹乙醇的使用量做了限制，并且为 了加强对喹乙醇的监控，先后制定了出口肉、动物饲 料中喹乙醇的检测方法 ’ 。为保证食品安全以及 我国水产品的进出口，建立水产品中喹乙醇的测量 方法是十分必要的。 目前，对于饲料、肉类以及水产品等食品中喹乙 醇的检测方法主要是液相色谱法 “ ，检出限都比 较高，无法满足国际贸易的要求。随着液质联用技 作者简 介；曾静 女 工程 路基工程安全技术交底工程项目施工成本控制工程量增项单年度零星工程技术标正投影法基本原理 师 术发展 日趋成熟，该方法被越来越多地应用于动物 源性食品中禁用药物的检测。M．R．S．Fuh等 利 用 LC—MS建立了猪肉中喹乙醇等 13种兽药的检 测方法，C．Van Poucke等 。。采用固相萃取法净化， 利用 LC—MS／MS对饲料中喹乙醇等 5种禁用的促 生长剂同时进行检测。本文针对水产品的喹乙醇残 留，建立了高效液相色谱电喷雾串联质谱(LC—ESI／ MS／MS)的检测方法。多种不同水产品的检测结果 表明本方法操作简单，回收率高，检测限低，定性可 靠，定量准确，能满足对喹乙醇的检测要求。 1 材料与方法 1．1 仪器与试剂 Agilentl100HPLC仪(美国，安捷 伦公司)，API3000三级四极杆质谱仪(美国，ABI公 司)，配有电喷雾离子源 ，HARVARD pump II针泵 ， HITACHI CD6D离心机，YAMATO涡旋混合器。HH 一 $24S恒温水浴锅(金坛市大地自动仪器厂)。 高效液相色谱 一串联质谱法测定水产品中的喹乙醇——曾 静 朱宽正 王 鹏等 维普资讯 http://www.cqvip.com 喹乙醇，纯度为 99．6％(Riede1．de公司)。将喹 乙醇用色谱纯甲醇溶解并配制成 1 mg／ml标准储备 液，再根据需要稀释成适当含量的混合标准工作液。 4℃下避光保存；甲醇、乙腈和正己烷均为色谱纯 (Scharlau公司)，实验用水为超纯水。 1．2 试样前处理 精确称取 5 g均质的试样置于 50 rnl离心管中，加入 15 rnl水，振荡混匀后，放人 60℃恒温水浴中振荡提取 15 min，取出冷却至室 温，4 000 r／min离心 10 min。移取提取液至另一个 离心管中，再向残渣中加入 10 rnl水按上述方法提 取，合并 2次提取液。取 2 rnl提取液，加入 1 ml乙 腈混匀后，4 000 r／rain离心 5 min，取清液加入 3 rnl 正己烷，混匀后，弃去上层正己烷，下层清液过0．45 m滤膜，供 LC—MS／MS分析。 1．3 色谱和质谱条件 1．3．1 色谱条件 色谱柱：ZORBAX SB—C 2．1 mln×50 Iron，3．5 ptm(Agilent，USA)；流动相 ：0．1％乙 酸 +乙腈(70+30，体积分数)；流速：0．2 ml／min；柱 温：室温；进样量：10 l。 1．3．2 质谱条件 离子源：电喷雾离子源(ESI)；扫 描模式：正离子扫描；离子源电压：5．5 kV；离子源温 度：400℃；氮气作为雾化气、气帘气和辅助气，其中 雾化气为 7 psi，气 帘气 为 9 psi，辅助 气流速 为 7 L／min。监测模式：多反应(MRM)监测方式。选择 3 对监测离子对，其中母离子为264．2，相应的特征碎片 离子分别为：212．3，177．1和246．3。监测离子对的驻 留时间(Dwell time)均为 100 Ills，去簇电压(DP)为60 V，对应的碰撞电压(CE)分别为：31 V，24 V和 20 V。 2 结果与讨论 2．1 样品前处理 样品的前处理方法对喹乙醇的 分析至关重要。根据文献报道 J，喹乙醇在热水中 溶解度很大，而在有机溶剂中溶解度较低，所以本文 以水作为提取液，采用60℃水浴加热的方法进行提 取，经与乙腈作为提取液进行比较，结果显示采用热 水作为提取液的回收率明显较高。其中乙腈作为提 取液的回收率在40％左右，而热水作为提取液的回 收率在 85％以上。对于动物源性样品，脂肪等杂质 是主要的干扰物质。由于采用热水作为提取剂，不 可避免地存在大量的水溶性蛋白质、色素等杂质，严 重影响喹乙醇 的检测。本文采用乙腈 去除蛋 白质 ， 并且加入正己烷进行净化，不仅能有效地去除提取 液中的水溶性杂质，并且具有较强的脱色作用，处理 后的提取液无色透明，过膜后可用于 LC—MS／MS分 析。因为水溶液不易浓缩处理，本试验采用部分提 取液净化后，直接进样分析的方法，不仅操作简单， 提高了检测效率，而且避免了大量使用有机试剂，减 少了对环境的污染。由于喹乙醇见光分解，整个实 验应避免阳光的直射。 2．2 LC—MS／MS分析 根据文献 的报道，本文 采用 ESI正离子电离模式。将 1 mg／L的喹乙醇标准 溶液利用针泵以 10／．tl／min流动注射的方式在正离 子模式下通过全离子扫描，找出准确的母离子峰，并 且对其进行轰击，分别找出 3个信号较强的碎片离 子，以母离子和子离子组成监测离子对，以多反应监 测(MRM)模式对待测物进行定性和定量分析。喹 乙醇的离子碎片图如图 1，其碎片结构信息与文 献 ¨“ 相同，主要的碎片离子是 m／z 212．3(丢失了 H 0 和 H 0)、mlz 246．3(丢失了 H 0)和 mlz 177．1 (丢失了c H5N和 CO )。选择丰度最强的碎片离子 组成的监测离子对 m／z 264．2／212．3用于喹乙醇的 定量 ，i『ii m／z 264．21177．1和 m／z 264 ．2／246．3用 于 其辅助定性。为了获得更高的离子强度，在多反应 监测(MRM)模式下同时对质谱条件进行优化。 为了将待测物和杂质分开，选用 ZORBAX SB— c。。色谱柱(2．1 mm×50 mm，3．5 ptm)，以不同比例的 0．1％Z 酸 +乙腈作为流动相进行试验，当0．1％乙 酸 十乙腈比例为70+30(体积分数)时，待测物和杂 质得到很好的分离，峰形对称，峰宽较窄，且出峰较 早。在优化的色谱条件下，喹乙醇的保留时间为 3 min(如 图 2)。 2．3 方法的线性范围、检出限、回收率和精密度 采用喹乙醇标准溶液直接进样，喹乙醇浓度在 0．5 ～ 500~tglL范围内具有很好的线性关系，工作曲线 方程为：Y=4 490x+1 530，其相关系数为0．998 9。以 3倍信 噪 比为检 出限 (LOD)，方 法 的检 出限为 10 t~g／k ．g。 以阴性鳗鱼和河虾样品为测试样 品，喹 乙醇的 添加水平分别为 10、100、500 ptg／kg，每个水平在相同 的实验条件下做 6个平行样，对应工作曲线法计算 每个试样的浓度，并计算回收率、相对标准偏差，结 果见表 1。 表 1 试样加标回收率和重复测定的 相对标准偏差 (n=6) 结： 显示本方法检出限低，重现性好，回收率 高，定性可靠，定量准确，适合于水产品中喹乙醇残 留量的：险测。 中国食品卫 (Mq 生 'lq' 杂 (~(／ 志13 2006年第 18卷第 5期CHINESE JOURNAL FOOD HYGIENE 一 1 J l 7，J 维普资讯 http://www.cqvip.com 1OO O 1O0 1OO ⋯ ．． · f230 2 1 248 3 16 12O 140 160 18O 200 ml= o CH． mlz 212 3 ml： 246 3 m／= 177 1 图 1 喹乙醇的分子离子裂解碎片图 3 04 4 B J _ m ln 4 图2 空白河虾样品(A)和添加浓度为500 gg／kg的 河虾样品的质量色谱图(B) 参考文献 [1] 徐韵，李兆利，陈海刚，等 ．兽药添加剂喹乙醇对水生 生物的毒理学研究 [J]．南京大学学报，2004，40(6)： 728—733． [2] SN 0197--1993．出口肉中喹乙醇残留量检验方法[s]． [3] GB／T 8381．7—2oo5．饲料中喹乙醇的测定 高效液相色 谱法[s]． [4] 欧阳华学，雷华越，汪开毓．测定饲料中喹乙醇含量的反相 高效液相色谱法[J]．分析测试学报，2OO2，21(3)：73—74． [5] [6] [8] [9] [10] 李来生，邱水平 ．高效液相色谱法测定饲料中的喹乙醇 [J]．色谱，1997，15(5)：440—441． E Roets，I Quintens，R Kibaya，et a1．Quantitative determination of olaquindox in animal feed[J]．J Planar Chromatogr，2001，14：347-349． 于慧娟 ，毕士川，黄冬梅，等 ．高效液相色谱法测定水 产品中喹乙醇的残 留量[J]．分析科学学报，2004，20 (3)：281—283． 艾晓辉，刘长征，文华．鱼组织中喹乙醇残留量高效液 相色谱检测方法研究[J]．湖北农学院学报，2003，23 (4)：266．270． Fuh M R S， Chan S A， Wang H L． Determ ination of antibacterial reagents by liquid 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