单糖薄层层析实验的改进

单糖薄层层析实验的改进 ,,张瑞英胡岚岚武金霞 ( , 河北大学 生命科学学院河北 保定071002) 。: ,摘 要单糖薄层层析是一个重要的生物化学实验常规喷雾法显色得不到清晰的图谱比较了几种单糖薄 ,,,,,层层析显色方法结果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明将显色剂加入展层剂中展层后烘干能得到清晰的色谱斑点且不同的单糖 ,,。显示不同的颜色无杂质干扰重现性好 : ; ; 关键词单糖薄层层析显色 : Q5 , 33doi: 10, 3969 / j, issn, 1672 , 4305, 2012, 05, 016: A 中图分类号文献标识码 Improvement of tthehin layer chromatography of monosaccharide ZHANG Rui ,y ing,HU Lan ,la n,WU Jin ,X ia ( College of Life Sciences,Hebei University,Baoding 071002,China) Abstract: The thin layer chromatography oofnos amccharide was veryi mportant in biochemistry exper- iments,however,clear spot osmetimes could not be observedusi ng general spraying method, In this study,several monosaccharide TLC chromogenic methods werecom pare,dthe results showed thatcl ear chromatographic spotsc ould be got throughdd inag color reagenti nto development reagent anddr ying afterd evelopment, It had a goodrep roducible and not bein terfered by thei mpurities,and different monosaccharides showedd ifferent color in this method, Key wods: monosaccharide; thin layer chromatography; colorr ,,,、、不易喷均匀显色效果不理想且雾气随空气流动 生物多糖对人体具有明显的抗病毒抗寄生虫 ,1 , 3,、。21 抗肿 瘤抗衰老等免疫调节作 用进 入 世 。易对人体造成伤害也有直接将展层后的薄层层析 ,10,,、、,,纪生物多糖的提取纯化结构及功能研究在生物 这种方法浪费试剂显色效 板浸泡到显色剂中 。学掀起了热潮而单糖分析鉴定是研究多糖的单糖 。,,果一般本研究摸索了一种显色方法操作简便不 。 R,。组成的基础工作单糖组分的分离鉴定主要有高效影响单糖的 値能得到较清晰的图谱 f ,4,,5,( HPLC) 、( GC) 、液相色谱法气相色谱法 薄层 色1,6,材料 ( TLC) 。HPLC ,谱法法 精 确 度 高但 是 样 品 的 预 ; GC ,处理要求严格法分离效率高但是需要先制 备1, 1 材料与试剂 ,,成易挥发的衍生物所用试剂需要进口且价格昂 ( 1) 、、、、单糖标样 半乳糖木糖葡萄糖阿拉伯糖,7,,。贵不利于本科实验操作薄层色谱法具有铺板 甘露糖均为分 、、,容易分析时间短材料便宜的优点一般情况下一 ,600mg,10mL ,析纯各 取 溶于 蒸 馏 水 中即 得 到 ,8,。 次实验课的课时就能得到结果60mg / mL ,、。 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 单糖溶液置于冰箱中存放备用 ,9,, 传统的薄层层析通常用喷雾的方法显色但( 2) 展层剂与显色剂 : , , , ( 展层剂乙 酸 乙 酯 甲 醇 乙 酸 水 体 积 比 JX06 ,: ( 基金项目河北 大 学 第六批教改项目 项 目 编 号 12? 3? 3?2) 15) 。 46 :显色剂 , , 4g 4mL: ,?苯 胺 二 苯 胺 磷 酸 试 剂二 苯 胺 20mL 85 %200mL 。苯胺及 磷酸溶于 丙酮 , 0. 5mL : ?茴 香 醛 硫 酸 试 剂取 茴 香 醛 和 0. 5mL 9mL 。浓硫酸加入到 的乙醇中混匀 2方法 铺硅胶板 2, 1 1 , , 图 苯胺 二苯胺 磷酸显色剂三种显色图谱 1, 2, 3, 4, 5, 半乳糖 木糖 葡萄糖 阿拉伯糖 甘露糖 1g ,254 ,,3, 4mL G 称取 硅胶 放 在 研 钵 中加 A, B, C, 喷雾显色 显色剂溶于展层剂 浸泡显色 0. 5%,,羧甲基纤维素钠向一个方向研磨混合均匀 ,,去除表面气泡后倒到干净的玻璃板上将玻璃板置 R1值几种单糖在不同方法中的 表 f 于水平桌面上多次颠振直至玻璃板上的薄层表面均 、、、。匀平整无气泡无破损及污染涂布过程采用倾 ,,。 淌法中途切勿停留或断流一定要保证均匀涂布 110? 30min,完成后于 烘 冷却后立即使用或置干燥 器 。中备用 2, 2传统薄层层析法 ( 1) : 点样点样前用铅笔在距离活化的硅胶板底 2cm ,。边 处画一细线并轻轻画出点样的起始点标记 5L ,点样时用微量取液器量取 μ标准单糖液:R注 值是样品中某成分在纸层析或薄层层析特定溶 f 分 。剂系统中移动的距离与流动相前沿的距离之比 ,, 多次点加到 板 上一 般 为 圆 点点直径一般不大于 3, 2, 茴香醛 硫酸显色 5mm。 ( 2) : 展层将 点好样品的薄层板置于薄层层析 ?,? = 3? ( 2 ? ? ) ,缸中用新显色配 制剂 的 展 层 剂 乙 酸体积比 乙 酯 采用倾斜甲 醇 上水 12?3? 乙 酸 ,0, 3 :行法 层 析将薄层板的下端浸在展层剂中 0. 5cm,,展层剂借毛吸作用上行至展层剂距薄层板 1cm 。。上的上端约 时取出放置通风处自然干燥 ( 3) : ,显 色用 喷 雾 剂 喷 雾然后将硅胶板置于 95? 25min,。干燥 取出冷却至室温即可 ,95? 浸泡在显色剂中然后将硅胶板置于 干燥 2 , 图 茴香醛 硫酸显色三种显色图谱 25min,。取出冷却至室温即可 1, 2, 3, 4, 5, 半乳糖 木糖 葡萄糖 阿拉伯糖 甘露糖 , B, C, A2, 3喷雾显色 显色剂溶于展层剂 浸泡显色 优化薄层层析法 , ,以茴香醛 硫酸为显色剂喷雾时各斑点扩散 ( 1) : 。点样方法同前 ,。, 严重很难得到清晰的图谱浸泡法显色时只有木( 2) : ,展层展层方法同前只是将一定量的显色 ,。糖斑点清晰其余几种单糖的斑点与背景很难区分 10。,1?剂加入到新配制的展层剂中体积比为 ,将显色剂加入展层剂展层后显色各单糖斑点不扩 ( 3) 95? 25min,: 显色将硅胶板置于 干燥 取出 ,。 散图谱清晰。 冷却至室温即可 R,,比较三种方法中几种 单 糖 的 值基 本 一 致 f 3结果与分析 2 。。不影响单糖鉴定显色图谱如图 所示 3, 1 , , 苯胺 二苯胺 磷酸显色 4结论 ,co ,MM A ,co ,MA H) ,P( AA ,。元共聚物 的溶解 科学研究能力取得了很好的教学效果 pH 4, 2 3 ) 。pH( 沉淀临 界 值 在 附 近 见 图 而 且 当 Reference) s: ( 参考文献 3, 8 ,,pH值为 时沉淀已趋完全表明共聚物对溶液 ,1,,,,, ,郑净植胡建柏正武等优化应用化学专业实验培 养 学 。pH 值的变化有较为敏感的特性当溶液 值大于临 ,J,, 2008,27( 10) : 3 , 5,,生创新能力实验室研究与探索 ,, 界值时聚丙烯酸在溶液中发生电离而使聚合物溶2,,,,, pH ,张青松查刘生马敬红等和温度双重敏感高分子凝 ; pH ,,解当溶液 小 于 临 界 值 时电 离 作 用 消 失高 分 ,J,, 2007,21( 5) : 44 , 52,,胶的最新研究进展材料导报 ,,,, pH / ,3,王欣宇朱秀芳韩颖超等温度双重敏感高分子水凝 子链之间的氢键及骨架间的疏水作用使高分子链团 ,J,, 2007( 8) : 32 , 36,,胶的合成及性能武汉理工大学学报 。聚而发生沉淀 ,4,,,,, 林鹏冯建军王艺磊等两种环境敏感高分子在相分离免疫 ,J,, 2009,67 ( 23 ) : 2703 ,,分析中的 比 较 研 究化 学 学 报 2708, ,5,,,, pH 吴蓓蓓商云岭邬 建 敏值敏感相分离特性 的 蛋 白 质 酶 ,J,, 2011,39( 1) : 12 , 16,,解试剂研究分析化学 ,6,,,,, 陈霞刘潇赵光辉等智能型高分子载体的设计与制备及 ,J,, : 2010,24( 12) : 130 ,其固定化酶的研究进展材料导报 139, ,7,,,,, pH , 林鹏冯建军邹志华等控制相转变分离 荧光免疫分 ,J,, ,2008 ( 5 ) : 695 ,析嗜水 气单胞菌外膜蛋 白分 析 化 学 698, ,8,,,, pH 柏正武卓仁禧周宜开一种 敏感相分离高分子在免疫分 ,J,, 2004,20( 2) : 165 , 170,,析中的应用离子交换与吸附 ,9,,,,, ( 2张俐娜薛奇莫志深等高分子物理近代研究方法 第 3 pH 图 共聚物溶液透过率与 关系 ) ,M,, : ,2006,版武汉武汉大学出版社 4结语 ,10, , pH ,,,王欣宇朱秀芳韩颖超等敏感高分子水凝胶的合成 ,J,, 2007,26( 5) : 918 , 925,,及性能研究硅酸盐通报 pH 、 该综合实验 涉 及 敏感高分子的设计合成 。结构表征及性能测定几个环节从我们在应用化学 2012 , 05 , 02: 收稿日期 专业大三或大四本科生中连 续多年的教学实践来 : ( 1968) ,,,,,作者简介郑净植女河南唐河县人博士副教 授 ,看该综合实验的开设提高了学生从功能高分子的 主要从事应用化学专业的教学及聚合物复合材料 ,设计合成到表征的系统综合实验的能力加强了学 的研究。 欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍 J,, 2008,14 ( 6 ) : 17,,糖中的单糖组成中国实验方剂学杂志 ( 46 )上接 页 , 18, 。 也避免了喷雾可能对人体造成的伤害与比浸泡法, 7 , ,,,, TLC 颜军郭 晓 强李 晓 光等快速分析多糖的单糖组成 ,,。相比操作简单又节约大量试剂这种改进对单糖 ,J,, 2006,27( 12) : 603 , 604, ,,食品科学 R,,的 值无影响适合于学生操作是一种简便有效 f ,8 ,,,,, 张桂李俊英陈学武等薄层层析法测定纤维素材料水解液 。的方法 ,J,, ,2002,38 ( 2 ) :中混合糖的研究理 化检验一化学分册 81 , 84, ( Reference) s: 参考文献 , 9 , ,,,, ,M,,武金霞张贺迎张瑞英等生物化学实验原理与技术 1,,, ,J,, 2002( 5) : 33 ,35,,,谭周进谢达平多糖的研究进展食品科技 : 2005: 28 , 31,,保定河北大学出版社 , 2 , ,,, 张艳萍俞远志张虹气相色谱分析生地黄多糖的单糖组成 , 10 ,,,,, 张真庆于广利赵峡等几种糖醛酸及其寡糖的薄层层析 J,, 2009,34( 4)419 , 422,,,: 中国中药杂志及其含量 ,J,, 2005,33( 12) : 1750 , 1752,,分析分析化学研究简报 , 3 ,,, ,J,, ,宁书年张桂生物多糖类物质对人体的作用食品科学 2005,26( 9) : 613 , 614, 2012 , 04 , 18: 收稿日期 , 4 ,,, ,J,, 刘占峰孙汉文多糖的化学修饰研究进 展河 北 大 学 学 : 2012 , 07 , 05修改日期 2005,25( 1) : 104 , 108,,报 1969 ,) ,,,,,: ( 作者简介张瑞英女河北衡水人大专实验师 ,5 ,,,,, HPLC ,J,, 马晓丽孟磊孙莲等分析大蒜多糖中的单糖中 。主要研究方向为生物活性物质的提取纯化 2009,26( 7) : 585 , 587,,国现代应用药物学杂志 ,,,, , 6 ,刘柳李莉张庆林等微晶纤维素薄层色谱法分析荨麻多