六孔板中接种的细胞为什么密度不均

六孔板中接种的细胞为什么密度不均六孔板中接种的细胞为什么密度不均六孔板中接种的细胞为什么密度不均, 字体: 小中大 | 打印发表于: 2012-4-29 17:41 作者: @STAR@ 来源: 分析测试百科网查看完整版本请点击这里: [求助]六孔板中接种的细胞为什么密度不均, 最近用六孔板养了一批mMSCs细胞，传代时就发现每个孔中的传代细胞大都集中在中央区域，边缘区域密度较小，吹打后也不见效果。第二天细胞贴壁后，中央区域细胞密度几近100%融合，而周边区域较稀少。到了下午，有数个孔中的中央区域的贴壁细胞呈大片脱离而飘起，不知...

六孔板中接种的细胞为什么密度不均六孔板中接种的细胞为什么密度不均, 字体: 小中大 | 打印发表于: 2012-4-29 17:41 作者: @STAR@ 来源: 分析测试百科网查看完整版本请点击这里: [求助]六孔板中接种的细胞为什么密度不均, 最近用六孔板养了一批mMSCs细胞，传代时就发现每个孔中的传代细胞大都集中在中央区域，边缘区域密度较小，吹打后也不见效果。第二天细胞贴壁后，中央区域细胞密度几近100%融合，而周边区域较稀少。到了下午，有数个孔中的中央区域的贴壁细胞呈大片脱离而飘起，不知何故。请有经验的老师指点一下。谢谢～查看完整版本请点击这里: [求助]六孔板中接种的细胞为什么密度不均, 我也来说两句查看全部回复最新回复 , plaa (2012-4-29 17:41:42) 说真的还比较怪～一般会边缘比中央密，原因:1，边缘效应，2，6孔板中央微凸起。 , remenb (2012-4-29 17:42:00) 1、铺板后可以摇晃几下，通常上下晃7,8次，停一下待液面静止，左右再晃7,8次，如果不放心，还可以左上右下方向、右上左下方向斜的再晃晃，晃的幅度要大一点，液面至少要到孔壁高度的一半，然后在超净台里静置5,10分钟，再小心地移到培养箱。这招也是园里的高手教的，试了发现效果很好，分享。 2、铺板次数多了，手法好的话，也可以用TIP头匀速放液划Z字型，均匀铺到孔里，不晃，静置数分钟再移到培养箱。现在发现6孔板是所有板里最好铺的了，呵呵。 , shenkunjie (2012-4-29 17:42:24) 你的板可能有问题，一般会边缘比中央密，边缘效应 , @STAR@ (2012-4-29 17:42:40) 谢谢各位老师的指点，我试试看。有老师分析认为，我的板子可能有问题。可是我在消化的过程中，滴加胰酶时(每孔加胰酶不到0.1ml)发现胰酶液体从滴加液体的孔中央向周边扩散。最后，周边液体明显壁中央区域多。这能说明板子有问题的可能性不大吗,另外，我曾经试着在镜下用载物台快速移动来混匀液体，发现细胞不单没有混匀，反而有向中央移动的趋势。 , any333 (2012-4-29 17:42:58) 要晃到感觉培液快洒出来了，剧烈一点。晃得温柔确实会堆在中间的。 , yes4 (2012-4-29 17:43:17) 可以将第一个孔加入少量无血清培养基(血清会起泡沫)，晃动浸润整个孔底，然后用移液枪或吸管吸至第二孔，同样方法浸润孔底，其它孔依次类推，这样整个孔底都是湿润的，细胞悬液会平铺在整个孔底，加细胞悬液的时候可以避免加在中间细胞多，周边细胞多中间少的现象，细胞分散较均匀，加完细胞后要放工作台静置一下。 , zwsyrt (2012-4-29 17:43:38) 减轻边缘效应:先在孔里加适量的培养液，晃动铺满孔底部。关闭风机，用巴士管吸取适量消化好的细胞悬液均匀的滴加在孔里的不同点，盖上盖子，十字形晃动几下，静置10分钟(具体时间可以依据细胞沉降特性定)，放入培养箱就可以了。 , orangecake (2012-4-29 17:44:21) 加细胞的时候不要只加在中央，因为从枪头打下去的时候细胞就集中在枪头落下的位置。各点均匀加样。如果发现集中在中央，那就用手掌拍打培养板，十字方向。注意拍打的时候不要把培养液拍出来了 , 66+77 (2012-4-29 17:44:51) 我的细胞也是密集在中央呢，下次也试一下。 , qhyu (2012-4-29 17:45:23) 我总结了以上各位老师的说法，现在好多了。但还是有点向中央集中。我的做法是:加液时从各个点均匀加液体，在操作台里静置几分钟，小心移到镜下观察。若不均匀则十字晃动十几次，静置后待细胞大多数沉淀再观察，自己满意后再移到培养箱里。四个小时后细胞大都已贴壁，就知道铺板密度均匀否。现在心里有底了，直接均匀加液后在培养箱门口十字晃动，置入箱内，第二天看时，细胞均匀度基本满意，但还待再提高。下面是我用此方法铺板后第二天的细胞照片。这是六孔板的同一个孔的两个视野。密度大的是中央区。 42699878.snap.jpg , qhyu (2012-4-29 17:45:46) 这是下一张，再请各位老师指点。 15304774.snap.jpg , 3648755 (2012-4-29 17:46:04) 不错，上面方法可以试一下。 , 3648755 (2012-4-29 17:47:28) 六孔板之所以出现中央聚集地效应是因为在铺好后出现震动。如果不信可以做个小的实验。而振动源很多，例如在开了风机的超净台中，在你看它散落情况的来回搬运的路上，等等等等，这些都是震动的来源。只要你能看到培养基页面的波纹，那么里面的细胞一定会向中央聚集。我的做法是在加入细胞后(不是均匀点样也没问题)，手敲培养板每个边数次，一边敲打一边向孵箱走，在放入孵箱的同时停止敲打。敲打不需很大力，也不需很快频率，目的是让它们分散。然后等几个小时再去观察，一定是分散的比较均匀的。当然前提是你的孵箱没有震动情况。(之前孵箱与超净台比邻，虽然震动很轻微，但是还是有聚集情况发生。) , qhyu (2012-4-29 17:48:38) 看你的铺板方法比较简单。但有点领会不到你的手法真谛。‘手敲培养板每个边数次’是用食指弹敲, 我现在熟练了，也不用注意均匀加液体了，加好培养液后在培养向门口十字晃动十几次后放入培养箱内。第二天看时非常均匀。另有一个问题，请老师们指点。下面这个图片是MSC第三代第二天，这种细胞状态及密度能否用来做转染, 70207224.snap.jpg 查看全部回复我也来说两句查看完整回复请点击这里: [求助]六孔板中接种的细胞为什么密度不均, 分析测试百科网 | 仪器谱 | 快捷面板 | 站点地图 | 法律声明 | 关于我们 | 点击这里,改善您的体验 | 友情链接 | 联系我们高亮链接 Copyright ? 2007 ANTPedia, All Rights Reserved 京ICP备07018254号电信与信息服务业务经营许可证:京ICP证110310号

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